花䱻抗缪勒氏管激素基因克隆、抗体制备及其对外源雌激素的响应

【目的】克隆花䱻抗缪勒氏管激素基因Amh,分析其序列特征及亚细胞定位,检测不同浓度雌二醇处理下的表达变化规律,为后续研究Amh基因的功能及其在卵巢发育中分子机制提供理论参考。【方法】基于花转录组文库测序结果,克隆Amh基因cDNA序列,并对其进行生物信息学分析。构建重组表达质粒pET32a-Amh,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,用纯化的重组蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体。通过免疫荧光技术检测荧光信号确定蛋白的亚细胞定位情况。同时,利用实时荧光定量PCR检测Amh基因在雌二醇处理后的表达情况。【结果】克隆的花䱻Amh基因cDNA序列全长为1849 bp,开放阅读框（ORF）为1671 bp,编码556个氨基酸残基。系统进化分析结果显示,花䱻Amh基因与斑马鱼、鲤鱼等鲤科鱼类Amh基因聚为一支,表明其亲缘关系较近。将纯化的AMH重组蛋白免疫小鼠以制备AMH多克隆抗体,通过酶联免疫方法（ELISA）检测其抗体效价为2.4×106以上,Western blotting检测显示抗体具有特异性。AMH蛋白在花卵巢颗粒细胞表达。利用不同浓度的雌二醇处理花䱻60 d后发现,低浓度雌二醇（100 μg/g）促进花䱻卵母细胞生长,卵巢内皮质液泡数量增多。经雌二醇处理后,卵巢中Amh基因的表达量降低,说明雌激素在卵巢发育中对Amh基因表达具有抑制作用。【结论】Amh基因含有TGF-β家族典型的结构域,在卵巢颗粒细胞表达,且响应雌激素的调控,可能在花䱻卵巢发育中发挥调控作用。     

红鳍东方鲀抗苗勒氏管激素(AMH)基因在不同发育时期的组织表达

为研究抗苗勒氏管激素(AMH)基因在红鳍东方鲀Takifugu rubripes各组织和不同发育时期的表达情况以及在性别分化和性腺发育等过程中的作用,利用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)技术对红鳍东方鲀成鱼的肾脏、脑、心脏、脾脏、肝脏、精巢和卵巢等组织进行了amh基因的表达分析以及不同发育时期(23、30、40、60、80日龄及2龄和3龄鱼)红鳍东方鲀个体水平上amh基因的表达分析。结果表明:红鳍东方鲀3龄成鱼脾脏、肾脏和肝脏中的amh基因表达量极显著高于其他组织(P<0.01),在精巢和心脏中的表达量极显著高于卵巢和脑(P<0.01),其中脾脏中表达量最高,脑中表达量最低;红鳍东方鲀23日龄、30日龄、2龄和3龄鱼中,雄鱼amh基因的表达量极显著高于同期雌鱼(P<0.01),而60日龄和80日龄时雌鱼表达量显著高于雄鱼(P<0.05),40日龄时雌、雄鱼的表达量无显著性差异(P>0.05),3龄时雌、雄个体性腺中amh基因的表达量均显著高于2龄鱼(P<0.05);雄性幼鱼amh基因的表达量从23³0日龄呈增长趋势,且在30日龄时达到最高,随后逐渐降低,而雌鱼整体amh基因的表达量也呈现先升高后降低的趋势,80日龄时雌鱼amh基因表达量最高。研究表明,amh基因在红鳍东方鲀的性腺发育和性别分化过程中发挥着一定的作用。     

红鳍东方鲀抗苗勒氏管激素(AMH)基因在不同发育时期的组织表达

为研究抗苗勒氏管激素(AMH)基因在红鳍东方鲀Takifugu rubripes各组织和不同发育时期的表达情况以及在性别分化和性腺发育等过程中的作用,利用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)技术对红鳍东方鲀成鱼的肾脏、脑、心脏、脾脏、肝脏、精巢和卵巢等组织进行了amh基因的表达分析以及不同发育时期(23、30、40、60、80日龄及2龄和3龄鱼)红鳍东方鲀个体水平上amh基因的表达分析。结果表明:红鳍东方鲀3龄成鱼脾脏、肾脏和肝脏中的amh基因表达量极显著高于其他组织(P0.01),在精巢和心脏中的表达量极显著高于卵巢和脑(P0.01),其中脾脏中表达量最高,脑中表达量最低;红鳍东方鲀23日龄、30日龄、2龄和3龄鱼中,雄鱼amh基因的表达量极显著高于同期雌鱼(P0.01),而60日龄和80日龄时雌鱼表达量显著高于雄鱼(P0.05),40日龄时雌、雄鱼的表达量无显著性差异(P0.05),3龄时雌、雄个体性腺中amh基因的表达量均显著高于2龄鱼(P0.05);雄性幼鱼amh基因的表达量从23~30日龄呈增长趋势,且在30日龄时达到最高,随后逐渐降低,而雌鱼整体amh基因的表达量也呈现先升高后降低的趋势,80日龄时雌鱼amh基因表达量最高。研究表明,amh基因在红鳍东方鲀的性腺发育和性别分化过程中发挥着一定的作用。     

联合检测类风湿因子、抗角蛋白抗体及抗环瓜氨酸多肽抗体对类风湿性关节炎的诊断价值

目的探讨类风湿因子（RF）、抗角蛋白抗体（AKA）及抗环瓜氨酸多肽（CCP）抗体联合检测对类风湿性关节炎（RA）的临床诊断价值。方法对83例RA和106例非RA患者用速率散射比浊法检测RF,间接免疫荧光染色法检测AKA,酶联免疫吸附法检测抗CCP抗体,并对3种指标检测进行比较分析。结果3种抗体单独检测对RA诊断的敏感性、特异性分别是：RF为71．1％、74．5％,AKA为49．4％、95．3％,抗CCP抗体为65．1％、94．3％;不同方式联合检测对RA诊断的敏感性、特异性分别是RF＋AKA为34．9％、97．2％,RF＋抗CCP抗体为45．8％、98．1％,RF＋AKA＋抗CCP抗体为28．9％、100％;RF在AKA、抗CCP抗体分别阴性的RA患者中检出率分别为28．6％和34．5％;AKA和抗CCP抗体在RF阴性的RA患者中分别有45．8％和62．5％的阳性率。结论单独检测RF对RA诊断的敏感性最高,特异性最高的是AKA,抗CCP抗体有较高的的敏感性及特异性,3种指标各有优点,可互为补充,联合检测RF、AKA及抗CCP抗体可提高对RA诊断的特异性,有助于早期RA的诊断。     

血脂、总胆红素、尿酸及超敏C反应蛋白联合检测在冠心病诊断中的应用价值

目的 了解联合检测血脂、总胆红素(TBil)、尿酸(UA)及超敏C反应蛋白(hs-CRP)对冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)的诊断价值.方法 检测80例CHD(试验组)、80例健康体检者(对照组)血脂、TBil、UA、hs-CRP水平,应用受试者工作特征曲线(ROC曲线)比较各指标联合检测时的灵敏度、特异度及ROC曲...     

滋肾育胎丸联合克龄蒙治疗卵巢早衰的临床观察

目的 探讨滋肾育胎丸联合克龄蒙治疗卵巢早衰（premature ovarian failure,POF）的临床疗效。方法 将我院收治的78例POF患者随机平均分为观察组和对照组,对照组给予口服克龄蒙治疗;观察组在对照组治疗基础上给予口服滋肾育胎丸。2组治疗时间均为6个月。治疗后,评价2组疗效。治疗前后,分别观察2组烦躁易怒、潮热汗出、头晕耳鸣、腰膝酸软、失眠健忘等各项症状评分,并分别检测2组雌二醇（E₂）、黄体生成素（LH）、卵泡刺激素（FSH）、子宫内膜厚度、卵巢动脉收缩期峰值流速（PSV）及平均卵巢直径（MOD）水平。治疗期间,密切观察2组患者出现的不良反应。结果 治疗后,观察组总有效率为92.3%,明显高于对照组74.4%（P<0.05）。治疗后,观察组各项症状评分均明显低于对照组（P<0.05）;其中,LH、FSH及E₂含量改善程度均明显优于对照组（P<0.05）;子宫内膜厚度、PSV及MOD水平均明显高于对照组（P<0.05）。治疗期间,所有患者均未出现严重不良反应。结论 滋肾育胎丸联合克龄蒙治疗POF疗效确切,且能够有效改善患者激素水平,提高子宫功能。     

二仙汤抗化疗性卵巢早衰氧化应激的效应观察

目的 观察二仙汤对卵巢早衰（premature ovarian failure,POF）大鼠的抗氧化应激效应。方法 雌性SD大鼠40只,监测一周动情周期,筛选有正常动情周期的大鼠入组,随机分为4组：正常组、模型组、阳性药组和二仙汤组。除正常组外,其余3组使用顺铂注射液造POF模型,阳性药组和二仙汤组在造模同时进行药物干预,灌胃期间监测动情周期,15 d后麻醉取材,应用放免法检测血清性激素卵泡刺激素（follicle timulating hormone,FSH）、黄体生成素（luteinizing hormone,LH）及雌激素（estrogen,E₂）的水平以及氧化应激相关指标丙二醛（malondialdehyde,MDA）、抗氧化指标超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）和过氧化氢酶（catalase,CAT）的含量,显微镜下观察各组卵巢组织的病理改变。结果 与正常组相比较,模型组大鼠动情周期及动情间期明显延长（P<0.01）,血清FSH、LH、MDA含量显著升高（P<0.01）,E₂、SOD及CAT水平显著降低（P<0.01）,卵巢组织中闭锁卵泡增多,窦卵泡数减少。与模型组相比,阳性药组与二仙汤组动情周期缩短（P<0.05或P<0.01）,血清FSH、LH、MDA含量显著降低（P<0.05或P<0.01）,E₂、SOD及CAT的含量显著上升（P<0.05或P<0.01）,闭锁卵泡数量减少,窦卵泡数增多。结论 二仙汤能通过调节POF大鼠的的抗氧化能力来改善卵巢功能,减少氧化应激带来的损伤从而治疗POF。     

电针对PCOS模型大鼠性激素及卵巢组织TSP-1表达的影响

目的 探讨电针对多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome,PCOS）模型大鼠的治疗作用,以及对卵巢组织中血小板反应蛋白-1（thrombospondin-1,TSP-1）表达的影响。方法 将32只雌性SD大鼠随机分为空白组10只、模型组12只、电针组10只,采用1 mg/kg来曲唑加l%羧甲基纤维素灌胃建立PCOS大鼠模型。治疗后检测大鼠血清睾酮（testosterone,T）、黄体生成素（luteinizing hormone,LH）、卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone,FSH）水平,HE染色观察卵巢组织病理结构改变,免疫组化法检测卵巢组织中TSP-1的表达。结果 治疗后,电针组大鼠体质量增量和卵巢相对质量较模型组降低（P<0.01）,血清T、LH水平及LH/FSH均较模型组降低（P<0.01）,卵巢切片可见小囊状扩张卵泡较模型组减少,颗粒细胞层增厚;TSP-1表达于卵巢组织颗粒细胞和卵泡膜细胞的胞浆,模型组TSP-1表达量较低空白组降低（P<0.01）,电针组TSP-1表达较模型组升高（P<0.05）。结论 电针治疗可改善PCOS大鼠性激素紊乱状态,提高卵巢组织中TSP-1的表达,通过调节血管抑制因子、减少卵巢组织中血管新生、改善微循环以达到治疗PCOS的目的。     

八段锦对多囊卵巢综合征患者体征、性激素及卵巢超声的影响

目的 探究八段锦对多囊卵巢综合征（PCOS）患者的体征、性激素及卵巢超声的影响。方法 将60例PCOS患者随机分为观察组与对照组各30例,两组均以低热卡饮食为基础,均不接受药物治疗,观察组有组织地进行八段锦运动6个月,对照组除日常活动外,不刻意进行体育运动。比较运动前后两组患者的体征、性激素水平以及B超下卵巢形态的变化。结果 观察组痤疮评分、体质指数（BMI）及腰臀比（WHR）较运动前及对照组均下降（P<0.05）,黄体生成素（LH）及其与卵泡刺激素（FSH）的比值（LH/FSH）、睾酮（T）水平较运动前及对照组降低（P<0.05）,B超双侧卵巢平均卵泡个数（MFN）较运动前及对照组减少（P<0.05）,但多毛评分、卵泡刺激素（FSH）、催乳素（PRL）、孕酮（P）、雌二醇（E2）水平及B超双侧卵巢平均体积（MOV）较对照组及运动前差异无统计学意义（P>0.05）。结论 八段锦可以改善PCOS患者痤疮症状,降低BMI及WHR,降低LH/FSH、T水平以及改善卵巢形态,是一种有效的辅助治疗手段。     

胸腺肽对幼龄雌性小鼠生殖器官指数及性激素水平的影响

研究了胸腺肽对幼龄雌性小鼠生殖器官指数及性激素水平的影响.以幼龄雌性小鼠为试验动物,连续30d皮下注射不同剂量的胸腺肽,观察各剂量胸腺肽处理对幼龄雌性小鼠卵巢、子宫脏器指数的影响,并检测血清中促卵泡激素(FSH)、雌二醇(E_2)的含量.结果表明,与正常饲养对照组比较,各剂量胸腺肽处理的小鼠卵巢指数、子宫指数降低,差异显著或极显著(p<0.05,p<0.01).其中,0.30mg·mL~(-1)胸腺肽处理组小鼠卵巢指数最低,比正常饲养对照组下降了 36.07%.0.60mg·mL~(-1)胸腺肽组小鼠子宫指数最低,比正常饲养对照组下降了38.08%.与正常饲养对照组相比,各剂量胸腺肽处理小鼠FSH、E2水平降低,差异显著或极显著(p<0.05,p<0.01).其中,0.60mg·mL~(-1)胸腺肽组FSH和E2含量都为最低,分别比正常饲养对照组下降14.48%和17.59%.可见,胸腺肽能降低幼龄雌性小鼠生殖器官指数及血清中性激素水平,从而影响幼龄雌性小鼠的生殖内分泌系统.     

胸腺肽对幼龄雄性小鼠生殖器官指数及性激素水平的影响

为了探讨胸腺肽对幼龄雄性小鼠生殖器官指数及性激素水平的影响,将100只幼龄雄性小鼠随机分为5组,第1组为正常饲养对照组,不做任何处理;第2组为生理盐水对照组,注射生理盐水;其余3组为试验组,每日分别背部皮下注射低剂量胸腺肽(0.30mg.mL-1)、中剂量胸腺肽(0.60mg.mL-1)和高剂量胸腺肽(1.20mg.mL-1),连续30d后测定睾丸指数、附睾指数、精囊腺指数和血清中促黄体生成素(LH)、睾酮(T)水平。试验结果表明:与生理盐水对照组相比,高剂量胸腺肽小鼠睾丸指数、附睾指数、精囊腺指数及LH水平均显著性升高(p<0.05);低胸腺肽组精囊腺指数显著性升高(p<0.05)。与正常饲养对照组比较,高剂量胸腺肽组小鼠T水平显著性升高(p<0.05)。可见,胸腺肽能提高雄性小鼠生殖器官指数和性激素水平,从而调节雄性小鼠生殖内分泌系统。     

温针灸联合古方青娥丸加味对绝经后骨质疏松腰腿痛患者疼痛、氧化应激及性激素水平的影响

目的 探讨温针灸联合古方青娥丸加味对绝经后骨质疏松患者腰腿痛患者疼痛、氧化应激及性激素水平的影响。方法 选择2015年7月至2017年12月在本院接受治疗的80例绝经后骨质疏松腰腿痛患者进行研究,采用随机数字表法将患者分为2组,每组各40例。对照组单纯采用青娥丸加味进行治疗,观察组在此基础上加以温针灸治疗。对比两组患者疗效、疼痛、氧化应激、性激素水平及不良反应发生情况。结果 观察组患者总有效率为95.00%,明显高于对照组的77.50%（P<0.05）。治疗后两组患者血清丙二醛、氧化型谷胱甘肽、疼痛视觉模拟评分均明显下降（P<0.05）,且观察组下降幅度更大（P<0.05）;治疗后两组患者超氧化物歧化酶、谷胱甘肽、雌二醇、促卵泡素、促黄体素均明显上升（P<0.05）,且观察组升高幅度更显著（P<0.05）。对照组不良反应发生率为5.00%,与观察组的7.50%比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论 温针灸联合青娥丸加味与单独使用青娥丸加味治疗相比,可明显提高骨质疏松腰腿痛患者疗效、缓解疼痛、改善氧化应激反应、提高性激素水平。     

心康冲剂调控慢性心衰大鼠miRNA-21/PTEN抗心肌纤维化研究

目的 探讨心康冲剂抗心衰大鼠心肌纤维化的机制。方法 90只SD大鼠分为正常组10只,模型组、对照组及心康低、中、高剂量组各16只。心康低、中、高剂量组分别给予0.5、1、2 g/（kg·d）的心康冲剂溶液。对照组给予0.06 g/（kg·d）的芪苈强心胶囊。正常组、模型组按1 mL/（kg·d）灌服生理盐水。各组均每日1次,连续灌服8周。计算左心室质量指数（LVMI）;心脏切片行HE、Masson染色并计算胶原容积分数（CVF）;采用Real-time PCR法检测miRNA-21、人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因（PTEN）mRNA表达水平;用Pearson相关及Logistic多元线性回归分析miRNA-21、PTEN mRNA、CVF与LVMI之间的相关性。结果 与正常组比,模型组大鼠心肌CVF、LVMI比值及miRNA-21表达升高（P<0.01）,PTENmRNA表达下降（P<0.01）。与模型组比,心康低、中、高剂三组CVF、LVMI比值及miRNA-21表达下降（P<0.01）、PTENmRNA表达升高（P<0.01）;与芪苈强心组比较,心康冲剂低、中、高剂LVMI、CVF、miRNA-21、PTEN mRNA无明显差异（P>0.05）。miRNA-21、PTENmRNA、CVF均与LVMI有明显线性相关关系。结论 心康冲剂可通过下调miRNA-21、升高PTEN mRNA表达抗心肌纤维化。     

强心汤联合鲁南欣康治疗阳虚水泛型冠心病慢性心衰的疗效及心肌保护作用

目的 观察强心汤联合鲁南欣康对阳虚水泛型冠心病慢性心力衰竭患者的疗效及心肌保护作用。方法 纳入阳虚水泛型冠心病慢性心力衰竭患者80例,随机分为两组各40例,均接受常规治疗,对照组同时应用鲁南欣康,观察组在对照组基础上应用强心汤,持续8周。对比2组心功能NYHA分级、Lee氏心衰积分及中医证候改善情况,观察2组超声心动图指标、血浆心肌纤维化指标及神经内分泌因子变化。结果 治疗后观察组Lee氏心衰积分、中医证候积分、左室射血分数（LVEF）、左心室舒张末内径（LVEDD）、二尖瓣舒张早期血流峰值速度/二尖瓣舒张晚期血流峰值速度（E/A）均明显优于对照组（P<0.01）;治疗后观察组血浆Ⅲ型胶原前肽（PⅢP）、层粘连蛋白（LN）、醛固酮（ALD）,均明显低于对照组,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。结论 强心汤联合鲁南欣康有助于提升阳虚水泛型冠心病慢性心衰疗效,其机制与抑制血浆Ⅲ型胶原前肽、层粘连蛋白、醛固酮水平有关。     

益气活血温心汤联合西药对慢性心力衰竭患者心功能、血浆脑钠肽及超敏C反应蛋白的影响

目的 探讨益气活血温心汤联合西药对慢性心力衰竭（chronic heart failure,CHF）患者心功能、血浆脑钠肽（brain natriuretic peptide,BNP）、超敏C-反应蛋白（hypersensitive c-reactive protein,hs-CRP）等的影响。方法 将2017年10月至2018年10月本院门诊部收治的92例CHF患者随机分为观察组和对照组,每组46例。对照组采用西药常规治疗,观察组在对照组的基础上采用益气活血温心汤治疗。观察治疗后两组CHF患者的临床疗效,对比治疗前后两组CHF患者心功能[左心室射血分数（left ventricular ejection fractions,LVEF）及左心室舒张末期内径（left ventricular end diastolic diameter,LVEDD）]、血浆BNP浓度、hs-CRP水平及6 min步行距离。结果 （1）治疗后观察组患者的总有效率高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;（2）治疗后,两组患者的6 min步行距离较治疗前升高,血浆BNP浓度、hs-CRP水平较治疗前比较有所下降,差异均有统计学意义（P<0.05）,且观察组的6 min步行距离高于对照组（P<0.05）,血浆BNP浓度、hs-CRP水平低于对照组（P<0.05）;（3）治疗后,两组患者的LVEF较治疗前升高,LVEDD较治疗前下降,差异均有统计学意义（P<0.05）,且观察组的LVEF高于对照组,LVEDD低于对照组（P<0.05）。结论 益气活血温心汤联合西药治疗CHF患者疗效明显,可通过提高6 min步行距离、LVEF并且降低血浆BNP浓度、hs-CRP水平、LVEDD来实现,且优于单纯西药治疗。