一种同时适用于水稻种子叶片的简单快速DNA提取方法

本文报道了一种同时适用于水稻种子和叶片的简单快速DNA提取方法。该方法通过简单的碾磨、加热、离心等步骤便能制备适合PCR的DNA模板。用该方法单人每小时可以提取48个样品的DNA模板。本研究用该方法提IRT132个水稻种子DNA样品及1096个不同生长阶段的水稻叶片DNA样品,用13对PCR引物进行扩增,种子DNA样品PCR扩增成功率为91．0％,3个不同时期取材的叶片DNA样品PCR扩增成功率均在97．0％以上。该方法提取的DNA也可以进行高分辨率熔解曲线分析。     

一种高效便捷的水稻DNA提取法及其应用

 以水稻叶片、根和种子为材料,采用高通量快速法提取基因组DNA,用稻瘟病Pita基因分子标记进行检测,获得与预期片段大小一致的特异性条带,对165份育种材料的检测结果与稻瘟病接种鉴定一致。操作方法如下：将少量水稻叶片、根或种子放入 200 μL PCR盘中,加入70 μL 缓冲液A (含NaOH和Tween20),在PCR仪中加热到95℃,保持 10 min,再加入70 μL 缓冲液B (Tris HCl和EDTA),该提取液可以直接用于PCR扩增。该方法具有几个优点：1）成本低,仅用4种化学试剂,共140 μL 提取液;2）操作简便,仅需3步,每人每天可以提取上千份样品;3）仪器设备简单,只用常规的PCR仪;4）可直接提取干种子的DNA;5）DNA质量好,能检测出水稻中的抗稻瘟病单基因Pita,并且与稻瘟病接种鉴定结果一致;6）用量少,只需要 5~20 mg 叶片、20 mg 根或半粒籽粒。尤其是检测大量样本的基因型时, 此种方法更显得高效便捷。     

一种叶片直接作用PCR扩增的新方法及其应用

以水稻为模式植物研究了利用碱处理叶片直接用作PCR扩增的模板，并应用于水稻品种种性和纯度鉴定以及分子标记辅助田间育种材料的选择中。该方法具有快速、简便、结果可信度高，重复性好，对待测植株的损伤小等特点，它无需高速冷冻离心机及相应的提取DNA的试剂，故试验成本低，检测所需的时间短。尤其是群体较大时，此种方法更是显得经济有效，利用此种方法在1d内可检测300份样品。     

提取水稻DNA的一种简易方法

水稻染色体RFLP(DNA限制性片段长度多态性)图谱已经构建,RFLP标记正日益广泛地应用于水稻遗传育种的各项研究中。从水稻植株提取一定数量能被各种限制性内切酶完全酶解的DNA是开展这项研究的第一步。目前抽提水稻DNA的一般方法,如Cornell大学Tanksley博士实验室所用的方法,还是比较复杂,而且要使用氯仿和苯酚来提纯DNA,实验过程中就必须使用耐酚的容器和离心管,这给RFLP工作的广泛开展带来     

一种叶片直接用作PCR扩增的新方法及其应用

以水稻为模式植物研究了利用碱处理叶片直接用作PCR扩增的模板,并应用于水稻品种种性和纯度鉴定以及分子标记辅助田间育种材料的选择中。该方法具有快速、简便、结果可信度高,重复性好,对待测植株的损伤小等特点,它无需高速冷冻离心机及相应的提取DNA的试剂,故试验成本低,检测所需的时间短。尤其是群体较大时,此种方法更是显得经济有效,利用此种方法在1 d内可检测300份样品。     

一种用于水稻点突变检测的PCR引物设计方法

介绍了一种用于水稻点突变检测的PCR引物设计方法。利用该方法根据12个候选基因序列设计了12对引物,其中10对引物可以正常工作,能从基因组中扩增出特异性条带,合格率为83%,并且成功地在突变体中检测到点突变。这一方法不仅可以用于水稻,也可以用于其他动植物。同时,对引物设计过程中常见问题进行了讨论并给出了解决办法。     

油菜DNA快速高通量提取方法改良及应用

[目的]找到一种快速、高通量、低成本提取油菜DNA的方法。[方法]将改良碱煮法快速高通量提取油菜DNA的方法与试剂盒法（磁珠法）提取的DNA质量进行比较,并进一步分析油菜植株不同部位和叶片不同时期的提取效果。[结果]与以磁珠法为代表的传统提取法相比较,改良的碱煮法快速高通量提取油菜DNA的方法,用于普通的SSR分子标记检测没有明显差异。同时,通过对油菜植株不同部位和叶片不同时期的提取效果进行分析,发现没有明显差异,表明该方法在分子标记辅助育种以及DNA纯度鉴定等试验中可广泛应用。[结论]改良的碱煮法提取DNA可以在油菜不同时期和不同部位应用,进一步提高了碱煮法的使用效率。     

水稻基因组DNA简易制备方法

介绍了一种用于PCR的水稻基因组DNA的快速制备方法。该方法只需将少量(1～50mg)样品、适量提取液(500μL)和一粒钢珠放入2mL离心管,在细胞破碎仪中粉碎2min,经离心后可直接取少量(约5μL)上清液作为PCR的模板DNA,也可进一步根据需要实现高质量DNA的提取。该方法具有成本低、操作快速简便等优点,一个人可以在10min内完成96份样品DNA的简易制备,特别适合高通量的分子检测。     

远缘物种DNA导入水稻保持系的种质创新及SSR分析

将小粒野生稻(Oryza minuta)、高粱的DNA分别导入水稻保持系V20B和IR58025B,在第1代(D1)获得变异,从前者变异株的后代中选育出了新的不育系及其保持系株系野威A和野威B,而高粱DNA导入IR58025B获得的变异系从D2开始在形态上已不出现分离.SSR分析表明,变异系野威B、香粱5均与受体存在遗传多态性,并含有供体特异的分子标记带型.首次从分子水平上证明,通过导入外源DNA获得的变异株确实存在无分离的现象.说明导入远缘物种DNA是创造水稻新种质的有效途径.     

一种适用于PCR检测的苎麻陈年原麻DNA提取方法

本研究以常温干燥保存一年和六年的陈年苎麻原麻为材料,采用改进的CTAB法,对苎麻原麻DNA进行了提取.琼脂糖凝胶电泳结果表明,得到的DNA大小在20kb以上,2010年原麻提取DNA的条带明显比2005年原麻的清晰;PCR扩增实验证明用此方法提取的DNA可直接用于PCR检测.     

A Simplified Rice DNA Extraction Protocol for PCR Analysis

DNA molecular marker technology has been advancing rapidly during past decades and its application perspective seems very brilliant in crop breeding, varietal purity test of crop seeds and germplasm fingerprinting [1]. Among various DNA markers, the PCR-based marker is the most popular and efficient one since it needs small amounts of DNA with relative low quality [2]. Meanwhile, PCR is also an essential approach for detection of target genes in transgenic breeding and genetic modified (…     

用于水稻突变体大量筛选的DNA微量快速提取法

介绍了一种高通量水稻DNA微量快速抽提法。该方法特别适用于精细作图群体和大型突变体库的筛选鉴定,不仅通量大、速度快,而且可以确保足够的DNA浓度和纯度。DNA质量可以确保一般的PCR扩增,包括SSR检测以及应用于TILLING（targeting induced local lesion in genome）分析。     

A Rapid DNA Mini-prep Method for Large-Scale Rice Mutant Screening

With the completion of whole genome sequence, focus on rice research has been apparently shifted from sequence analysis (genomics) to identifying and understanding the functions (functional genomics) of nearly 40 000 genes presented in rice genome [1-3]. Gene functional identification requires new materials and methods. Mutant is considered as one of the most important sources of starting materials. In mutant detection, a new reverse genetics strategy termed TILLING (Targeting Induced Loca…     

水稻同核异质不育系及其保持系核基因组的SSR分析

以4套共15份同核异质水稻雄性不育系和保持系为试验材料,应用随机分布于水稻12条染色体上的42对SSR引物,分析其核基因组的遗传多样性和亲缘关系。 在15份材料间共检测到63个等位基因,多态性位点百分率为4048%,平均每个位点的等位基因数为1.5个,平均基因多样性为0.18。4套同核异质不育系的平均相同位点为54.5个,占总等位基因数的86.51%,差异位点为8.5个,占13.49%。同核异质的不育系与保持系间具有平均77.78%的相同位点和22.22%的差异位点。同质异核不育系中则具有平均53.97%的相同位点和46.03%的差异位点。同时,获得了一些不育系和保持系的指纹图谱。根据不育系和保持系聚类分析图,在遗传距离为 0.22处划分为3群,第1群包括华农A和华育A不育系及其保持系共8份材料,第2群包括N9A、N10A和N11A等3份科珍2A材料,第3群包括N12A、N13A、N14A和N12 16B等4份珍汕97A同核异质系。同一套同核异质系基本上都优先聚类在一起,与其选育系谱一致。     

一种改良的大豆DNA提取方法

大豆组织中含有较多的蛋白质、糖类、酚类和脂类物质,要从中提取高质量的DNA比较困难。针对这一情况提出一种改良UREA大豆DNA提取方法(m UREA),该方法用异丙醇沉淀DNA,并配制washing buffer洗涤DNA沉淀。并以大豆叶片和种子为材料,将m UREA法与CTAB法和SDS法进行对比。结果表明,以大豆叶片为材料时,m UREA法提取的DNA产率最高,质量最好;以大豆种子为材料时,m UREA法提取的DNA产率略低于SDS法,但纯度最高。综合来看,m UREA法是一种高效的大豆基因组DNA提取法,从大豆种子和叶片中提取的DNA浓度和纯度都较高,能满足后续各种分子生物学的要求。     

A Simple Method for Preparation of Rice Genomic DNA

The extraction of DNA is often the most time consuming and laborious step in high-throughput molecular genetic analysis and marker assisted selection(MAS)programs.A simple method for preparation of rice genomic DNA was developed.A small amount(1-50 mg)of leaf tissue of rice seedling,500μL of extraction buffer,and one steel bead were put into a 2-mL microcentrifuge tube.After vigorously mashing for 2 min,5μL of supernatant was directly applied to PCR amplification.Otherwise,the supernatant was precipitated with two times volume of ethanol to obtain high quality genomic DNA.This method is simple,rapid,low cost,and reliable for PCR analysis.One person can manipulate as many as 96 samples for PCR in 10 min.It is especially suitable for genotyping of large number of samples.     

粳稻近缘品种的SSR分析

 选用38对SSR引物，对16个日本优质米品种越光及其近缘品种进行了SSR标记分析。结果表明，有8对引物在品种间表现多态性，多态性引物检出率为21.1%，平均每对引物检测到2.25个等位基因。8个引物组合在一起，除了早喜光和日光2个品种不能区分外，其余品种均能有区别。多态性检出率亲本间为18.4%，越光及其衍生品种间为0~158%，表明近缘品种间多态性检出率较低。     

我国常规稻主栽品种的遗传变异分析

 采用40个SSR标记,分析了329份我国近50年来常规稻主栽品种的遗传变异。结果显示,39个SSR标记具有多态性,在多态性位点共检测到223个等位基因,每个位点2～11个,平均57个;平均Nei基因多样性指数（He）为0632。籼粳亚种间的SSR变异差异明显,籼稻平均等位基因数（Na）和Nei基因多样性指数（Na = 54,He = 0440）均高于粳稻品种（Na = 44,He = 0397）。Nei遗传相似系数表明总体样本具有较小的遗传相似度（I = 0366）,而骨干亲本具有较高的遗传相似度（籼:I = 0590;粳:I = 0590）。这导致了籼粳亚种内较高的遗传一致性（籼:I = 0558;粳:I = 0600）。早、中、晚稻各类型遗传相似度差异明显,晚籼和早粳类型具有较高的遗传变异。籼粳稻品种尤其是粳稻的聚类结果显示出较强的季节型和地域特征。这些均提示育种家应选择更广泛的亲本源以拓宽选育品种的遗传基础。