ABA对甘薯体细胞胚分化及再生的影响

以徐薯28、徐薯29、徐55-2、徐20-1等4个甘薯新品种(系)茎尖分生组织诱导的胚性愈伤组织为试验材料,研究脱落酸(ABA)在甘薯体细胞胚诱导和植株再生中的作用.结果表明,ABA对体细胞胚发生的调节作用与甘薯基因型和作用时间有关.胚性愈伤组织在体胚诱导培养基( MS+ 1.0 mg/mL ABA)上,10 d即可产生大量体细胞胚,其中徐薯29体胚诱导率最高,达90％以上,徐薯28次之,徐20-1最低;ABA作用时间延长至30 d时,所有品种(系)体细胞胚均褐变死亡,但将ABA处理10 d后得到的体胚进一步转移至MS基本培养基上,体胚可再生出完整植株,但再生率和植株长势明显不如未经ABA处理组.在MS固体基本培养基上,各品种(系)胚性愈伤组织形成体细胞胚时间延长,但延长培养时间至20d时,最终可获得与ABA诱导基本相同的结果,说明用ABA诱导胚性愈伤可以缩短形成体细胞胚所需时间,促进体胚的成熟.     

甘薯不同外植体体细胞胚的发生及植株再生(英文)

[目的]分别以甘薯品种徐薯22的叶片与茎尖作为外植体,研究利用不同外植体通过体细胞胚胎再生途径得到再生植株的方法。[方法]将徐薯22的叶片和茎尖分别置于MSB和MSD培养基中诱导胚性愈伤,再将胚性愈伤置于MS培养基培养,观察体细胞胚的发生情况,最后对不同外植体得到的植株再生频率进行比较。[结果]用叶片作为外植体得到的胚性愈伤平均诱导频率为95.69%,而茎尖的则为30.56%;不同外植体在体细胞胚发生途径中的形态特征有一定差异;用叶片作为外植体的植株再生频率为60.61%,用茎尖的则为22.00%,且采用不同外植体诱导得到的再生植株无形态变化。[结论]在该试验中,体细胞胚的发生及植株再生的最适外植体为甘薯品种徐薯22的叶片。     

甘薯不同外植体体细胞胚的发生及植株再生

[目的]分别以甘薯品种徐薯22的叶片与茎尖作为外植体,研究利用不同外植体通过体细胞胚胎再生途径得到再生植株的方法。[方法]将徐薯22的叶片和茎尖分别置于MSB和MSD培养基中诱导胚性愈伤,再将胚性愈伤置于MS培养基培养,观察体细胞胚的发生情况,最后对不同外植体得到的植株再生频率进行比较。[结果]用叶片作为外植体得到的胚性愈伤平均诱导频率为95.69%,而茎尖的则为30.56%;不同外植体在体细胞胚发生途径中的形态特征有一定差异;用叶片作为外植体的植株再生频率为60.61%,用茎尖的则为22.00%,且采用不同外植体诱导得到的再生植株无形态变化。[结论]在该试验中,体细胞胚的发生及植株再生的最适外植体为甘薯品种徐薯22的叶片。     

木薯品种新选048体细胞胚发生及植株再生初步研究

[目的]初步探讨木薯品种新选048体细胞胚发生及植株再生的影响因素,为木薯遗传转化和品种改良奠定基础.[方法]以不同外植体(未完全张开叶、侧芽茎尖、幼嫩叶柄及完全张开叶的顶部、基部、叶缘、中部和全叶)为材料,对木薯体细胞胚发生和愈伤组织生长进行观察,并探讨6-BA(0.01、0.05、0.10、0.50、1.00 mg/L)对体细胞胚植株再生的影响.[结果]不同木薯外植体均能诱导愈伤组织,愈伤组织诱导率为48.30%~100.00%,但产生的愈伤组织生长状况表现不同.在MS+12.0 mg/L毒莠定(picloram)+20.0 g/L蔗糖+6.5 g/L琼脂培养基中,侧芽茎尖诱导获得的初生体细胞胚诱导率最高,达22.22%,平均产胚量为5.85个;而叶柄、未完全张开叶片或全张开叶片不同部位均不利于诱导体细胞胚,其诱导率极低,为0~5.00%.随着MS培养基中6-BA用量的增加,体细胞胚的成熟率不断增加(81.3%~100.0%),而在MS+0.01 mg/L 6-BA+0.02 mg/L NAA培养基中的植株再生率呈先升高后下降的变化趋势;当6-BA用量为0.10 mg/L时,植株再生率最高,为21.8%,且子叶生长正常.在1/3MS+0.02 mg/L NAA生根培养基中,再生植株均能诱导生根;在沙与表土混合基质中生根植株均能正常生长.[结论]新选048可以通过体细胞胚发生途径获得再生植株,但其发生率和再生率较低.     

不同植物生长调节物质对杂种落叶松胚性愈伤组织增殖的影响

以日本落叶松×长白落叶松的胚性愈伤组织为材料,研究不同植物生长调节物质对胚性愈伤组织增殖和体细胞胚形成能力的影响。结果表明:2,4-D质量浓度对胚性愈伤组织增殖有显著影响,胚性愈伤组织增殖率随2,4-D质量浓度的升高而下降。在添加2,4-D0.1mg·L-1 BA0.05mg·L-1 KT0.05mg·L-1与NAA0.5mg·L-1 BA0.05mg.L-1 KT0.05mg.L-1的培养基中,胚性愈伤组织可以长期维持与增殖;在添加IBA0.5mg·L-1 BA0.05mg·L-1 KT0.05mg·L-1的培养基中愈伤组织的增殖效果最好,增殖系数达到4.6倍,而且转到体细胞胚成熟培养基后形成的体细胞胚数也最多,达到88.6个·g-1。在添加2,4-D0.1mg·L-1 BA0.05mg·L-1 KT0.05mg·L-1的培养基增殖的胚性愈伤组织形成的体细胞胚的萌发率和植株再生率最高,分别为66.7%和50%。     

小麦成熟胚愈伤组织的诱导及植株再生体系的研究

以小麦的成熟胚为外植体,通过胚性愈伤组织诱导进行植株再生.研究结果表明,在MS+2,4-D(3.0 mg/L)+VB1(1.0 mg/L)的培养基中,成熟胚可较高频率的诱导产生愈伤组织,诱导率为72.3%,但愈伤组织质量较差;在低浓度2,4-D和添加了ABA的继代培养基中,愈伤组织质量明显改善,胚性愈伤组织增加.筛选继代的胚性愈伤组织置于分化培养基MS+6-BA(1.0mg/L)+KT(4.0 mg/L)+NAA(0.3 mg/L)中,分化率达73.18%.该研究建立了一套有效的以成熟胚为外植体的小麦组织培养再生体系.     

小麦成熟胚再生体系影响因素的研究

[目的]研究小麦离体培养的影响因素,探索小麦成熟胚愈伤组织诱导、继代、分化和植株再生的有效方法,建立一套成熟的植株再生体系,为进一步转基因研究奠定基础。[方法]采用河南的5个不同小麦品种,经小麦种子消毒,无菌取胚,然后接入诱导培养基进行愈伤组织诱导,愈伤组织再经继代培养、分化培养以至小麦植株再生。通过对它们浸种时间和成熟胚离体培养过程的观察,研究了不同预处理时间和植物激素,如2,4-D、ABA、KT、IAA和NAA,对小麦成熟胚愈伤组织在诱导、继代、分化和植株再生方面的一些影响。[结果]15h的浸种时间效果好;4.0mg/L2,4-D有利于愈伤组织形成;在继代培养基中添加0.3mg/LABA有利于小麦致密愈伤组织的诱导及再生能力的保持;KT和6-BA对提高芽的分化有显著作用;附加浓度1.5mg/LNAA和0.2mg/LIAA的1/2MS培养基可有效促进生根。[结论]浸种时间、基因型对小麦愈伤组织的继代、分化和再生有很大的影响,添加一定的外源激素有利于提高其植株的再生频率。     

花生体细胞胚发生及植株再生

以花生优良品种四粒红成熟种子胚轴为外植体,诱导体细胞胚发生并获得了再生植株。将胚轴切成小段,接种于附加40 mg/L的MS培养基上诱导胚性愈伤组织,愈伤组织转移至2,4-D 20 mg/L的MS培养基上形成体细胞胚。体细胞胚发生率达到66.67%;体细胞胚在BA浓度逐渐降低的MS培养基上培养,发育成完整植株。     

小麦成熟胚愈伤组织的诱导与分化

[目的]筛选再生能力强的基因型小麦品种,建立高效的小麦成熟胚高频植株再生系统。[方法]以小麦品种抗冻早-30、百麦4411和06-4046的成熟胚为外植体,以MS为基本培养基,添加不同激素,组配诱导、继代、分化和生根培养基,通过胚性愈伤组织诱导。探讨影响小麦愈伤组织诱导和分化的因素。[结果]2,4-D浓度为1—5mg／L时对3个小麦品种愈伤组织的诱导差异不大,诱导率均高于80％,但2,4-D浓度为2mg／L时更有利于诱导胚性愈伤组织,诱导率在90％以上;在抗冻早-30和百麦4411分化培养基中加入2mg／L KT有助于提高分化率和再生率,在06-4046分化培养基中加入0．5mg／L KT对小麦成熟胚的分化和再生苗比较有利。[结论]在MS培养基中添加2mg／L2,4-D和一定量的KT可促进小麦成熟胚愈伤组织的诱导和分化再生苗。     

湿地松及其杂种的体细胞胚胎发生与植株再生

【目的】明确适合湿地松Pinus elliottii及其杂交种的体细胞胚胎发生条件,建立体胚成熟萌发的技术。【方法】以2016年6月采集的2个湿地松家系(EE1,EE2)、2个湿地松杂交种家系(EC,EH)的未成熟合子胚(含胚乳)为材料,从诱导、增殖、成熟到萌发配制3个系列培养基,比较外植体采集时间、家系、基本培养基对胚性愈伤组织诱导的影响。用显微镜进行胚性愈伤组织鉴别后,进一步挑选诱导形成的胚性愈伤组织进行增殖、成熟、萌发,最终获得再生植株。【结果】湿地松及其杂交种合子胚的发育进程可划分为8个阶段,阶段Ⅱ、Ⅲ为未成熟胚,适合体胚发生,EC最早出现阶段Ⅲ合子胚。外植体诱导产生具有胚性胚柄团(ESM)结构的胚性愈伤组织,可进一步增殖。诱导培养基对愈伤组织形成及胚性愈伤组织占比具有较大影响,3种诱导培养基(T1、T2和T3)产生愈伤组织效率最高的为T1培养基(49.0%),胚性愈伤组织所占愈伤组织的比例最高为T2培养基(22.4%)。培养基配方的诱导率存在基因型间的差异,T1培养基整体诱导率低;T2培养基对家系EE1诱导率最高,为5.82%;T3培养基对参试材料均能诱导成功,且平均诱导率最高,为3.75%。随采样时间延后,家系EE1、EH的体胚诱导率逐渐增加,家系EE2、EC的体胚诱导率则随采样时间延后逐渐降低。体胚诱导率与合子发育阶段结果基本一致,阶段Ⅲ合子胚均出现较晚,前期诱导率低。胚性愈伤组织继代24次以后,胚活性逐渐降低。成熟培养基T1S和T3S可完成胚的成熟,平均每克成熟培养基分别成熟23.3和15.9个子叶胚,萌发率为32.1%,移栽保存率为47.8%。【结论】诱导培养基T3对参试家系均能诱导成功,T3具有较广泛适用性,各家系在阶段Ⅲ合子胚出现时表现出较大的诱导率,阶段Ⅲ合子胚可能为体细胞胚发生的最佳诱导阶段。建立了湿地松及其杂种体细胞胚发生方法并形成了再生植株。     

不同小麦品种成熟胚愈伤组织的培养研究

[目的]通过对河北省小麦品种的种子进行组织培养,探索适合河北省栽培小麦品种的培养条件,为河北省小麦的遗传改良工作奠定基础。[方法]对4种不同小麦品种的成熟胚进行离体培养,研究影响小麦愈伤组织诱导的因素。[结果]结果表明:将成熟胚盾片向上放置可明显提高愈伤组织的诱导率;利用2 mg/L 2,4-D并添加水解酪蛋白,可使不同品种小麦愈伤组织得出愈率均高达80%;此外,不同品种的出愈率随着2,4-D浓度的升高存在较大差别。[结论]该研究探索影响小麦成熟胚愈伤组织诱导的因素,建立一套合适的植株再生体系,为加强我国小麦的遗传转化奠定了基础。     

白皮松成熟合子胚的胚性愈伤组织诱导研究

[目的]建立白皮松体细胞胚胎发生快速繁殖体系,诱导出胚性愈伤组织。[方法]以白皮松成熟合子胚为外植体,以DCR作为基本培养基,研究不同浓度激素对外植体发育和胚性愈伤组织得率的影响。同时在不同激素浓度下对培养4周的外植体外形以及胚性愈伤组织进行了观察与分析。[结果]培养基中加入2,4-D可以使得外植体生长减慢,并出现愈伤组织,6-BA则使外植体的子叶变长,膨大并玻璃化。当2,4-D浓度为8mg/L、6-BA浓度为2mg/L时,胚性愈伤组织的诱导效果较好,诱导率平均为40.625%,该愈伤组织为白色半透明状,细胞小而细胞质浓,说明高浓度2,4-D和低浓度6-BA有利于白皮松成熟胚的胚性愈伤组织的获得。[结论]合适的激素种类和浓度是诱导白皮松成熟胚产生胚性愈伤组织的关键因素。     

啤酒大麦幼胚愈伤组织诱导和植株高效再生

[目的]筛选出组织培养特性优良的大麦遗传转化受体。[方法]以7个大麦优良品种为实验材料,幼胚为外植体,研究基因型、培养基、激素等对大麦幼胚愈伤组织的诱导及植株再生的影响。[结果]在愈伤组织诱导过程中,甘啤4号等4个品种在三种诱导培养基上出愈率均较高,达100%;2,4-D与dicamba联用的MS2培养基上形成的愈伤组织质量优于MS1和MS3;品种间愈伤组织分化率差异显著,秀81-47分化率为88.9%,略低于模式品种Golden Prom ise;不同分化培养基的分化效率不同,在RN1培养基上的平均分化率较高。[结论]该试验筛选出愈伤组织诱导频率和绿苗分化率均较高,适合于遗传转化的受体材料,如秀81-47,甘啤4号。     

卡那霉素对马齿苋愈伤组织诱导和生长的影响

[目的]确定马齿苋遗传转化时适宜的卡那霉素筛选浓度。[方法]在诱导愈伤组织培养基和愈伤组织增殖培养基中添加不同浓度的卡那霉素,通过统计愈伤组织诱导率和愈伤组织增长率来研究卡那霉素对马齿苋愈伤组织诱导和生长的影响。[结果]卡那霉素对愈伤组织诱导的影响很大,当卡那霉素浓度为20 mg/L时严重抑制了愈伤组织的诱导,而其愈伤组织在卡那霉素浓度为100 mg/L时仍能少量生长,但随着卡那霉素浓度的增大,增长速度变慢,褐化程度逐渐增加。[结论]在进行马齿苋的遗传转化时,愈伤组织诱导阶段可采用20 mg/L卡那霉素作为选择压,如果直接以愈伤组织为转化受体,则可采用80 mg/L作为选择压。     

不同激素组合对草麻黄愈伤组织诱导的影响

［目的］研究不同激素组合对草麻黄愈伤组织诱导的影响。［方法］以草麻黄子叶为外植体,在附加不同浓度和比例2,4-D、NAA、6-BA、KT的MS培养基中,比较不同激素组合对愈伤组织诱导的影响,并绘制出草麻黄愈伤组织的生长曲线。［结果］结果表明,最适合草麻黄愈伤组织诱导的培养基为MS＋2,4-D 2.0 mg/L＋6-BA 1.0 mg/L,诱导率最高为77.5%。草麻黄愈伤组织生长曲线呈S形,在第8天左右进入快速增长期,最佳继代时间在24 d左右。［结论］2,4-D与6-BA配合使用更有利于草麻黄愈伤组织的诱导。     

原种黑麦草组培再生体系建立初探

[目的]探索原种黑麦草愈伤组织诱导和植株再生方法,为多年生黑麦草原种的转基因研究奠定基础。[方法]以多年生黑麦草原种成熟种子为外植体,在组织培养条件下,施以不同浓度的激素进行培养,研究不同激素组合对愈伤组织诱导以及植株再生的影响。[结果]MS基本培养基中添加5.0 mg/L 2,4-D时愈伤组织诱导率最高,达64.85%;愈伤组织在MS附加1 mg/L 6-BA和0.5 mg/L IBA的分化培养基中分化率最高,为37%;不定芽在添加0.1 mg/L IBA的生根培养基中生根率为96%。[结论]黑麦草原种愈伤组织再生体系成功建立。     

5个品种柳枝稷愈伤组织的生长特点研究

[目的]通过对5个品种柳枝稷在现有的组培体系下不同的生长特点研究,探讨利用调整培养基配方等方法来实现不同品种的高效再生体系.[方法]采用柳枝稷5个品种Summer、Alamo、Kanlow、Blackwell和Cave-in-Rock的种子为外植体,进行愈伤组织组织培养,对5个品种在诱导、继代、分化、生根以及移栽过程中愈伤组织的生长情况进行比较分析.[结果]在该体系下,出愈率的范围是26.4％ ～ 71.2％,最高的是品种Summer,最低的是Alamo.只有Kanlow、Alamo、Summer可以分化出芽,长出植株.分化率最高的是Kan-low,达到60％.[结论]所有品种均能很好生根和移栽;品种Kanlow在该体系下生长最好.     

影响益母草愈伤组织诱导的因素

[目的]研究影响益母草愈伤组织诱导的因素。[方法]以益母草种子萌发的真叶为外植体,MS为基本培养基,研究了不同浓度的植物激素和蔗糖以及不同的培养方式和光照条件对益母草愈伤组织诱导的影响。[结果]培养基中2,4-D为0.5或1.0mg/L和6-BA为2.0mg/L时,益母草愈伤组织诱导率相对较高,可达93.3%;愈伤组织诱导率随培养基中蔗糖含量的增加而增加,在蔗糖含量达到30g/L时达到最高,为86.7%,超过30g/L时则下降;在3种培养方式中,固体培养的诱导率是液体培养的1.63倍;3种光照中,全光条件下的愈伤组织诱导率可达到92.8%,全暗条件下的愈伤组织诱导率仅有43.6%。[结论]培养基添加合理的植物激素组合、蔗糖,并采用合适的培养方式和光照条件有利于益母草愈伤组织的诱导。     

五鹤续断愈伤组织的诱导和增殖

[目的]探讨五鹤续断愈伤组织的培养及增殖。[方法]以五鹤续断初春萌发的幼嫩茎、叶为外植体,研究不同植物生长调节物质及其组合对五鹤续断愈伤组织的诱导效应。[结果]当NAA浓度为1．0mg／L时,对五鹤续断愈伤组织的诱导率最高,为65．4％。当2,4-D浓度为1．0mg／L时,对五鹤续断愈伤组织的诱导率最高,为60．2％。当6-BA浓度为1．5mg／L时,对五鹤续断愈伤组织的诱导率最高,为67．2％,且其诱导的愈伤组织的生长势比NAA的更好。当KT浓度为0．5mg／L时,对五鹤续断愈伤组织的诱导率最高,仅为35．2％。6-BA1．5mg／L＋NAA0．2mg／L和6-BA1．0mg／L＋2,4．D2．0ng／L对五鹤续断愈伤组织的诱导率分别达89．5％和92．7％。在黑暗和光照培养条件下,愈伤组织的生长曲线均呈“S”型,符合Logistic生长模型。[结论]该研究为五鹤续断次生代谢物的提取和多倍体诱导提供了理论依据。     

灰绿藜愈伤组织的诱导·继代及植株再生研究

［目的］通过诱导愈伤组织分化,建立灰绿藜植株再生方法。［方法］以灰绿藜茎和叶为材料,研究不同种类、不同浓度的植物生长调节剂对灰绿藜愈伤组织诱导和继代、不定芽分化及再生植株生根与移栽的影响。［结果］NAA、2,4 D、IAA在单独使用时,一定浓度范围内均有愈伤组织产生,利用不同的外植体,最佳的诱导组合培养基分别是茎为MS＋NAA 4.0 mg/L＋6-BA 0.5 mg/L,叶为MS＋2,4-D 4.0 mg/L＋6-BA 0.2 mg/L,光照有利于愈伤组织的诱导。在优化灰绿藜愈伤组织继代培养条件时,发现5.0 mg/L的抗坏血酸（VC）对于灰绿藜愈伤组织的褐变有良好的抑制作用,继代培养基中较好的组合为MS＋2,4 D 0.5 mg/L＋6 BA 0.5 mg/L。愈伤组织不定芽分化培养基为MS＋6 BA 2.0 mg/L＋NAA 0.05 mg/L,根分化的培养基为1/2 MS＋NAA 0.2 mg/L。［结论］该研究为灰绿藜组织培养中适宜的培养基选择提供了科学依据。