中药补阳还五汤的HPLC指纹图谱研究

采用高效液相色谱法建立了中药复方补阳还五汤的指纹图谱分析方法.实验采用Krosmasil C18色谱柱(250×4.6 mm,5 μm);流动相为乙腈-水,梯度洗脱;检测波长为220 nm,流速1.0 mL/min.以芍药苷为参照峰,标示出补阳还五汤的13个共有峰.结果表明:该方法操作简单,精密度和稳定性良好,可为补阳还五汤的质量控制提供更全面的信息.

Abstract：

The HPLC method was established to determine the fingerprint of the Chinese traditional medicine Buyanghuanwu decoction. Chromatographic conditions included Krosmasil C18 column (250 × 4.6mm, 5 μm) and the mobile phase composed of a mixture of acetonitrile-water(gradient elution), detection wavelength at 220 nm. The mobile phase flow rate was 1.0 mL/min. Thirteen peaks were observed on the HPLC fingerprint of Buyanghuanwu decoction. The results showed that the method was reliable and could be helpful for the quality control of Buyanghuanwu decoction.     

补阳还五汤提取过程中最佳提取时间和药材粉碎度的研究

目的 研究补阳还五汤提取过程中的最佳提取时间和药材粉碎度。方法 显微观察不同粉碎度的补阳还五汤单味药材,观察药材的破壁情况,采用HPLC分析补阳还五汤不同粉碎度药材的成分溶出情况。结果 显微观察从80目到100目,药材细胞结构已经不完整,细胞壁开始破壁。提取过程的中段,不同粉碎度之间的有效成分共有峰的个数较多,溶出比较完全。在提取时间约300 min时,不同目数指纹图谱的相似度在0.85以上。结论 20目药材在240 min时、40目药材在180 min时、60目在120 min时、80目药材在90 min时、100目药材在30 min时、饮片在180 min时补阳还五汤的溶出达到基本稳定,提取效果最佳。     

补阳还五汤及其四类有效部位对脊髓损伤大鼠大脑运动皮质的神经保护作用

目的 观察补阳还五汤（BYHWD）及其四类有效部位（生物碱、苷、多糖、苷元）对脊髓损伤（SCI）大鼠大脑运动皮质神经元的影响,探究其神经保护作用的可能机制。方法 SD雄性大鼠48只,随机分为8组：正常组、假手术组、SCI组、BYHWD组、生物碱组、苷组、多糖组、苷元组。通过在T₃-T₄之间横断右侧半脊髓制备SCI模型,分别于术前1 d及术后1 d、1 w、4 w、8 w运用BBB评分评定大鼠后肢运动功能;术后8 w用TUNEL法检测神经细胞凋亡。结果 SCI组与药物干预各组BBB评分均明显低于同期正常组、假手术组（P<0.01）;术后4 w,BYHWD组和生物碱组大鼠的BBB评分高于SCI组（P<0.05）;术后8w,BYHWD组、生物碱组和苷组大鼠的BBB评分高于SCI组（P<0.05）。术后8 w, SCI组及药物干预各组大鼠细胞凋亡率明显高于正常组和假手术组（P<0.01）。BYHWD组、生物碱组和苷组大鼠的细胞凋亡率低于SCI组（P<0.01或P<0.05）;生物碱组、苷组、多糖组、苷元组的细胞凋亡率高于BYHWD组（P<0.01或P<0.05）。结论 BYHWD具有改善SCI大鼠后肢运动作用,其有效部位中的生物碱、苷可能为起效的主要物质基础,该作用机制可能与拮抗SCI大鼠运动皮质神经元凋亡有关。     

基于PCA-GRA的补阳还五汤及其精简方抗脑缺血损伤功效的谱效关系研究

采用高效液相色谱法获取12批补阳还五汤全方、14批补阳还五汤精简方指纹图谱化学成分的数据,运用主成分分析法（principal component analysis,PCA）对采集的数据进行降维处理,计算出综合排名第一的中药材指纹图谱批次。运用灰色关联度法（grey relational analysis,GRA）将所求批次的指纹图谱特征峰和脑损伤的保护作用关联起来,探讨补阳还五汤全方及精简方中指纹图谱共有峰和特有峰与脑损伤保护作用贡献程度的强弱关系。本研究结合PCA和GRA开展补阳还五汤谱效关系研究,能提升数据的有效性和准确度。     

补阳还五汤精简方对氧化应激损伤血管内皮细胞的保护作用研究

目的 观察补阳还五汤精简方对氧化应激损伤后血管内皮细胞的保护作用,并从核转录因子E2相关因子/抗氧化反应元件（NF-E2-related factor 2/ antioxidant response element,Nrf2/ARE）途径探讨其作用机制。方法 采用H2O2作用大鼠血管内皮细胞4 h建立体外血管内皮细胞氧化应激模型,根据不同处理分成正常组,模型组,补阳还五汤含药血清组（补阳组）,补阳还五汤精简方含药血清组（5%精简组、10%精简组、20%精简组）6组。采用倒置显微镜观察细胞形态;流式细胞术检测血管内皮细胞调亡;测定细胞SOD活力、MDA含量;采用Western blot法检测细胞Nrf2、血红素加氧酶-1（HO-1）蛋白的表达。结果 与模型组比较,含药血清组均能不同程度改善细胞形态,升高细胞存活率,其中10%精简组较5%精简组、20%精简组细胞损伤程度低;与模型组比较,补阳组和10%精简组可有效抑制细胞凋亡（P<0.05）;与模型组比较,补阳组及10%精简组可显著提升SOD活力（P<0.01）;补阳组、10%精简组及20%精简组可降低MDA含量（P<0.05）;补阳组及10%精简组可明显上调Nrf2、HO-1蛋白表达（P<0.05）。结论 10%补阳还五汤精简方可以显著减轻氧化应激造成血管内皮细胞的损伤,抑制细胞调亡,这一作用可能与上调Nrf2/ARE抗氧化信号通路途径表达有关。     

补阳还五汤联合BMSCs移植对脊髓损伤气虚血瘀证红核神经元的影响

目的 探讨补阳还五汤（Buyang Huanwu Decoction,BYHWD）联合骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）移植对保护脊髓损伤（sipnal cord injury,SCI）气虚血瘀证红核神经元是否能产生协同增效作用。方法 将30只雄性SD大鼠随机分为5组：正常组、气虚血瘀组、BYHWD组、BMSCs组、BYHWD+BMSCs组,每组6只。采用游泳力竭法联合红核脊髓束（rubrospinal tract,RST）横断手术制备气虚血瘀证大鼠模型,并予以相应干预。通过斜板实验观察运动功能恢复情况,尼氏染色观察红核神经元胞体形态及数量,在RST横断点上方注射荧光金（FG）进行神经束路示踪,观察红核神经元胞体形态及数量。结果 术后14 d、28 d,BYHWD+BMSCs组斜板实验评分高于气虚血瘀组、BYHWD组及BMSCs组（P<0.05或P<0.01）。尼氏染色显示与正常组相比,气虚血瘀组尼氏体体积及数量减少,胞浆染色较浅;BYHWD组、BYHWD+BMSCs组的情况优于气虚血瘀组,尤其是BYHWD+BMSCs组。FG逆行示踪显示气虚血瘀组胞体荧光强度减弱、形态不规则、边缘模糊不清,且红核正常神经元数目较正常组明显减少（P<0.01）,BYHWD组、BMSCs组、BYHWD+BMSCs组较模型组增加（P<0.01）,特别是BYHWD+BMSCs组（P<0.01）。结论 BYHWD联合BMSCs移植对保护SCI气虚血瘀证逆行性溃变的红核神经元能产生协同增效作用。     

补阳还五汤对去势脑缺血雌性大鼠海马神经干细胞增殖及ERK/CREB信号通路的影响

目的 探讨补阳还五汤对去势脑缺血雌性大鼠海马神经干细胞（neural stem cells,NSCs）增殖及ERK/CREB信号通路的影响。方法 采用双侧卵巢切除术（OVX）结合大脑中动脉阻塞（MCAO）法复制去势雌性大鼠脑缺血复合模型,将造模后的36只大鼠随机分为双假手术组、复合模型组、雌激素组、雌激素+G15组、补阳还五汤组及补阳还五汤+G15组6组,每组6只,术后24 h给予相应药物灌胃连续干预14 d,同时每天腹腔注射BrdU、G15分别标记增殖细胞和阻断GPER-1。采用免疫荧光BrdU/Nestin双标法检测各组大鼠缺血侧海马齿状回NSCs增殖情况,免疫组化SP法检测ERK1/2、CREB1磷酸化蛋白表达水平。结果 补阳还五汤组和雌激素组缺血侧海马DG区BrdU/Nestin双标阳性细胞及pERK1/2、pCREB1阳性细胞表达均增加,与复合模型组比较有显著性差异（P<0.05）,但补阳还五汤组要多于雌激素组（P<0.05）。与补阳还五汤组比较,补阳还五汤+G15组缺血侧海马DG区BrdU/Nestin双标阳性细胞及及pERK1/2、pCREB1阳性细胞表达均减少（P<0.05）。结论 补阳还五汤可以促进去势脑缺血雌性大鼠缺血侧海马DG区神经干细胞增殖,激活ERK/CREB信号通路,可能是其发挥类雌激素作用、促进内源性神经再生作用机制之一。     

整合素αvβ3介导EPCs修复损伤血管内皮及补阳还五汤的干预作用

目的 探讨补阳还五汤促进EPCs修复损伤血管内皮的作用,从归巢环节阐释其作用机制,为中医药防治心脑血管疾病提供参考。方法 以补阳还五汤灌胃及尾静脉输注EPCs作用于内皮损伤的模型大鼠,从血管内皮形态、EPCs归巢等方面评价内皮损伤修复情况,从整合素αvβ3和αvβ5介导的SDF-1/CXCR-4信号通路了解该方促进EPCs归巢的机制。结果 与单用EPC组（E组）和单用药物组（b组）比较,补阳还五汤联合EPC组（B组）αvβ3表达显著增加（P<0.05）,血管SDF-1表达显著增高（P<0.01）。结论 补阳还五汤能促进EPC修复损伤的血管内皮,其作用机制可能与该方能上调整合素αvβ3介导的SDF-1信号通路相关蛋白,促进EPCs的归巢有关。     

HPLC测定补阳还五汤总苷中黄芪甲苷和芍药苷的含量

目的建立高效液相色谱法测定补阳还五汤总苷中黄芪甲苷和芍药苷的含量。方法色谱柱为Kromasil C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),黄芪甲苷测定:蒸发光散射检测器,流动相为甲醇∶水=80∶20(v/v);漂移管温度60℃;气体流量1.5 L/min;输出压力0.5 MPa;柱温30℃。芍药苷测定:流动相为甲醇∶水=23∶77(v/v);流速为1 mL/min,检测波长:218 nm,柱温:30℃。结果黄芪甲苷在0.57～9.10μg时,Y=1.506 3X+2.409 6,r=0.999 4;芍药苷在0.48~7.70μg时,Y=598.91X-2.334 6,r=0.999 9;其线性关系良好,平均加样回收率分别为99.62%和101.1%,RSD为2.6%和1.7%(n=6)。结论本法快速、简便、准确、灵敏度高,适用于黄芪甲苷及芍药苷的含量测定,并为其总苷物质制备工艺研究提供质量标准依据。     

补阳还五汤超微饮片对局灶性脑缺血大鼠神经干细胞移植后Bcl-2、Bax表达的影响

目的 探讨补阳还五汤超微饮片对局灶性脑缺血大鼠神经干细胞移植后凋亡相关基因Bcl-2、Bax的影响。方法 将SD大鼠80只,雌雄各半,复制局灶性脑缺血大鼠模型,造模后按神经功能缺损评分进行分层,随机分为5组,每组15只,分别于移植后7 d、14 d、28 d进行神经功能评分,采用补阳还五汤超微饮片与传统饮片予以干预,于相应时间点处死大鼠后采用免疫组化法检测凋亡基因Bcl-2、Bax。结果 补阳还五汤能显著减轻神经功能缺损,Bcl-2、Bax在各时间点（7 d、14 d、28 d）表达与模型组比较差异有统计学意义（P<0.05）,模型加移植加补阳还五汤超微饮片组上调Bcl-2、拮抗Bax表达的作用优于模型加移植加补阳还五汤传统饮片组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 补阳还五汤可调节脑缺血后Bcl-2、Bax的表达,是其促进神经功能恢复的可能机制之一,且超微饮片组的作用较传统饮片组更加显著。     

桥接治疗急性缺血性脑卒中患者的血管再通率及远期神经功能恢复分析

目的 探讨重组组织型纤溶酶原激活物（rtPA）静脉溶栓联合血管内介入治疗（即桥接治疗法）对急性缺血性脑卒中患者的治疗效果。方法 选取我院（2015年1月-2018年1月）收治的100例急性缺血性脑卒中患者进行回顾性分析,根据治疗方法分为观察组47例（桥接治疗法）、对照组53例（rtPA静脉溶栓疗法）,对比两组治疗后的血管再通率、神经功能恢复情况。结果 观察组前循环梗死血管（颈内动脉、大脑前动脉、大脑中动脉）再通率91.49%,对照组前循环梗死血管再通率50.94%,两组比较差异具有统计学意义（P<0.01）;观察组治疗14 d、治疗28 d、治疗3个月,神经功能缺损（NIHSS）评分均显著的低于对照组（P<0.01）;根据mRS标准,观察组的预后良好87.23%,对照组预后良好52.83%,两组比较差异具有统计学意义（P<0.01）;观察组的并发症发生率8.51%,对照组并发症发生率16.98%,两组比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论 桥接治疗对缺血性脑卒中患者的效果优于rtPA静脉溶栓疗法,对于患者远期神经功能恢复具有显著效果。     

白芍络石方治疗脑梗死后痉挛性瘫痪临床观察

目的 观察白芍络石方治疗脑梗死后痉挛性瘫痪的临床疗效及其安全性。方法 选取符合诊断的脑梗死后痉挛性瘫痪患者60例,采用随机、平行对照方法,分为中药组及对照组各30例。对照组予以常规治疗,中药组在常规治疗的基础上加用白芍络石方治疗,两组疗程均为4周。观察治疗前、治疗第2周末、第4周末的肌力（Robert Lovett法评定）、上肢肌张力（MAS评分评价）、下肢肌张力（CSS评分评价）、神经功能缺损程度（NIHSS评分评价）及日常生活能力（MBI评分评价）的变化,并观察干预后的不良反应。结果 治疗2周后中药组患者肢体上下肢肌力、上肢肌张力改善明显优于对照组（P<0.05）,治疗4周后中药组下肢肌力、MBI评分、NIHSS评分改善明显优于对照组（P<0.05）,且治疗过程中未出现明显血常规、肝肾功能异常等不良反应。结论 白芍络石方能改善脑梗死后偏瘫患者的运动能力,缓解偏瘫上肢的痉挛,提升其日常生活能力,且安全可靠。     

应用logistic回归模型预测急性缺血性脑卒中发生概率的病例对照研究

目的 通过分析急性缺血性脑卒中病人发病的影响因素,建立发病概率预测模型,为缺血性脑卒中提供早期防治依据。方法 采用病例对照研究方法,进行统计学分析,应用logistic回归分析建立发病概率预测模型并计算ROC曲线（受试者工作特征曲线receiver operating characteristic curve,ROC）进行评价。结果 病例组超急性期血清N末端脑钠肽前体（NT-proBNP）、星形胶质细胞特异性蛋白（S100B）、超敏C反应蛋白（Hs-CRP）、溶血磷脂酸（LPA）的水平均高于对照组,金属基质蛋白酶-9（MMP-9）与对照组比较差异无统计学意义;眼底动脉硬化（AS）、LPA通过筛选进入logistic回归模型,计算ROC曲线下面积达0.976 1。结论 NT-proBNP、S100B、Hs-CRP、LPA均可较好地预测急性缺血性脑卒中的发生,LPA和AS的logistic回归模型能较为准确地预测缺血性脑卒中的发病概率。     

桂枝茯苓丸佐治急性缺血性脑卒中临床疗效及安全性的Meta分析

目的 系统评价桂枝茯苓丸治疗急性缺血性脑卒中的临床疗效及安全性。方法 计算机检索中国科技期刊全文数据库（VIP）、中国期刊全文数据库（CNKI）、中国生物医学文献数据库（CBM）和万方数据库（wanfang）、Web of Science、Medline及PubMed。检索时间均为从该数据库最早收录时间至2017年2月,手工检索作为辅助,收集桂枝茯苓丸治疗急性缺血性脑卒中的临床随机对照试验（RCT）和半随机对照试验（quasi-RCT）,依据Cochrane协作网系统评价方法进行评价,使用Revman 5.3进行Meta分析。结果 经筛选纳入6篇文献,共451例。Meta分析结果显示：桂枝茯苓丸组临床有效率[RR=1.16,95% CI（1.06,1.26）,P=0.000 7],2个采用NIHSS评估神经功能缺损试验（107例）结果显示[WMD=0.55,95% Cl（-0.69,1.79）,P=0.39]。描述性分析结果显示不良反应发生率低,复发率低。结论 桂枝茯苓丸联合常规治疗具有一定疗效,且不良反应少,安全性较高,然而对神经功能缺损症状改善未见显著疗效。但由于现有研究数量和质量限制,今后仍需要进行更多高质量的随机对照试验研究以提供更可靠的循证医学证据。     

血浆D-二聚体和超敏C反应蛋白检测在急性脑梗死中的临床价值

目的探讨血浆D-二聚体(D-dimer,D-D)及超敏C反应蛋白(high-sensitivity C-reactive protein,hs-CRP)水平与急性脑梗死(acute cerebral infarct,ACI)的关系。方法采用免疫透射比浊法检测102例ACI患者和50例正常对照者血浆D-D和hs-CRP水平。根据梗死灶大小102例ACI患者分为大梗死灶组、中梗死灶组和小梗死灶组,并进行相关统计分析。结果 ACI组患者血浆D-D和hs-CRP水平显著高于正常对照组(P0.01);大梗死灶组D-D和hs-CRP水平明显高于中、小梗死灶,而中梗死灶组D-D和hs-CRP水平高于小梗死灶组。结论监测血浆D-D和hs-CRP能为ACI的临床诊断、病情判断提供重要的参考依据。