大肠杆菌原核表达猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白建立ELISA检测方法

PRRS的诊断OIE还没有指定明确的方法，国外已经发展了商品化的血清学诊断试剂盒，但价格十分昂贵，国内研究者也发展了一些包括血清学方法在内的诊断方法，但与进口试剂相比还存在不少差距，目前主要使用进口的美国IDEXX公司的ELISA试剂盒。本实验室在进行本病的基因诊断研究同时，建立了原核表达抗原血清学检测法，效果较好，有望成为商品化检测试剂。     

科技动态

畜禽疫病基因诊断试剂盒研究立项由天津市畜牧兽医研究所王英珍研究员与中国农科院哈尔滨兽医研究所童光志研究员共同主持的天津市重大农业科技合作项目———“畜禽疫病基因工程诊断试剂盒临床应用与开发”通过专家论证,经天津市农委审批正式立项研究。该项目应用禽流感、蓝耳病和猪伪狂犬病三种疫病重组抗原试剂盒,对天津地区猪禽相关疫病进行抽样普查,建立适合于本地区相关疫病的检测方法,掌握该地区疫病的分布与流行情况;应用引进试剂盒,建立天津地区疫病的诊断和检测体系;建立天津地区疫病的综合防制模式;同时培训检测技术人员,为天津…     

LAMP快速诊断技术及在基层动物疫病检测中的应用前景

<正>目前,普通PCR及荧光PCR方法在人类及动植物疾病基因诊断、食品分析和环境监测等领域发挥了举足轻重的作用,该方法灵敏度高、特异性好,是目前最精准的基因诊断方法。然而PCR方法操作起来较复杂,对人员要求较高,且需要昂贵的仪器不适合基层或现场快速诊断,该技术目前在高校,科研机构以及设施较好的检测实验室进行应用较多,基层及现场推广应用较少。1 LAMP技术简介2000年日本学者Notomi公开了一种新的基因诊断技     

我国畜禽分子育种技术取得重大进展

由中国农业大学承担的农业部“948”项目“畜禽重要生产性状优良基因诊断生物技术的引进”日前通过专家验收。“畜禽重要生产性状优良基因诊断生物技术的引进”项目完成了3100型遗传分析仪、基因芯片点样仪、扫描仪等仪器设备和目前最先进的畜禽DNA分子诊断技术的引进,并以此为核心建立了基因组扫描和DNA芯片分析两个高通量的基因分析平台。利用基因组扫描的技术平台定位了一批影响鸡重要经济性状的主效基因,在国际上首次定位了影响丝羽乌骨鸡“十全”特性的多个相关基因的侯选区域;构建了目前世界上第一张鸭遗传连锁图谱,并进行了重要经济性状基因座的定位研究。完成了畜禽3种组织的大规模ESTs测定,为国际ESTs库作出了5%的贡献,并以此为基础,自主开发出国内第一张畜禽cDNA芯片(芯片含有9216个鸡基因和3426个猪基因)。开展了猪、鸡化学基因组的研究,研究结果对于揭示猪、鸡的肌肉生长和脂肪蓄积的分子机理有重要意义。     

宁波市基层兽医实验室试剂盒使用现状调查

近年来,国内外动物疫病防控形势严峻,随着兽医实验室诊断水平的不断提高和重大动物疫病监测计划的实施,实验室工作显露了更加重要的作用。然而在实验室诊断过程中,目前使用的大都为进口试剂盒。笔者通过调查发现,进口试剂盒虽价格较高,但稳定性较好,操作简单,方便快捷,深受广大     

蓝耳病病毒抗体ELISA检测试剂盒的“两步法”评价

本研究利用"两步法"对蓝耳病试剂盒进行了使用效果评价:第一步,利用18份参考血清对试剂盒进行初筛,淘汰检测准确率低的试剂盒;第二步,利用参考血清和临床样品,分别开展最低检测限、重复性以及诊断敏感性和诊断特异性分析。结果显示,A、B、C、D 4种市售试剂盒的初筛符合率均为100%,诊断敏感性和诊断特异性分别为94.58%和97.14%、94.58%和89.2%、93.1%和90%、96.55%和85%。其中,A和B为通用型试剂盒,能够检测欧洲型和美洲型蓝耳病;C和D均为美洲型检测试剂盒;重复性上,D试剂盒批内与批间变异系数都较小,重复性较好。本研究首次提出了"两步法"试剂盒评价体系并利用这一体系对4种蓝耳病试剂盒进行了评价,不仅为蓝耳病试剂盒的选择提供了依据,也为今后其它动物疫病检测试剂盒的评价提供了参考。     

人畜疾病基因诊断进展

所谓基因诊断,即是指在基因水平上对疾病的性质作出诊断。目前主要是指根据生物基因组DNA或RNA的碱基变化或检测其在待检样品中的存在来诊断某些遗传性疾病以及感染性疾病(特别是病毒性传染病)和寄生虫病。它在医学上的应用,最早可追溯到本世纪四、五十年代对镰刀状细胞贫血症病人的血红蛋白分析及随后对其编码基因进     

兽用快速诊断技术应用展望

正试剂盒是具有特异、敏感、快速而且便于操作的检测方式,所以目前在疾病诊断的过程中应用的很多,而且占据相对比较重要的地位。当前国内的兽用体外检测市场上,试剂盒所占的市场份额也比较大,但仍然具有巨大的发展空间。本文主要针对兽用快速诊断技术的概况进行分析,总结相应的实际生产研究经验,供参考。1 ELISA技术的发展概况     

猪胸膜肺炎放线杆菌ApxⅡ-ELISA抗体检测试剂盒的研制与应用

根据胸膜肺炎放线杆菌ApxⅡ毒素的特点,建立了一种能够诊断猪传染性胸膜肺炎和进行免疫后效果评估的血清学方法ApxⅡ-ELISA.本研究将该诊断方法进一步研制成试剂盒,对其特异性、敏感性、重复性和稳定性进行了测试,与间接血凝试验试剂盒进行了对比研究,并用该试剂盒检测了来自中国、英国、丹麦、美国、加拿大和澳大利亚的临床猪血清1 453份.结果表明,ApxⅡ-ELISA试剂盒具有很高的特异性和敏感性;3批试剂盒的批内和批间的重复性良好(变异系数均<15%);试剂盒在2～8℃保存9个月,稳定性良好;ApxⅡ-ELISA试剂盒能够有效的诊断猪传染性胸膜肺炎,同时也可作为一种评价猪群免疫后免疫效果的有效方法.     

天津市“畜禽疫病基因工程诊断试剂盒临床应用与开发”项目通过专家论证

由天津市畜牧兽医研究所王英珍研究员与中国农科院哈尔滨兽医研究所童光志研究员共同主持的天津市重大农业科技合作项目“畜禽疫病基因工程诊断试剂盒临床应用与开发”通过专家论证、农委审批正式立项研究。本项目应用禽流感、蓝耳病和猪伪狂犬病三种疫病重组抗原试剂盒对天津地区猪禽相关     

禽肺病毒感染的诊断

禽肺病毒感染最常用的诊断方法很可能就是用酶联免疫吸附试验 (ＥＬＩＳＡ)进行的血清学抗体检测。现在市场上已有用于诊断Ａ型和Ｂ型禽肺病毒的ＥＬＩＳＡ试剂盒出售 ,但这些试剂盒的灵敏度却低于许多研究室所用的方法。这些试剂盒采用的是Ａ型和Ｂ型抗原 ,但若为检测新的Ｃｏｌｏｒａｄｏ株则试剂盒中必须采用这一病毒的抗原。采用聚合酶链反应来诊断禽肺病毒感染 ,是既快速又灵敏的方法 ,很可能会在将来得到推广应用。然而 ,这些试验的准确性则尚待验证。禽肺病毒感染的诊断     

昆明市猪尿样中"瘦肉精"的监测

2003年12月至2004年11月，昆明市动物监督检验所开展了生猪“瘦肉精”的监测工作，现将检测结果报道如下。 1 材料与方法 1．1 盐酸克伦特罗ELISA检测试剂盒农业部推荐的德国拜发（Biopharm）公司生产的盐酸克伦特罗（CLB）酶联免疫（ELISA）检测试剂盒。     

多重RT-PCR检测猪传染性胃肠炎病毒和流行性腹泻病毒方法的建立及应用

目前,国内市场上用于猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)的诊断试剂盒比较少,而应用常规方法在临床实践中确诊猪TGEV和PEDV的混合感染又比较困难.研究应用猪TGE-PED二联弱毒活疫苗初步建立了同时检测TGEV和PEDV的多重RT-PCR诊断方法,现报道如下.     

4种狂犬病病毒ELISA抗体检测试剂盒的评价

为评价国产狂犬病病毒ELISA抗体检测试剂盒的性能,选择4种国产品牌ELISA抗体检测试剂盒,分别检测463份已用荧光抗体病毒中和试验（FAVN）测知狂犬病病毒抗体效价的犬血清,用Kappa检验和配对卡方检验评价ELISA试剂盒与FAVN检测结果的一致性和差异性,计算ELISA试剂盒的诊断敏感性、诊断特异性、符合率和重复性等,并比较4种试剂盒的使用范围、样品稀释倍数等参数。结果显示：经Kappa检验,4种试剂盒与FAVN一致性均为弱;经配对卡方检验,A、B试剂盒与FAVN检测结果的差异不显著（P> 0.05）,而C、D试剂盒差异显著（P <0.05）。诊断敏感性,D试剂盒最高,B试剂盒最低;4种试剂盒诊断特异性均较低,为29.5%～57.7%;各试剂盒符合率相当,为71.3%～72.8%。综合敏感性、特异性、重复性等考量因素,得出C试剂盒更能满足免疫后抗体检测需求,A试剂盒也较好,两者可作为候选试剂盒。结果表明,4种国产狂犬病病毒ELISA试剂盒的诊断敏感性、诊断特异性、批间稳定性等性能需进一步提高,以满足基层免疫抗体监测需求。     

检测猪瘟病毒的商业化荧光PCR试剂盒比对验证

为了比较猪瘟病毒6种荧光PCR检测试剂盒的使用效果,本研究采用标准毒株、疫苗与猪瘟阳性组织3类样品,对这些试剂盒的敏感性、特异性、重复性及有效期符合率进行比较。结果显示,试剂盒差异较大,仅有国外试剂盒和2家国产试剂盒与预期的结果一致,其对猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型以及阴性猪样品的核酸无交叉反应,重复性与再现性均为理想,在有效期内检测结果没有发生变化。本研究开展检测猪瘟病毒试剂盒验证试验,这将为猪瘟的病原学诊断及实验室开展其它试剂盒验证提供参考。     

禽白血病病毒p27抗原ELISA检测试剂盒的比较与评估

为了更好地进行禽白血病监测与净化,研究使用由蛋清、细胞培养物、胎粪等多种样品组成的样品盘对7种禽白血病病毒（Avian leukosis virus,ALV）p27抗原ELISA检测试剂盒（国产试剂盒DA、DB、DC,进口试剂盒IA、IB、IC、IDEXX）进行比较。结果显示：从分析特性上看,试剂盒分析特异性均较好,未观察到与其他常见禽源病毒的交叉反应;与IDEXX相比,DA、IA的分析敏感性较高,DB、IC其次,DC、IB较低,对于ALV不同亚群,各种试剂盒分析敏感性差异可达2～3个稀释度;从诊断特性上看,与IDEXX相比,DB、DC和IC的诊断敏感性和诊断特异性均高于90%;DA、IA和IB与IDEXX的诊断敏感性和诊断特异性均高于80%;各试剂盒对于不同类型样品（DF-1细胞培养物、蛋清、胎粪）的诊断敏感性和诊断特异性存在差异;从重复性上看,DA和IA的批内变异系数均在15%以内。综上所述,与IDEXX相比,当前国产p27抗原ELISA检测试剂盒DA和DB、进口p27抗原ELISA检测试剂盒IA和IC的各项性能可满足禽白血病净化各阶段对不同类型样品的检测需求。     

猪源产肠毒素性大肠杆菌耐热肠毒素STⅡ基因荧光定量PCR检测试剂盒的研制

为建立猪源产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)的快速准确诊断方法,根据Gen Bank收录的ETEC耐热肠毒素(STⅡ)基因序列设计1对特异性引物,采用SYBR GreenⅠ荧光染料建立ETEC荧光定量PCR诊断试剂盒,并验证该检测法的敏感度、特异性、重复性及试剂盒长期保存的稳定性。结果显示:该诊断试剂盒的最低灵敏限度达1.0×101拷贝/μL,特异性强,对羊源、牛源产肠毒素性大肠杆菌基因未检出;用该试剂盒检测猪场分离的149株临床样品,同时与传统的分离培养后普通PCR比较,该方法检出率高;试剂盒于-20℃保存3~6个月对阳性标准品拷贝数无影响。本研究研制的试剂盒在临床检测大肠杆菌比传统检测方法快且结果表明建立的试剂盒适合于ETEC的检测,为该病的快速诊断和防治提供基础。     

四种口蹄疫病毒非结构蛋白抗体ELISA试剂盒检测猪血清样本的质量评估

[目的]对4种口蹄疫病毒非结构蛋白抗体ELISA试剂盒进行质量评估。[方法]用4种商品化的口蹄疫非结构蛋白抗体ELISA检测试剂盒,对非免疫无疫、免疫健康、免疫感染和非免疫人工感染4种类型猪血清样本进行检测,分析试剂盒的诊断敏感性、诊断特异性、分析敏感性、分析特异性及重复性。[结果]4种试剂盒的诊断敏感性在76.8%~94.4%之间,诊断特异性在97.7%~100%之间,分析敏感性和分析特异性较好。4种检测试剂盒与4种猪常感染疾病的阳性血清不发生反应。试剂盒的批间重复性为(10.545±6.845)%~(37.577±28.626)%;批内重复性为(9.037±6.075)%~(37.601±27.027)%。[结论 ]在实际应用中,需根据检测目的不同,选取相应的试剂盒。     

市场信息

“禽流感病毒快速诊断试剂盒”将在厦产业化2007年3月27从福建省科技厅获悉,“禽流感病毒快速诊断试剂盒(兽用)”项目将在厦门实现产业化。由厦门大学国家传染病诊断试剂与病苗工程技术研究中心承担的“高致病性禽流感防治科技专项”项目,经过2年的艰苦努力,研制出国际上第1个能满足疫区现场快速诊断要求的禽流感病毒快速诊断试剂盒。经考核,试剂的灵敏度显     

科技动态

转基因农产品检测试剂盒面世上海市农科院生物技术中心成功研制出“转基因农产品检测试剂盒”并进行规模生产。据悉,经过两年来的攻关研究,上海市农科院生物技术中心研究出的能在50min内快速抽提转基因食品DNA的试剂盒,加上PCR检测等其他步骤,一个样品的检测时间大约在4～5h左右。同时,该项快速检测的内容可以从过去单纯检测有无转基因成分扩展到确定转基因成分含量的高低。该试剂盒系列产品品种齐全,可用于检测目前商业化生产的主要转基因农产品(大豆、油菜、玉米)中多种外源基因和表达调控元件;DNA提取率高,纯度高,质量高,可定性PCR…