基于RAGE/NF-κB/mTOR信号通路探讨滋阴活血解毒方对AGEs诱导VEC损伤的干预作用

目的 观察滋阴活血解毒方对糖基化终末产物（advanced glycosylation end products,AGEs）诱导人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）损伤的影响及RAGE/NF-κB/mTOR信号通路的变化,探讨该方对AGEs诱导静脉内皮细胞（vein endothelial cell,VEC）损伤的保护作用。方法 培养的HUVEC细胞以100 mg/ml的AGEs诱导损伤,随机分为7个组,除空白组外,其中3组分别加入RAGE抑制剂FPS-ZM1、NF-κB抑制剂PDTC和mTOR抑制剂雷帕霉素（RAP）,余下3组加入各种抑制剂后加入50 mg/mL滋阴活血解毒方浓缩药液。以western-blot法检测RAGE和mTOR的表达,以免疫组化方法检测NF-κB核转移状况。结果 细胞添加AGEs后细胞内出现异常增殖,细胞数量明显增多,多数细胞变形皱缩,胞膜轮廓模糊,细胞内出现粗糙样颗粒变化;抑制剂组及抑制剂加中药组都表现出不同程度的逆转这种损伤的作用,特别是抑制剂加中药组,见梭形正常细胞较多,圆缩形细胞减少。中药加抑制剂组RAGE表达量比单纯抑制剂组显著降低（P<0.01）;中药加抑制剂组mTOR表达量比单纯抑制剂组显著降低（P<0.01）;中药加抑制剂NF-κB的核转移阳性检测率比单纯抑制剂组显著降低（P<0.01）。结论 滋阴活血解毒方能降低AGEs对VEC的损伤,降低RAGE、NF-κ、mTOR的表达。     

疏肝健脾解毒方对乳腺癌癌前病变肝郁证模型大鼠血清性激素水平的影响

目的 研究疏肝健脾解毒方对乳腺癌癌前病变肝郁证模型大鼠血清性激素水平的影响。方法 采用二甲基苯蒽灌胃及夹尾法制备乳腺癌癌前病变肝郁证大鼠模型,随机分为模型组、疏肝健脾解毒方组、三苯氧胺组、小金丸组,同时设空白对照组,分别干预4周后采用放射免疫法检测血清雌二醇、孕酮、泌乳素、黄体生成素和卵泡刺激素含量。结果 模型组血清雌二醇、孕酮、泌乳素、黄体生成素和卵泡刺激素水平均较空白对照组高,差异均有显著统计学意义（P<0.01）;各用药组血清性激素水平低于模型组,差异均有显著统计学意义（P<0.01）;疏肝健脾解毒方组雌二醇及黄体生成素水平低于对照药三苯氧胺组及小金丸组,差异均有统计学意义（P<0.05）;疏肝健脾解毒方组血清孕酮、卵泡刺激素、泌乳素水平高于三苯氧胺组,低于小金丸组,孕酮水平间差异有统计学意义（P<0.01）,卵泡刺激素、泌乳素水平水平间差异无统计学意义（P>0.05）。结论 疏肝健脾解毒方可有效降低乳腺癌癌前病变肝郁证大鼠模型血清性激素水平。     

灵仙通络方对C518大鼠膝关节退变软骨细胞增殖、Ⅱ型胶原及基质金属蛋白酶-13表达的影响

目的 探讨灵仙通络方对C518大鼠膝关节退变软骨细胞增殖、Ⅱ型胶原（COL-Ⅱ）及基质金属蛋白酶-13（MMP-13）的影响。方法 选取C518 大鼠膝关节软骨细胞株,随机分为中药组（灵仙通络方）、西药组（氨糖美辛）和对照组（氯化钠溶液）,进行培养、诱导退变等处理,于给药后第 1、2、3 d,分别检测中药组、西药组和对照组不同浓度下对软骨细胞增殖、COL-Ⅱ及MMP-13表达的影响。结果 同一时间点的中药组、西药组不同浓度之间噻唑蓝（MTT）值差异有统计学意义（P<0.01）。对照组不同浓度氯化钠溶液的MTT值差异不具有统计学意义（P>0.05）。在COL-Ⅱ免疫组化染色中,中药组与西药组和对照组相比差异有统计学意义（P<0.01）,且中药组优于西药组（染色指数χ²=16.26,df=2,P<0.01）。在 MMP-13 免疫组化染色中,对照组较中药组、西药组差异有统计学意义（P<0.01）,且中药组优于西药组（染色指数χ²=54.31,df=2,P<0.01）。结论 C518 大鼠膝关节退变软骨细胞经灵仙通络方干预后能够促进其增殖,调节COL-Ⅱ、MMP-13的表达,延缓膝关节骨性关节炎疾病的发展进程。     

滋肾活血方对血管性痴呆大鼠学习记忆能力和海马形态学的影响

目的 探讨滋肾活血方对血管性痴呆（vascular dementia,VD）大鼠行为学和海马病理形态学的影响。方法 采用改良的双侧颈总动脉结扎法（2-VO法）制作VD大鼠模型,滋肾活血方干预。给药4周后,用水迷宫检测行为学;HE染色观察海马病理形态学的改变。结果 与模型组相比滋肾活血组逃避潜伏期缩短（P<0.05）,跨越平台次数增多（P<0.05）,HE染色示海马损伤明显减轻。结论 滋肾活血方可以改善VD大鼠的学习记忆能力,减轻海马组织损伤,对VD大鼠有一定的治疗作用。     

疏肝健脾解毒方对乳腺癌癌前病变肝郁证大鼠模型乳腺组织血管生成的影响

目的 研究中药疏肝健脾解毒方对乳腺癌癌前病变肝郁证大鼠模型乳腺组织微血管密度（microvessel density, MVD）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）及乳腺组织结构的影响,探讨其防治乳腺癌的作用机制。方法 采用二甲基苯蒽灌胃及夹尾法制备乳腺癌癌前病变肝郁证大鼠模型,随机分为模型组（蒸馏水）、中药组（疏肝健脾解毒方10.35 g/kg）、三苯氧胺组（2.0 mg/kg）,另取10只为空白对照组,分别相应干预4周后,制备乳腺组织石蜡切片进行病理学观察,采用免疫组织化学方法及Western-blot法检测各组大鼠乳腺组织中MVD及VEGF表达情况。结果 免疫组化结果显示,与模型组比较,中药组及三苯氧胺组乳腺组织非典型增生现象减少,乳腺组织MVD及VEGF水平降低,差异有统计学意义（P<0.05）,中药组MVD及VEGF水平稍低于三苯氧胺组,差异无统计学意义（P>0.05）;Western-blot结果显示：与模型组比较,中药组及三苯氧胺组乳腺组织非典型增生现象减少,乳腺组织MVD及VEGF水平降低,差异有统计学意义（P<0.05）,中药组MVD及VEGF水平与三苯氧胺组比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论 中药疏肝健脾解毒方可在一定程度上降低乳腺癌癌前病变乳腺组织非典型增生倾向,其机制可能与降低VEGF水平、抑制新生血管生成有关。     

乌紫解毒颗粒联合卡泊三醇倍他米松软膏治疗结节性痒疹的临床疗效及对TNF-α表达的影响

目的 观察中药乌紫解毒颗粒联合卡泊三醇倍他米松软膏治疗结节性痒疹的临床疗效和安全性及对血清中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-alpha,TNF-α）表达的影响。方法 将65例结节性痒疹患者随机分为对照组32例与治疗组33例,对照组予以卡泊三醇倍他米松软膏外用,治疗组在对照组的基础上加用中药乌紫解毒颗粒口服,治疗4周后对两组的临床疗效进行比较,并检测两组患者治疗前后血清TNF-α的表达水平。结果 对照组总有效率62.5%,治疗组总有效率84.8%,两组临床疗效比较差异具有统计学意义（P<0.05）;治疗后治疗组的皮损积分、瘙痒程度均低于对照组（P<0.05）;两组患者血清TNF-α的表达水平较正常组（健康体检者）明显升高（P<0.05）,治疗组治疗后TNF-α水平较治疗前明显降低（P<0.05）,且低于对照组（P<0.05）;两组患者均未见明显不良反应发生。结论 中药乌紫解毒颗粒联合卡泊三醇倍他米松软膏治疗结节性痒疹临床疗效确切,安全可靠,且能降低血清TNF-a的表达水平。     

中药保留灌肠治疗湿热内蕴型溃疡性结肠炎的临床研究

目的 探讨中药保留灌肠治疗湿热内蕴型溃疡性结肠炎的疗效及对血清中白细胞介素-8（interleukin-8,IL-8）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）表达的影响。方法 选取80例湿热内蕴型溃疡性结肠炎患者,分为观察组（n=40）和对照组（n=40）,2组均给予奥沙拉嗪治疗,对照组给予0.5%甲硝唑注射液+锡类散治疗,观察组给予自拟中药方煎剂+锡类散治疗,观察两组治疗前及治疗30 d后的中医症状积分、中医证候疗效、复发率、电子肠镜下黏膜疗效、治疗前及治疗30 d后的病变组织炎症情况。结果 治疗后,两组的中医症状积分显著降低（P<0.05）,观察组变化幅度显著大于对照组（P<0.05）;观察组的中医疗效总有效率（90.0%）显著高于对照组（72.5%）（P<0.05）;观察组的电子肠镜黏膜总有效率（92.5%）显著高于对照组（75.0%）（P<0.05）,复发率（7.5%）显著低于对照组（25.0%）（P<0.05）;治疗后,两组血清中IL-8及TNF-α浓度显著下降（P<0.05）,观察组下降幅度显著大于对照组（P<0.05）。结论 中药保留灌肠治疗湿热内蕴型溃疡性结肠炎疗效显著,可明显改善相关症状,提高观察组黏膜修复疗效,减轻病变组织炎症反应,患者复发率低。     

益气解毒法对胃癌术后辅助化疗患者生存质量的影响

目的 观察益气解毒法对胃癌术后辅助化疗患者生存质量的影响。方法 50例胃癌术后采用替吉奥和奥利沙铂（SOX方案）进行辅助化疗患者（观察组）,配以益气解毒法中医治疗2个化疗周期,观察化疗药物的毒副反应、Karnofsky评分和QLQ-30评分,并与50例胃癌术后单用SOX方案进行辅助化疗患者（对照组）进行比较。结果 毒副反应：在贫血、恶心呕吐、周围神经毒性、口腔黏膜损害和肝功能损害方面,观察组级别明显低于对照组（P<0.05）;Karnofsky评分：观察组Karnofsky评分优于对照组（P<0.05）;QLQ-30评分：对照组治疗前后疲乏无力、恶心呕吐和食欲减退的评分较治疗前显著升高（P<0.05）,观察组治疗后情绪功能和整体生活质量评分较治疗前显著升高（P<0.05）,其余各项目治疗前后评分差异无统计学意义（P>0.05）。结论 益气解毒法可减轻胃癌术后辅助化疗毒副反应,提高患者生存质量。     

加味痛泻要方配合穴位贴敷治疗腹泻型肠易激综合征临床观察

目的 观察加味痛泻要方配合穴位贴敷治疗腹泻型肠易激综合征（肝郁脾虚证）的临床疗效。方法 将90例腹泻型肠易激综合征（肝郁脾虚证）患者随机分为综合治疗组、中药治疗组和西药对照组,综合治疗组予加味痛泻要方口服联合穴位贴敷,中药治疗组以加味痛泻要方口服,西药对照组予马来酸曲美布汀片剂配合双歧杆菌三联活菌胶囊口服。结果 治疗后总有效率综合治疗组为93.3%,中药治疗组为80.0%,西药对照组为66.7%,综合治疗组疗效优于中药治疗组及西药对照组（P<0.05）,中药治疗组优于西药对照组 （P<0.05）。3组治疗后中医证候总积分、腹痛VAS评分及单项症状积分均显著低于治疗前（P<0.05）,且综合治疗组各积分低于中药治疗组及西药对照组（P<0.05）,中药治疗组低于西药对照组（P<0.05）。3组在治疗中未发生不良反应。结论 加味痛泻要方配合穴位贴敷治疗腹泻型肠易激综合征,能明显改善临床症状,提高临床疗效,且无不良反应。     

滋阴活血解毒方对AGEs诱导VEC损伤黏附分子及凝血相关因子表达的影响

目的 观察滋阴活血解毒方对糖基化终末产物（advanced glycation end-producs,AGEs）诱导血管内皮细胞（vascular endothelial cell,VEC）损伤的影响及其黏附分子、凝血相关因子表达的变化,进一步探讨该方对AGEs诱导VEC损伤的保护作用。方法 以人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）作为实验对象,以终浓度（100 mg/L）的AGEs诱导HUVEC损伤。各模型组及给药组细胞分别继续培养12、24、48 h。在显微镜下观察各组细胞形态变化,并以Western-blot法检测各组黏附分子VCAM-1、ICAM-1的表达;以RT-PCR方法检测TF、TM mRNA表达。结果 相对于空白组细胞,模型组细胞出现异常增殖,细胞数量明显增多,多数细胞变形皱缩,胞膜轮廓模糊,细胞内出现粗糙样颗粒变化,VCAM-1、ICAM-1、TF表达明显上调,TM表达下调,且在作用24 h后差异有显著性意义（P<0.01）;相同时间点,给药组较模型组圆缩形细胞减少,能下调VCAM-1、ICAM-1、TF表达,上调TM表达,且随着作用时间的延长更明显（P<0.01）。结论 滋阴活血解毒方能抑制AGEs对VEC的损伤,降低黏附分子的表达,下调表达组织因子mRNA转录,上调血栓调节素mRNA转录。     

黄芪解毒汤对乳腺癌细胞Jag1基因和CyclinD1蛋白表达影响的研究

目的 探讨黄芪解毒汤抑制乳腺癌复发转移的机制是否与其干预Jag1基因和CyclinD1蛋白在人乳腺癌MCF-7细胞中的表达有关。方法 采用SPF级SD大鼠灌胃法制备黄芪解毒汤组、阿霉素组、参一胶囊组、生理盐水组的含药血清。运用细胞培养技术,MTT法检测发现最佳抑制浓度;以最佳抑菌浓度即20%浓度的含药血清干预人乳腺癌细胞,RT-PCR检测Jag1基因,Western-blot检测CyclinD1蛋白的表达。结果 各组与生理盐水血清组比较,Jag1基因和CyclinD1蛋白表达均明显降低（P<0.01）;与其他各组比较阿霉素血清组抑制作用最强（P<0.01）;黄芪解毒汤血清组与参一胶囊血清组比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论 黄芪解毒汤可显著降低MCF-7细胞Jag1基因和CyclinD1蛋白表达,该结果可为黄芪解毒汤在乳腺癌术后治疗中的作用提供实验依据。     

滋肾活血方对血管性痴呆大鼠NR2A表达的影响

目的 探讨滋肾活血方对血管性痴呆（vascular dementia,VD）大鼠NR2A表达的影响。方法 采用改良的双侧颈总动脉结扎法（2-VO法）制作VD大鼠模型,将其随机分为假手术组、模型组、滋肾活血组及奥拉西坦组。给药4周后,用免疫组化和RT-PCR检测NR2A及其mRNA的表达。结果 与假手术组相比,模型组NR2A及其mRNA表达均降低（P<0.05）;与模型组相比,滋肾活血组及奥拉西坦组NR2A及其mRNA表达增高（P<0.05）。结论 滋肾活血方可提高VD大鼠的学习记忆能力,这可能与上调NR2A的表达有关。     

丹参通络解毒汤联合骨髓干细胞动员对心肌缺血再灌注损伤大鼠内皮的保护作用

目的 通过观察心肌缺血再灌注损伤大鼠NO水平、eNOS蛋白和eNOS mRNA表达,探讨丹参通络解毒汤联合骨髓干细胞动员对心肌缺血再灌注损伤大鼠内皮保护作用。方法 大鼠60只,随机分为假手术组、模型组、重组人红细胞生成素（recombinant human erthropoietin,rhEPO）动员组、丹参通络解毒汤组;丹参通络解毒汤联合动员组,每组12只。于造模后14 d采用放射免疫法测定NO水平、免疫组化法测定eNOS蛋白和采用实时荧光定量PCR法测定eNOS mRNA表达。结果 与假手术组比较,各组NO水平,eNOS蛋白和eNOS mRNA表达均明显降低,差异具有统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,rhEPO动员组、丹参通络解毒汤组和丹参通络解毒汤联合动员组NO水平升高,eNOS蛋白和eNOS mRNA表达明显提高,差异具有统计学意义（P<0.01）;与rhEPO动员组和丹参通络解毒汤组比较,丹参通络解毒汤联合动员组NO水平显著升高,eNOS蛋白和eNOS mRNA表达明显提高,差异具有统计学意义（P<0.01）。结论 丹参通络解毒汤可以提高缺血心肌eNOS mRNA表达,进一步促进eNOS蛋白表达,升高NO水平,是该方保护心肌缺血再灌注损伤大鼠内皮重要机制之一,同时该方联合动员剂对内皮保护有增强促进作用。     

解毒化瘀方对凝血酶合并缺氧诱导PC12细胞损伤ERK1/2信号通路表达的影响

目的 探讨急性缺血性中风（AIS）瘀毒病机的分子机制及解毒化瘀方对凝血酶合并缺氧损伤的保护作用。方法 （1）用凝血酶合并缺氧损伤PC12细胞,模拟急性缺血性中风的体外细胞模型。（2）将细胞分为空白组,模型组,解毒化瘀方含药血浆组和PD98059组（MEK抑制剂组）,应用荧光定量实时RT-PCR方法检测MEK1、PAR-1及ERK1/2的mRNA表达,应用免疫荧光法检测ERK1/2、P-ERK1/2的蛋白表达。结果 PCR结果提示：模型组MEK1、PAR-1及ERK1/2的mRNA表达与空白对照组相比显著升高（P<0.01）,解毒化瘀方组和PD98059组MEK1、PAR-1及ERK1/2的mRNA表达较模型组显著降低（P<0.01）,免疫荧光结果提示：解毒化瘀方组和PD98059组ERK1/2、P-ERK1/2的蛋白表达较模型组显著降低（P<0.01）。结论 解毒化瘀方以凝血酶为作用的分子靶点,能够显著降低ERK1/2信号通路在缺血性中风体外细胞模型中的表达。     

低温冲击疗法联合活血止痛汤治疗急性踝关节损伤30例

目的 观察低温冲击疗法联合活血止痛汤治疗急性踝关节损伤的临床疗效。方法 选取90例急性踝关节损伤的患者,随机分为观察组、对照组和中药组各30例,中药组予以加压固定配合活血止痛汤内服,对照组在中药组基础上加用间断冰敷法治疗,观察组在中药组基础上加用低温冲击疗法治疗,比较3组患者的临床疗效。结果 治疗后3组患者VAS评分、周径差值均较治疗前明显下降（P<0.05）,治疗后观察组、对照组VAS评分、周径差值均明显低于中药组（P<0.05）,观察组周径差值明显低于对照组（P<0.05）。结论 低温冲击疗法联合活血止痛汤内服治疗急性踝关节损伤,能快速消肿止痛,比间断冰敷法及口服活血止痛汤疗效更优,值得临床推广应用。     

补肾祛痰活血汤对缺血再灌注损伤大鼠Occludin、ZO-1蛋白的调节作用

目的 观察补肾祛痰活血汤对预处理脑缺血再灌注损伤的大鼠脑组织水肿、血脑屏障通透性及损伤区咬合蛋白（Occludin）、闭锁小带蛋白（zonula occludens-1,ZO-1）的影响。方法 SD成年雄性大鼠50只,按随机数字表法分为正常组、模型组、假手术组、治疗组、对照组,每组10只。治疗组给补肾祛痰活血汤、对照组给消栓通络胶囊,正常组、模型组、假手术组给与相应量的双蒸馏水。采用线栓法复制脑缺血再灌注损伤模型,72 h后,干湿重法测定脑含水量反映脑水肿程度,用免疫组织化学方法测定损伤区Occludin、ZO-1蛋白的表达量,并对各结果进行相关性分析。结果 与正常组、假手术组比较,模型组、治疗组、对照组72 h时间点大鼠脑组织含水量较正常组、假手术组要增高一些,脑组织损伤区周围Occludin、ZO-1蛋白表达明显降低（P<0.01）。脑组织含水量与脑组织损伤程度正相关,脑组织损伤区周围Occludin、ZO-1蛋白与脑组织损伤程度呈负相关。结论 补肾祛痰活血汤对缺血性脑损伤发生后损伤区Occludin、ZO-1蛋白含量降低有抑制作用,抑制血脑屏障通透性增高,减轻脑水肿形成。