基于InDel标记的斑节对虾早期性别鉴定方法的建立

为分辨斑节对虾(Penaeus monodon)发育早期的性别,利用改良的插入/缺失(InDel)标记追踪了从受精卵、无节幼体、溞状幼体、糠虾幼体、仔虾后1 d(PL1)、仔虾后30 d(PL30)及亚成虾个体的性别,建立了测序和荧光定量PCR熔解曲线的检测方法。结果表明,InDel标记可扩增获得雌雄特异性序列,用测序法判定亚成虾性别的结果与外部观察结果一致,准确率达100%,对受精卵、无节幼体、溞状幼体及糠虾幼体均可得到雌雄特异性序列;进而建立了基于SYBR Green实时荧光定量PCR(Quantitative real-time polymerase chain reaction,q RT-PCR)熔解曲线的快速鉴定斑节对虾性别的方法,其中雄性特异序列的熔解温度(Melting temperature,Tm)为(79.10±0.10)℃,雌性为(78.45±0.20)℃,通过特异的熔解曲线可准确区分PL30、亚成虾和无节幼体Ⅵ期个体,准确率可达96.3%以上。     

2003年天津及周边地区南美白对虾病毒性疾病的检测

采用随机取样临床观察和实验室PCR检验技术相结合的方法检测天津及周边地区养殖的南美白对虾类白斑杆状病毒WSBV(或WSSV)[1]和桃拉病毒TSV的感染情况。检测WSBV215例,检出率为31 2%,4月份幼体、仔虾阶段,检出率最高为80 95%,其次为7月份仔虾和成虾养殖期,检出率为58 33%。检测TSV67例,检出率为0%。目前天津地区南美白对虾养殖中流行的主要病毒病为由WSBV感染引发的白斑综合症。因此,加强苗种检疫,切断病毒传播途径是非常必要的。     

用DNA斑点杂交法检测对虾及其饵料和环境生物携带白斑综合症病毒状况的调查

于1996-1998年采用DNA斑点杂交法,完成了共计836份养殖对虾,213份对虾饵料和环境生物样品的检测。结果显示,对虾在每年的4-10月都可检测出白斑综合症病毒（WSSV）,6月出现最高峰,阳性检出率达到42.6%;其次,为7月和5月,分别达31.6%和24.5%。在对虾不同生长阶段（包括亲虾、各期幼体、仔虾、幼虾及成虾）均可检出WSSV,其中以仔虾的带毒率最高,达36.4%,其次为糠虾幼体,达34.6%。体长范围1.1-2.0cm的仔虾阳性率最高,其次体长为5.1-6.0cm的幼虾样品。检测的中国对虾样品（625份）带毒率为16.8%,日本对虾样品（211份）带毒率为45.0%。对虾主要饵料及环境生物类群包括鱼类、虾类、蟹类、桡足类、端足类、沙蚕、卤虫均可检出WSSV,其中小型虾类、端足类、桡足类、蟹类样品的WSSV检出率均高于20%。     

复方三氯异氰尿酸对斑节对虾幼体的毒性试验

用静水试验法研究了复方三氯异氰尿酸对斑节对虾幼体的急性毒性.试验设8个浓度组和1个对照组:0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5和4.0(×10-6)每组3个平行.结果表明,24hLC50、48hLC50和安全浓度(×10-6)分别是无节幼体:1.58、1.35和0.29;蚤状幼体:1.71、1.24和0.2;糠虾幼体:2.2、1.46和0.24;仔虾:3.23、2.62和0.53.幼体对试验药物的忍受力由大到小分别是仔虾、无节幼体、糠虾幼体和蚤状幼体.试验结果可为斑节对虾育苗安全用药提供参考.     

A3α肽聚糖对凡纳对虾幼体生长及抗病毒感染力的影响

用含不同量的A3α肽聚糖(PG)(0.005%、0.01%、0.1%)的幼体饵料投喂凡纳对虾幼体,另在育苗水体中添加不同水平(0.005mg·mL-1、0.01mg·mL-1、0.05mg·mL-1)PG浸浴并以投喂不添加PG的幼体饵料的实验组作为对照,另设投喂活饵的实验组作参考,分别考察Z1-M1期、M1-PL1期、Z1-PL1期幼体的成活率,M1期、PL1期幼体体长,PL1期幼体体重,另外,PL1期仔虾经7d饲养后,检测体内酚氧化酶(PO)活性,并用白斑综合症病毒(WSSV)料投喂感染。结果显示:与投喂不添加PG幼体饵料组相比,在Z1-M1期,活饵组、0.01%PG添加量的幼体饵料组、0.005mg·mL-1PG的浸浴组幼体的成活率有极显著(P<0.01)提高,而在Z1-PL1、M1-PL1期,各实验组除0.05mg·mL-1浸浴组外均有极显著地(P<0.01)提高;各实验组除0.01mg·mL-1、0.05mg·mL-1PG浸浴组外,M1期幼体体长、PL1期幼体体重也有显著(P<0.01)增长,且各实验组PL1期幼体都有极显著(P<0.01)增长;各实验组仔虾PO活力均有极显著(P<0.01)提高;各实验组除0.1%PG添加量的幼体饵料组外,感染WSSV后仔虾的存活率有不同程度地提高。     

弧菌对斑节对虾虾苗致病性的研究

本文用6种弧菌对斑节对虾虾苗进行致病性试验。发现6种弧菌对各阶段幼和仔虾都有很强的致病作用。其中,对蚤状幼体致病性最强,其次是无节幼体、糠虾和仔虾。     

提高斑节对虾人工育苗幼体成活率试验

1998年闽南地区斑节对虾人工育苗幼体成活率普遍很低。作者结合多年的斑节对虾育苗生产经验,采取综合的技术措施,进行提高幼体成活率的试验。从无节幼体到仔虾幼体后期(P_(10)—P_(16)),试验的总成活率为42.1％。     

罗氏沼虾白斑综合征病毒囊膜蛋白VP28基因的克隆及分析

根据已公布的罗氏沼虾白斑综合征病毒(WSSV)囊膜蛋白VP28基因序列设计一对特异性引物,从疑似患白斑病毒病的罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)中提取总DNA,并以此为模板,经PCR扩增、克隆并测序后将该片段通过GenBank比对,证实为WSSV的VP28基因;与20个已公布的WSSV VP28进行同源性比较,结果显示:从中国对虾、斑节对虾、南美白对虾、日本对虾、波纹龙虾提取的病毒株聚为一类,印度对虾WSSV VP28为另一类,罗氏沼虾WSSV VP28又单独为一类。根据测序结果推测VP28蛋白的二级结构在氨基酸的7～29区间可能为跨膜螺旋区,且该区域高度保守。     

感染白斑综合症病毒（WSSV）对虾相关免疫因子的研究

129尾中国对虾（Penaeus chinensis）分别捕自未暴发白斑综合症（WSSV病毒所致）虾池、WSSV暴发虾池以及曾暴发WSSV虾池。用斑点杂交和组织病理学方法确定各尾对虾的染毒（WSSV）程度。用96孔酶标板法测量相应个体血淋巴上清液的抗菌活力（Ua）、溶菌活力（U↓（L））、酚氧化     

盐度对非洲斑节对虾幼体培育成活率的影响

试验对不同盐度非洲斑节对虾(Penaeus monodon)幼体培育总成活率及各阶段成活率与变态时间进行了研究,旨在为非洲斑节对虾人工育苗的成功提供基础数据。采用卤水调节,设置盐度25,26,27,28四个梯度试验组,每组3个平行,经15d培育,结果表明:盐度变化对非洲斑节对虾幼体总成活率影响差异具统计学意义(P0.05),盐度25～27时,随着盐度升高,幼体成活率从22%上升到41.3%,盐度27和28试验组差异不具统计学意义(P0.05)。结果还表明盐度对无节幼体(N)、蚤状幼体(Z)、糠虾幼体(M)以及仔虾幼体(P)各阶段成活率影响不同,N与Z阶段:盐度影响显著,盐度在25～27,随着盐度升高,成活率随之增加,当盐度27与28时差异不具统计学意义;M阶段:盐度在25时成活率最低,26～28时成活率无差异统计学意义;P阶段,盐度对各试验组成活率影响差异不具统计学意义(P0.05)。说明非洲斑节对虾幼体对盐度的耐受性强弱为NZMP。不同盐度对非洲斑节对虾幼体各阶段变态发育时间有影响,但差异不具统计学意义(P0.05)。综上所述,非洲斑节对虾幼体培育的盐度不宜低于27。     

斑节对虾GLUT1基因cDNA的克隆与表达分析

该研究利用RACE技术克隆获得了斑节对虾(Penaeus monodon) GLUT1 (glucose transporter type 1)的cDNA全长序列;采用实时荧光定量的方法研究了PmGLUT1在斑节对虾幼体发育过程中、各个组织中及低盐胁迫下的差异表达情况。该基因cDNA开放阅读框(ORF)全长1 476 bp,可编码491个氨基酸。检测PmGLUT1基因从受精卵至仔虾期发育过程的表达情况,结果显示,PmGLUT1在幼体发育各期的表达量有所波动,但总体呈现上升趋势。组织表达分析发现,PmGLUT1在鳃组织中的表达量最高,肝胰腺次之,在卵巢中的表达量最低。急性低盐胁迫后,PmGLUT1在肝胰腺中的表达水平显著高于对照组(P<0.05),但在鳃中的表达水平显著低于对照组(P<0.05)。研究结果表明,Pm GLUT1可能在斑节对虾幼体发育及机体应对低盐胁迫过程中具有重要作用,这为进一步研究葡萄糖转运蛋白基因在斑节对虾幼体发育调控和耐低盐胁迫应答中的分子机制提供了理论依据。     

广东省地方标准斑节对虾养殖技术规范食用虾饲养技术

1 范围 本标准规定了斑节对虾(Penaeus monodon Fabricius)食用虾的定义、养殖环境条件、放养前准备工作、虾苗选择和食用虾养殖技术.本标准适用于池塘精养斑节对虾食用虾.     

中国对虾雄性生殖系统感染WSSV在其垂直传播中的作用

通过人工感染实验,对中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)雄性亲虾进行投喂感染。在确定其携带WSSV粒子后,将被WSSV感染的精荚人工移植到健康的雌虾纳精囊内。在无其他病源的情况下,促其产卵繁殖,统计各组子代的受精率、孵化率及无节幼体至溞状幼体的变态率贸?式PCR技术对亲虾及子代进行WSSV检测。结果表明,受WSSV感染的精荚能够把病毒传播给健康雌虾,雌虾能产出携带WSSV的卵子,培育出带毒幼体。各组子代的受精率、孵化率及变态率的统计结果表明,感染组和对照组在受精率上没有明显区别,受WSSV感染的精卵细胞可以正常结合。对照组受精卵的孵化率明显高于感染组,差异显著(P=0.045<0.05)。对照组无节幼体的变态率也高于感染组。说明WSSV的入侵对受精卵及幼体的发育有影响,WSSV感染导致部分受精卵及幼体不能正常发育或死亡。     

对虾白斑综合症的研究综述

对虾白斑综合症是由对虾白斑综合症病毒（white spot syndrome virus WSSV)引发的暴发性流行病，典型症状是病虾甲壳内侧出现0.5-2mm大小不等的白色斑点，此病病程短，死亡率高。白斑综合症病毒（WSSV）的形态结构与杆状病毒相似，杆状病毒分子分布于患病组织细胞核内，WSSV不仅水平传播，还存在垂直传播的可能性，到目前为上，诊断技术己较为进步，但尚无有效手段控制该病的发生。今后的研究重点在防治上。     

白斑综合症病毒（WSSV）对中国对虾卵及各期幼体人工感染的试验研究

用感染白斑综合症毒病的中国对虾头胸甲，对健康的仔虾进行了人工投喂感染实验，同时从病虾中分离出病毒悬液作为毒种，无节幼体，蚤体 幼体和糠虾体进行不同温度条件下的人工浸浴实验，结果表明，卵和无节幼体，蚤状幼体，糠虾幼对病毒悬液不敏感,闰理切片观察未见病毒粒子，光镜病理切片可观空到鳃上皮，前肠上皮有包涵体样病变，同时在肝胰组织中发现了肝胰腺细小病毒（HPV）包涵体。     

光合细菌对鱼虾贝促长防病作用的初探

应用光合细菌(PSB)对花鲈(Lateolabrax japonicus)、白鲢(Hyop hthalmichthys molitrix)、斑节对虾(Penaeus monodon)、罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)、马氏珠母贝(Pinctada martensii)等分别进行试验，旨在对其在促长、运输、防病等方面所起作用进行初探，结果取得良好效果。用PSB10-30ppm，对幼体花鲈饲养20天，     

斑节对虾Chitinase-2基因的克隆及其在蜕皮和幼体发育过程中的表达分析

研究以斑节对虾(Penaeus monodon)转录组获得的几丁质酶基因(Pm Chi)片段,运用RACE技术克隆了PmChi基因c DNA全长,命名为PmChi-2。PmChi-2基因c DNA全长2 050 bp,其中5'-非编码区(5'-UTR)144 bp、3'-UTR 319 bp和开放阅读框(ORF)1 587 bp,编码528个氨基酸。生物信息学分析显示,PmChi-2与其他甲壳动物Chi-2的相似性为78%~97%。实时荧光定量PCR结果显示,PmChi-2在蜕皮前期(D期)表皮中表达水平最高,在胃、鳃、腹神经节和眼柄中表达水平依次降低,在其他组织(肝胰腺、肠、肌肉、心脏)中几乎不表达。不同蜕皮阶段,PmChi-2在鳃、胃和表皮3种组织中的表达变化模式基本一致,均在蜕皮期(E期)表达量最低,而最高表达量在鳃中出现在蜕皮后期(A期),在胃和表皮中为D期。幼体不同发育阶段分析揭示PmChi-2 mRNA在幼体发育阶段的无节幼体到糠虾幼体第二期表达量维持在一个低水平,在糠虾幼体第三期PmChi-2 mRNA表达水平显著升高,在仔虾期又显著下降,推测PmChi-2 mRNA可能与斑节对虾幼体发育密切相关。研究结果表明PmChi-2基因可能在斑节对虾蜕皮以及幼体的变态发育中发挥重要作用,为深入研究斑节对虾几丁质酶发育调控提供了重要信息。     

南美白对虾亲虾暴发性传染病病原调查

对福建、广东沿海对虾育苗场的南美白对虾亲虾暴发性传染病进行病原学研究,结果表明大部分亲虾感染了白斑综合症病毒,还有一些亲虾同时感染桃拉综合症病毒。发病对虾体色发红,部分对虾体表可见大小不一的白色斑点。对这些病毒的PCR扩增产物进行测序,并进行同源性比较,结果表明导致本次对虾传染病的WSSV基因片段与基因库已报告的WSSV具有很高的同源性。结合流行病学特点,可确定这些亲虾主要因感染了WSSV和TSV而发病死亡。     

养殖对虾病毒病控制技术的创新与集成

<正>对虾白斑综合症病毒(WSSV)是全世界危害最严重的对虾病毒。目前对于该病毒尚没有特效药,最根本的办法就是预防感染,采取综合措施,实现健康养虾。笔者从1993-2003年在50亩虾池中连续做了11年的防病养虾试验,预防对虾白斑病(WSSV)取得了令人满意的试验成     

斑节对虾Fenaeus monodon在实验室循环系统中的繁殖

从1978年3月到5月，于5尾斑节对虾(Penaeus monodon)雌虾获得的34批卵子中，孵化出了二百多万无节幼体。头胸甲长50～63毫米的雌虾，切除一眼柄，在20～30天的脱皮时期内，不断产出活力强的卵子，这表明一次受精后，足够使在一次脱皮时期内所产的几批卵子受精。每次脱皮后重新受精是必要的。每批的产卵量从19000到460000粒(平均217635粒)不等，而且卵量没有随着相断的批数而减少。平均孵化率为30．5％。平均每批孵化无节幼体数为66000个。在靠近脱皮末期产的几批卵，有孵化率较低的趋势。从15批孵化的幼体中，抽样培养到仔虾期，其密度在40～250个／升。在3升水体的培养中，平均成活率为79％，但在大规模试验中，平均成活率小于13％。