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以不同梨品种为材料,分别采用改良CTAB法、改良SDS法、SDS-CTAB和高盐低pH值法对梨基因组DNA进行了提取.结果表明:采用改良CTAB法在提取各种梨基因组DNA过程中表现最好且纯度最高;SDS法提取的基因组DNA产率最高,但纯度较低;高盐低pH值法产率和纯度均最低. 相似文献
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高质量枣基因组DNA提取方法 总被引:11,自引:2,他引:11
主要针对枣组织中多糖严重干扰基因组DNA提取质量的问题,比较了常规CTAB法、TE3D法和改良CTAB法3种方法的处理效果。结果表明:常规CTAB法提取DNA难以除去多糖类杂质;TE3D法提取的DNA多糖杂质少,但产率低,易降解,褐化严重;改良CTAB法提取DNA产率高,无明显降解,杂质少,D260nm/D280nm比值1.80左右,通过基因组DNA-AFLP指纹图谱分析,完全满足实验要求。并对改良CTAB法的关键步骤作了具体分析讨论。 相似文献
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不同方法提取野生荔枝基因组DNA效果的比较 总被引:1,自引:0,他引:1
以广东、广西地区的3个野生龙眼的幼嫩叶片为试材,采用SDS法、常规CTAB法和改良2× CTAB法提取荔枝叶片基因组DNA,比较研究从富含多酚、多糖和色素等次生代谢物质的野生荔枝叶片中获得高质量DNA的提取方法.结果表明:采用改良的2×CTAB法提取的荔枝叶片基因组DNA纯度最高、质量最佳,可直接用于荔枝叶绿体DNA trnL-F基因的PCR扩增分析,且扩增后条带清晰.表明改良的2×CTAB方法获得的DNA纯度和产率较高,符合进行野生分子标记的实验要求. 相似文献
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以改进的CTAB法对三华李品种群中的早食李叶片基因组DNA的提取进行了试验.结果表明,改进的CTAB法适于高质量三华李品种群基因组DNA的提取,提取的早食李基因组DNA完整性较好,无降解,OD260/OD280的比值在1.9~2.0之间,多糖类杂质去除较为干净.经SRAP检验,条带清晰,多态性良好,说明改良CTAB法提取的基因组DNA质量较好,适于三华李高质量基因组DNA的提取.不同时期的不同成熟度的叶片都可以提取到基因组DNA,但以各期的嫩叶(梢)产量最高,效率最好. 相似文献
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以CTAB法、改良CTAB法、SDS法、改良SDS法、改良陈大明法、高盐低pH值法、SDSCTAB法和氯化苄法等8种目前常用植物基因组DNA提取方法为基础,通过采用异丙醇和无水乙醇进行2次常温短暂沉淀、提高离心力等多种去杂质措施进行适当改进,对它们用于三华李基因组DNA提取的效果进行比较。结果表明,8种方法中以CTAB法最优,改良CTAB法其次,高盐低pH值法稍逊,其他5种方法则不适合于三华李基因组DNA的提取;CTAB法不仅适合于早食李不同季节(4月、8月和12月)和不同成熟度叶(未展开嫩叶、展开嫩叶、成熟叶和老叶)基因组DNA的提取,也适合于华蜜大蜜李、白脆鸡麻李、大鸡麻李、中蜜李、小蜜李、串珠李、从化三华李、红线李、香蕉李、中熟李和软枝三华李等11个三华李品种嫩叶基因组DNA提取。 相似文献
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对猕猴桃基因组DNA提取的各个环节的进展进行综述。经分析得出,干叶片是一种较为理想的材料,容易保存,获得的基因组DNA质量也较高。提取方法主要有SDS和CTAB法,SDS法可以较好的将DNA与蛋白质分开,而CTAB法则可以较好的将基因组DNA与糖等杂质分离开;此外还有一些改良的提取基因组DNA的方法,都是比较实用的。可以根据不同的条件选取不同的方法。 相似文献
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正交设计优化果梅ISSR反应体系 总被引:16,自引:0,他引:16
以果梅(PrunusmumeSieb.etZucc.)品种鸳鸯梅为试材,采用改良的CTAB法提取果梅嫩叶DNA,利用正交设计L16(45)探讨Mg2+、dNTPs、引物、TaqDNA聚合酶及模板DNA用量对果梅ISSR-PCR反应的影响,正交试验的结果采用直观分析和方差分析相结合。建立了果梅的ISSR-PCR优化反应体系,在20μL反应体系中含2μL10×Buffer,2.5mmol·L-1Mg2+,0.2mmol·L-1dNTPs,0.32μmol·L-1引物,20~80ng模板DNA,0.75UTaqDNA聚合酶。在此基础上探讨了引物UBC840的最适退火温度、最佳循环次数及延伸时间,引物UBC840的最适退火温度为50.6℃。应用该优化反应体系,用2个不同引物对19份果梅资源DNA进行ISSR-PCR扩增,结果显示优化的反应体系具有较高的稳定性。 相似文献
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不同方法提取牛心朴子基因组DNA效果的比较研究 总被引:1,自引:1,他引:1
以牛心朴子的叶片、茎段、根为试材,采用改良的CTAB法Ⅰ、CTAB法Ⅱ和SDS法对其进行了基因组DNA提取效果的比较分析.结果表明.CTAB法Ⅰ从3个部位都能提出较高浓度的DNA,电泳条带完整清晰;CTAB法Ⅱ从3个部位都能提出DNA,条带明亮,但有明显拖尾现象;SDS法从叶片中能提出较高的DNA,但从茎和根中所提的DNA含量较小,电泳条带暗;3种方法所提的DNA其RAPD扩增效果以CTAB法Ⅰ最好,CTAB法Ⅱ次之,SDS法最差.叶片提取的DNA平均纯度、浓度和得率为最高,RAPD扩增效果最好,茎次之,根最低.说明CTAB法工是牛心朴子DNA的高效提取方法,不同部位以牛心朴子叶子提取的DNA得率高,扩增效果最好. 相似文献
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分别采用SDS法、CTAB法及碱裂解法对甜菜干种子基因组DNA进行提取.并利用1%琼脂糖判断DNA的纯度,λDNA判断DNA的含量,结果表明,SDS法和CTAB法提取的甜菜基因组DNA含量较高,提取的DNA总量接近,碱裂解法提取的DNA含量较低。3种方法提取的DNA均能够满足SSR—PCR的要求,并且扩增务带没有差异,由于碱裂解法提取DNA快速和简单,因此适合大群体DNA的提取及对模板要求不高的PCR反应中,而SDS法及CTAB法适合一次性大量提取甜菜基因组DNA以及对于DNA纯度要求较高的PCR反应中。 相似文献
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灰枣成熟叶片DNA提取及ISSR反应体系构建 总被引:4,自引:1,他引:3
针对枣DNA提取须用幼嫩叶片或组织培养幼苗这一限制相关实验顺利进行的问题,对常用的DNA提取方法CTAB法进行了改良,在破碎细胞之后,先加入2%β巯基乙醇,3%PVP,100mmol/LEDTA以去除成熟叶片细胞质中的多酚等次生物质,再加核裂解液CTAB以释放DNA。改良的CTAB法提取灰枣成熟叶片基因组DNA,分光光度法检测该法提取的样品DNA得率为55.1~79.1μg/g,D260nm/280nm为1.78~1.87;琼脂糖凝胶电泳检测的结果表明,该法提取的样品DNA分子量为23kb左右;该法提取的样品DNA可以被EcoRI和HindⅢ限制性内切酶进行切割。在此基础上构建了方便快捷的灰枣ISSR反应体系。 相似文献
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一种高质量枇杷基因组DNA提取方法 总被引:1,自引:0,他引:1
针对枇杷叶片富含多糖、多酚及其它次生代谢物质的特点,采用改良CTAB法,通过对抽提液、沉淀液和解离缓冲液进行逐步筛选,对其基因组总DNA进行提取,并对DNA进行电泳检测、含量测定和ISSR分析。结果表明:该方法从‘大五星’枇杷幼叶、成熟叶片、花药、组培苗,与幼果中的胚珠,以及栎叶枇杷的幼叶与成熟叶片7种材料提取的基因组总DNA纯度和完整性都较好,OD260/OD280值均在1.8~2.0之间,无降解现象,RNA去除干净,能被限制性内切酶完全消化;其ISSR分析条带清晰,多态性好,表明此方法提取的枇杷基因组总DNA质量较高。 相似文献