猪等孢球虫的致病性及生活史的研究

猪等孢球虫能致仔猪球虫病,接种２０万孢子化卵囊后３ｄ出现腹泻,第４ｄ水泻,仔猪脱水消瘦,死亡率１５％,接种后５ｄ排卵囊,持续５ｄ,显微病变见肠绒毛萎缩,局部粘膜糜烂与溃疡,并出现纤维素性坏死性肠炎,猪等胞球虫的发育史包括２代无性生殖和１代有性生殖,多寄生于空肠,回肠,感染后３６ｈ出现第１代裂殖体,８４ｈ出现第２代裂殖体。有性阶段出现在感染后９６ｈ,１０８ｈ出现未成熟卵囊,１２０ｈ结肠粪中检出卵囊。     

河南省猪等孢球虫的分子变异规律研究

[目的]掌握河南省猪等孢球虫的分子变异规律。[方法]从河南省豫东、豫南、豫西、豫北及豫中地区的部分规模化猪场采集粪便样品,进行猪球虫卵囊的分离与纯化;从分离到的8株猪球虫分离株中提取核酸并进行测序,并与猪等孢球虫扩增株基因序列及其他相关原虫基因序列进行比对。[结果]河南省不同地区的8个猪球虫株均为猪等孢球虫,并且没有明显遗传差异。I.suis与其他7种原虫差异较大,不属于同一个生物型,同一种动物所感染的不同种类原虫之间的同源性较低。[结论]该研究结果可为有效预防和控制仔猪球虫病提供科学依据。     

猪等孢球虫纯种卵囊扩增及生物学特性研究

应用单卵囊分离技术,获得猪等孢球虫纯种卵囊,给6头3日龄长大二元仔猪每头经口一次人工感染30个纯种猪等孢球虫孢子化卵囊,收集纯种后代,再对6头3日龄长大二元仔猪每头人工感染2 000个孢子化卵囊继代扩增.观察人工感染仔猪的排卵囊规律包括潜隐期、显露期、排卵囊高峰期及每克粪便中卵囊数（OPG值）和仔猪感染后的临床症状,进行了扩增卵囊的孢子化过程及形态结构观察和显微照像.结果表明,感染30个猪等孢球虫孢子化卵囊的仔猪最早在感染后第8d（8 days post-inoculation,DPI 8）从粪中检出卵囊,排卵囊高峰期在DPI 17～21,持续4～5 d,显露期15～18 d;感染2 000个猪等孢球虫孢子化卵囊的仔猪最早在DPI 5从粪中检出卵囊,排卵囊高峰期在DPI 8～13,持续4～6 d,显露期7～13 d.潜隐期、显露期、OPG值与感染剂量存在相关关系,即感染剂量越小,潜隐期越长,显露期越长,OPG值越小;反之亦然.感染30个卵囊的仔猪无临床可见病征;感染2000个卵囊的仔猪呈现腹泻甚至黄色水样腹泻等明显症状.常规培养新收集的猪等孢球虫卵囊,2 h时胚孢子开始分裂,8 h分裂成2团,12 h形成2个孢子囊,20h开始形成子孢子并可见内残体,最早26 h卵囊完全孢子化;72 h时孢子化率达50%,96 h达80%.本试验扩增和继代扩增所获球虫卵囊,与亲本和文献报道的猪等孢球虫生物学特性相一致.     

猪等孢球虫感染仔猪血液生理生化指标动态变化

应用纯种猪等孢球虫(Isospora suis)孢子化卵囊人工感染9头6日龄仔猪,检测了感染前1 d和感染后1,3,6,9,11 d时血液生理生化指标.结果表明,仔猪感染 I.suis后,白细胞数在感染后1 d开始增多,11 d达最高;红细胞在感染后3 d开始减少,9 d最低,11 d时恢复到感染前水平.血清丙氧酸氨基转移酶活性逐渐升高,感染后11 d时达最高值;天冬氨酸转氨酶感染后6 d升高并达到最高;感染后1 d碱性磷酸酶活性下降,11 d最低;血清乳酸脱氢酶、γ-谷氧酰转肽酶、α-羟丁酸脱氢酶活性均呈下降趋势,但无显著差异.感染后1 d时白蛋白含量下降,至11 d恢复到正常水平;球蛋白含量持续下降,但差异不显著.血清葡萄糖含量升高但无显著变化.感染后1～3 d时血清尿素氮含量降低,之后逐渐升高,至11 d时达最高;尿酸在感染后1～3 d升高,之后持续下降,至11d时最低.血清总胆固醇持续降低;甘油三酯在感染后1～9 d升高,11d时恢复到感染前水平.血清K 含量在感染后持续降低,但差异不显著.嗜中性白细胞,单核细胞,血红蛋白含量,红细胞压积,总蛋白含量,Na',Cl-,Ga2 .Mg2 含量均无明显变化.     

猪等孢球虫PCR诊断方法的建立

参照GenBank收录的Isospora suis 18SrRNA基因全序列(U97523),利用引物分析软件Oligo 6.57和Primer Premier 5.0设计了一对引物(上游引物:5''-tcctgcgagtactcatatgc-3'';下游引物:5''-gttcagc-tacgcataccttg-3''),首次扩增出猪等孢球虫分离株的18SrRNA基因序列,结合GenBank上登录的相关原虫序列,用DNAstar4.0软件比较其同源性,经Clustalx1.81序列比对,Paup4.0、Treeview3.0、Phylip种系发育关系软件分析后,证实该分离株为猪等孢球虫,并且河南不同地区之间的猪等孢球虫没有明显遗传差异。     

孔雀球虫种类调查研究

对郑州动物园15只孔雀（pavo)的粪便进行了检查，结果发现它们主要感染鸟等孢球虫Isospora Iacazei Labbe,1893；偶见有梅氏艾美尔球虫Eimeria mayurai Bhatia et Pande,1966和曼德勒艾美尔球虫E.mandali Banik et Ray1964。对这些球虫已孢子化卵囊作了描述、摄影绘图，并列出了检索表。     

猪等孢球虫纯种株的建立及其生物学特性研究

从哺乳仔猪的腹泻粪样中分离出等孢球虫卵囊,感染仔猪建立球虫纯种株.通过卵囊形态结构观察与18S rRNA PCR鉴定,鉴定该球虫分离株为猪等孢球虫.将6只24日龄断奶仔猪分为2组,分别感染4×102和104个孢子化卵囊,观察仔猪的临床表现及虫株的潜伏期、显露期和卵囊产量.结果表明,感染4×102个卵囊后仔猪未出现腹泻症状,感染104个卵囊后仔猪出现腹泻且持续6 d.感染4×102个孢子化卵囊时,潜隐期为5 d,显露期为7 d,每个卵囊产出5.72×103个卵囊;感染104个孢子化卵囊时,潜隐期为5 d,显露期18 d,每个卵囊产出6.41×102个卵囊.由此可见,该株猪等孢球虫对仔猪具有致病性,可用于构建猪等孢球虫病动物模型及其疾病学研究.     

鸡饲料中添加红景天预防柔嫩艾美尔球虫的效果

[目的]为了探明红景天对柔嫩艾美尔球虫预防效果,对于发展养鸡业提供一定的指导意义.[方法]选12日龄100只商品代雏鸡随机分为5组,阴性对照组、阳性对照组、1.5％红景天组、1.0％红景天组及0.5％红景天组.14日龄时,除阴性对照组不攻虫外,其余4组分别口服接种4000个柔嫩艾美尔球虫(Eimeria tenella)孢子化卵囊.21日龄剖杀,同时测定所有鸡只的增重、存活率、盲肠病变分值、卵囊产量以及抗球虫指数(ACI).取各试验组鸡只的盲肠进行病理组织学观察,采集血清并测定相关的细胞因子.[结果]饲喂红景天的鸡在增重、存活率、盲肠病变分值、卵囊排出量以及ACI等指标上均优于阳性对照组,且低剂量组效果最好;在饲料中添加红景天可以显著降低感染鸡球虫后雏鸡血清中的白介素2 (IL-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和提高血清IgG的含量.[结论]红景天对感染柔嫩艾美尔球虫的雏鸡有一定的预防作用.     

抗球虫中草药添加剂抗鸡柔嫩艾美尔球虫的研究

为研究中草药添加剂对鸡柔嫩艾美尔球虫的抗球虫效果, 将14日龄的鸡150只,随机分为阴性对照组,阳性对照组,1%、2%和5%中草药添加剂组。对照组饲喂基础日粮,给药组在基础日粮的基础上分别添加1%、2%和5%中草药添加剂。除阴性对照组外,每只鸡接种孢子化艾美尔球虫卵囊5×10⁴个。根据成活率、相对增重率、卵囊值、病变计算抗球虫指数,并对肠道分离的球虫卵囊进行了体外的孢子化培养,评价对球虫卵囊孢子化的抑制作用。结果显示, 2%中草药添加剂抗球虫指数为169,对体外卵囊孢子化抑制作用最高。     

无角多赛特绵羊球虫感染情况和种类调查初报

应用饱和盐水漂浮法和麦克马斯特法对河南某种羊场新引进的82只1岁左右无角多赛特绵羊球虫感染情况和种类进行了调查,结果表明:10圈绵羊均感染球虫,感染率28.57%￣100%,平均为84.2%(69/82);多为2￣5种球虫混和感染;平均OPG值为839.03(200￣4200)。共检出11种艾美耳球虫,分别是:韦不理吉艾美耳球虫(Eimeria weybridgensis)、巴库艾美耳球虫(E.bakuensis)、小型艾美耳球虫(E.parva)、类绵羊艾美耳球虫(E.ovinodalis)、颗粒艾美耳球虫(E.granulosa)、槌形艾美耳球虫(E.crandllis)、阿撒他艾美耳球虫(E.ahsata)、浮氏艾美耳球虫(E.faurei)、贡氏艾美耳球虫(E.gon-zalezi)、爱缪拉艾美耳球虫(E.aemula)、苍白艾美耳球虫(E.pallida),其中前4种为优势虫种。用Miaspro图象分析处理系统软件对各种卵囊进行了测量,并进行了显微照相和形态描述。     

水貂球虫感染情况调查

为了解水貂球虫的感染种类和流行情况,对河北省某水貂养殖场的469份粪便样品进行检查,并对发现的水貂球虫卵囊进行形态学观察.结果表明,总感染率为34.33%(161/469).其中,白貂感染率为34.33%(80/233),灰貂感染率为56.25%(27/48),黑貂感染率为28.72%(54/188).发现7种水貂球虫,分别为海波艾美耳球虫(Eimeria hiepe)、臭猫等孢球虫(Isospora eversmann)、莱德莱威等孢球虫(I.laidlawi)、貂艾美耳球虫(E.furo-nis)、伊克蒂德艾美耳球虫(E.icidea)、1个艾美耳属未定种球虫(Eimeriasp.)、1个单孢子囊球虫.     

郑州动物园鹤球虫感染调查

为了解鹤球虫的感染种类和流行情况,对郑州市动物园5个品种的圈养成年鹤采集34份粪便样品进行检查.结果表明,球虫总感染率为35.29%,平均感染强度(OPG)为2.08×104.发现有3种球虫寄生于鹤,分别为鹤艾美尔球虫(Eimeria gruis)、瑞氏艾美尔球虫(Eimeria reichenowi)和拉氏等孢球虫(Isospora lacazei).     

mRNA差异显示PCR的研究进展

mRNA差异显示PCR技术是在基因转录水平上研究差异表达和性状差异的有效方法之一,该方法在生物的发育、性状和对各种生物、理化因子作用时应答过程基因表达的研究中应用十分广泛,笔者简述了mRNA差异显示PCR技术的基本原理、技术改进以及此技术在球虫抗药性研究中的应用。     

柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)小配子发育超微结构的观察

利用透射电镜对柔嫩艾美耳球虫小配子发育的超微结构进行了观察 小配子母细胞和大配子母细胞于相邻的宿主细胞内相伴产生 ,系由末代裂殖子侵入后 ,长大变圆而形成 小配子的形成为直接分化型 首先细胞核分裂为多个 ,随后细胞核向周边移动 ,随之近核处限制膜外突 ,临近处限制膜下陷 中心粒在核上方形成并发育为基粒、鞭毛中的微管和附着微管 ,早期形成的小配子仍与小配子母细胞的残体相连 成熟小配子与残体分离 ,外型呈香蕉状 ,外被单位膜 ,内有一电子结构十分致密的细胞核 ,核头端侧面有一个巨大线粒体 ,小配子有鞭毛 2根 ,每根鞭毛内有微管 ,为 9+2结构 ,附着微管至少 6根 ,这些微管均起始于基粒     

柔嫩艾美耳球虫（Eimeria ternlla）小配子发育超微结构的观察

利用透射电镜对柔嫩艾美耳球虫小配子发育的超微结构进行了观察。小配子母细胞和大配子母细胞于相邻的宿主细胞内相伴产生,系由末代裂殖子侵入后,长大变圆而形成。小配子的形成为直接分化型。首化细胞核分裂为多个,随后细胞核向周边移动,随之近核处限制膜外突,临近外限制膜下陷。中心粒在核上方形成半并发育为基粒、鞭毛中的微管和附着微管,早期形成的小配子仍与小配子母细胞的残体相连。成熟小配子与残体分离,外型呈香蕉状,外被单位膜,内有一电子结构＋分致密的细胞核,核实端侧面有一个巨大线粒体,小配子有鞭毛2根,每根鞭毛内有微管,为9＋2结构,附着微管至少6根,这些微管起始于基粒。     

鸡球虫的药敏试验

试验检测了采自海南省文昌鸡主要养殖地区的7种艾美耳球虫对5种常用抗球虫药的敏感性。根据最适抗球虫活性百分率(POAA)、病变记分减少率(RLS)、相对卵囊产量(ROP)和抗球虫指数(ACI)4项指标进行综合判定。结果表明,海南省文昌鸡主要养殖地区的鸡球虫对血球净、球虫净及高效球虫药呈现完全抗药性,而其对百球清和拉沙利药物没有产生抗药性,提示目前在海南省文昌鸡主要养殖地区应交替使用百球清和拉沙利药物,慎用或停用血球净、球虫净及高效球虫药。     

柔嫩艾美耳球虫卵囊形成的超微结构

对柔嫩艾美耳球虫卵囊形成的超微结构进行了观察。大配子体系由末代裂殖子侵入盲肠上皮细胞后,长大变圆而形成。大配子体发育、大配子形成、受精、卵囊形成均在带虫空泡内进行,大配子体发育过程的早期,微线、棒状体、椎体、极环等组成的顶复合器消失,随之,首先在大配子体内部形成大量的成囊体 2,成囊体 2有电子稀疏的杆状结构组成,成囊体 2为圆形,外被一层单位膜,结构比较明显,但表面不光滑;成囊体 1较成囊体 2形成晚,其组成成分电子结构十分致密,它也呈圆形,而且表面十分光滑,外被一层不明显的膜;在成囊体形成的同时,支链淀粉和脂肪体也逐渐形成;大配子体和大配子外被单位膜,中央有一个细胞核,核仁不十分明显。卵囊壁形成起始于大配子受精以后,成囊体移向被膜,并且集中于被膜下,首先,成囊体 1解聚,在被膜下形成一层卵囊壁,随后,成囊体 2解聚形成又一层卵囊壁,最后,在内部的合子膜形成第五层囊壁,卵囊形成以后,细胞核位于细胞中央,细胞内有大量的支链淀粉和脂肪体