两种诊断制品对临床样品中布鲁氏菌抗体的检测比较

本研究以国家标准《动物布鲁氏菌病诊断技术》(GB/T 18646-2018)中的试管凝集试验方法为确诊金标准,对353份临床牛、羊和猪血清样品进行确诊,然后分别采用虎红平板凝集试验抗原和抗体检测试纸条,对该353份临床血清进行检测,比较两种诊断制品在布鲁氏菌病初筛中的差异。经统计分析发现,虎红平板凝集试验抗原敏感性为100%(23/23),特异性为97.88%(323/330),与确诊结果间的Kappa值为0.86;布鲁氏菌抗体检测试纸条敏感性为100%(23/23),特异性为99.39%(328/330),与确诊结果间的Kappa值为0.95,两种方法的重复性试验结果均一致。试验结果证明,布鲁氏菌抗体检测试纸条和布鲁氏菌虎红平板凝集试验抗原都能满足布鲁氏菌病初筛的需求;由于布鲁氏菌抗体检测试纸条的储存、运输和操作的便捷性,在部分地区或特殊环境下可替代布鲁氏菌虎红平板凝集试验抗原用于布鲁氏菌病初筛。     

动物布鲁氏菌病实验室检测技术研究进展

布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的人畜共患传染病,对我国畜牧业生产和公共卫生安全造成严重的威胁。科学准确诊断是布鲁氏菌病防控的重要技术依据,然而布鲁氏菌病的检测和确诊一直以来都并非易事,常常需要通过多种检测结果的综合分析,因此发展敏感性高、特异性好的布鲁氏菌的检测技术十分重要。总结并分析了近年来布鲁氏菌检测技术基础研究和临床应用研究方面的最新进展,结合国家动物布鲁氏菌病参考实验室工作经验,对各类检测方法的优缺点和适用范围进行了分析,旨在为动物布病诊断技术的选择和推广应用提供理论和实践依据,为动物布鲁氏菌诊断技术的研究提供方向性思考。     

大理州4县(市)家畜布鲁氏菌病血清学调查与分析

为了解和掌握大理州4县(市)的动物布鲁氏菌病流行情况,采用布鲁氏菌荧光偏振试验(FPA)和微量法补体结合试验(mCFT)相结合的方法对大理州剑川、洱源、大理、宾川4县(市)的7 655份家畜血清(牛血清样品5 467份、羊血清样品1 962份、猪血清样品226份)进行布鲁氏菌抗体检测。发现大理州羊血清样品布鲁氏菌病抗体阳性率为2.8%(55/1 962),牛和猪血清样品布鲁氏菌病抗体阳性率均为0。结果表明,大理州羊群布鲁氏菌感染风险高,牛群和猪群未检测到布鲁氏菌病抗体阳性,布鲁氏菌感染风险低。结果提示,大理州羊布鲁氏菌病流行形势严峻,需要加强监测与防控,减少布鲁氏菌由患病羊传染人的风险。本调查为进一步做好大理州家畜布鲁氏菌病防控提供依据。     

牛羊布鲁氏菌疫苗免疫后抗体水平消长规律研究

通过对免疫布鲁氏菌疫苗的牛羊开展抗体检测,掌握布鲁氏菌疫苗免疫抗体变化规律,为制定牛羊布鲁氏菌病合理的免疫监测方案提供技术参考。试验选取布病阴性的牛开展S2和A19疫苗的免疫试验,免疫后第15、30、45天采血,分离血清。选取布病阴性的羊开展S2疫苗免疫,在免疫后第7、15、30、45、135天采血分离血清。应用虎红平板凝集试验(RBPT)方法检测布鲁氏菌病抗体。此外,对使用S2疫苗免疫的6个试点县牛羊开展免疫抗体检测,并应用RBPT方法和c ELISA方法进行比较研究。     

布鲁氏菌OMP16抗体的间接ELISA方法建立

为建立羊血清布鲁氏菌抗体的间接酶联免疫吸附试验(iELISA)方法,以布鲁氏菌(B.suis) S2疫苗株的基因组为模板,通过引物设计、PCR扩增、原核载体构建、IPTG诱导,NTA树脂层析柱亲和层析法纯化重组布鲁氏菌外模蛋白16(OMP16),通过SDS-PAGE和Western blot鉴定分析,以纯化的OMP16作为包被抗原,优化反应条件,建立检测布鲁氏菌抗体的iELISA方法。结果显示,克隆了Omp16基因,表达、纯化了重组蛋白OMP16,该重组蛋白具有很好的反应原性。iELISA检测方法的最佳反应条件为:抗原包被浓度1μg/mL,血清稀释倍数为10倍,酶标二抗的稀释度为1:1 000,TMB的反应时间为30 min。临床样本检测显示,建立的iELISA方法具有良好的灵敏度,与虎红平板凝集试验的符合率达到了93%。本研究建立的iELISA方法能够满足生产实践中布鲁氏菌病的检测,为布鲁氏菌病流行病学调查提供了技术支持。     

长沙动物布鲁氏菌病血清学检测方法与分析

根据国家布鲁氏菌病防治计划(2012-2020)和动物布鲁氏菌诊断技术GB/T 18646-2002国家标准,通过虎红平板(RBT)、试管凝集(SAT)、竞争酶联免疫吸附试验(c ELISA),对长沙地区牛羊血清进行布鲁氏菌病抗体检测,并对检验过程和结果进行分析,为长沙市动物布鲁氏菌病净化提供科学依据,确保动物源性食品安全,为长沙市建设国家食品安全城市提供技术支撑。     

布鲁氏菌病研究进展

布鲁氏菌病的早期诊断及鉴定是该病防控的重要环节,其诊断技术主要包括细菌学诊断技术、血清学诊断技术以及分子生物学诊断技术。布鲁氏菌病防控应坚持预防为主的策略,其免疫主要以弱毒活疫苗为主,随着分子生物学及重组DNA技术的发展,基因工程疫苗成为近年研究热点,但目前尚未有鉴别疫苗免疫和自然感染的鉴别诊断技术及相应的疫苗制品。本文对布鲁氏菌病的病原学、流行病学、诊断技术和疫苗研究进展等方面进行概述,以期为建立灵敏性高、特异性强、高效便捷且易推广的布鲁氏菌病诊断技术和研发更加安全有效的布鲁氏菌病疫苗提供基础。     

互助县牛羊流产原因初步调查

用琥红平板试验和间接血凝试验对498份牛血清分别进行了布鲁氏菌病、衣原体病和弓形虫病抗体检测,阳性率分别为0%,49.2%和6.6%;对1059份羊血清分别进行了布鲁氏菌病、衣原体病和弓形虫病抗体检测,阳性率分别为0%,37.1%和5.4%。结果表明,本次从牛羊血清样品中检出了较高的衣原体阳性率。     

正确认识和应用布鲁氏菌虎红平板凝集试验

布鲁氏菌病是一种由布鲁氏菌引起的全球常见细菌性人兽共患病。在开展布鲁氏菌病诊断、监测、防控等相关工作时,虎红平板凝集试验（rose bengal test,RBT）是最常用的布鲁氏菌抗体检测方法。但是,在实际应用过程中,因对布鲁氏菌抗体特点及RBT特性等缺乏充分理解,导致RBT检测结果被“误用”的情况时有发生。本文将从动物感染布鲁氏菌后产生抗体的种类和特点,抗体凝集反应中存在的“前带现象”和非特异性反应,RBT抗原酸化和标准化对其检测性能的改善,RBT阳性结果需“确证”的起因及“误用”,在不同临床条件下如何使用RBT和解释检测结果等方面作一综述。充分认识和理解RBT的特性,以及在不同临床情形下正确使用RBT及其检测结果,不但可以降低布鲁氏菌病诊断成本,而且还能极大发挥RBT在布鲁氏菌病防控中的作用。     

2022年四川省市级兽医系统实验室布病检测能力比对分析

为评估四川省内兽医系统实验室对布鲁氏菌病的检测能力，我们于2022年开展了全省市级兽医实验室比对工作，共20个市级兽医系统实验室参与比对。布鲁氏菌病抗体检测项目通过虎红平板凝集试验比对，11个市（州）使用A厂家试剂，9个市（州）使用B厂家试剂。结果得出：布鲁氏菌病抗体检测项目结果总体符合率为68.75%,A厂家符合率为81.82%,B厂家符合率为52.78%。本研究表明，四川省市级兽医系统实验室对动物布鲁氏菌病的检测能力有待提高，实验试剂对实验结果的影响很大。     

奶牛布鲁氏菌病免疫检测比较试验

笔者在健康奶牛免疫布鲁氏菌弱毒活疫苗(A19)前后,分别用3种血清学检测方法进行抗体检测,以期掌握健康奶牛免疫布鲁氏菌病弱毒活疫苗(A19)后的抗体消减规律。试验为牛奶布鲁氏菌病免疫程序的制定和检测方法的选择提供了依据。     

2017—2021年新疆伊吾县牛羊布鲁氏菌病血清学监测

为掌握伊吾县羊牛布鲁氏菌病(简称布病)的流行特点和净化效果,依据国家标准《动物布鲁氏菌病诊断技术》,用虎红平板凝集试验(RBT)初筛,试管凝集试验(SAT)确诊的方法,2017—2021年连续5年对伊吾县养殖场户所有牛羊采集血样进行布鲁氏菌抗体检测,共检测牛羊血清样品1040792份,检出阳性样品7005份,平均阳性率...     

布鲁氏菌5种蛋白的原核表达及其作为间接ELISA检测用抗原的适用性比较

为比较布鲁氏菌蛋白BP26、OMP16、CP39、SP41、eryC作为间接ELISA检测用抗原的适用性,本研究原核表达并纯化了这5种蛋白,分别以其作为包被抗原,对反应条件进行优化,建立了布鲁氏菌病5种血清抗体间接ELISA检测方法。结果显示,重组蛋白BP26、OMP16、CP39、SP41、eryC大小分别约为32 ku、21 ku、30 ku、51 ku和38 ku,均可被布鲁氏菌阳性血清所识别,具有良好的免疫反应性。利用5种重组蛋白作为包被抗原建立的间接ELISA方法,与牛结核、牛病毒性腹泻等常见牛病阳性血清之间无交叉反应;对28份阴、阳性参考血清进行检测,以BP26作为包被抗原建立的间接ELISA P/N值最高。利用建立的方法和IDEXX试剂盒对48份临床血清样品进行平行检测,重组蛋白BP26、OMP16、CP39、SP41、eryC相应ELISA方法的符合率分别为87.5 %、87.5 %、89.6 %、85.4 %、79.2 %。结合敏感性、特异性等因素综合分析,以重组蛋白BP26作为检测抗原建立的间接ELISA方法效果较为理想,可适用于临床布鲁氏菌感染的检测。     

布鲁氏菌外膜蛋白16单克隆抗体的制备及初步应用

旨在制备布鲁氏菌外膜蛋白16(OMP16)单克隆抗体，建立OMP16抗体竞争ELISA方法，为布病临床防控提供免疫血清学检测手段。本研究选取保守性高、免疫原性良好的布鲁氏菌OMP16,经原核表达获得携带GST或His标签的重组OMP16(rOMP16)。利用杂交瘤技术筛选可稳定分泌OMP16特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株，经亚型鉴定、细胞核型分析和抗体交叉反应性试验分析单抗性质。制备小鼠腹水并纯化，方阵滴定法建立布鲁氏菌OMP16抗体竞争ELISA方法。结果表明，成功构建OMP16原核表达系统，经表达、纯化获得rGST-uOMP16和rHis-OMP16。筛选到1株遗传稳定的OMP16特异性杂交瘤细胞株，命名为B7;经鉴定，该抗体亚型为IgM-κ型，可识别目的蛋白，与标签蛋白无交叉反应。建立了布鲁氏菌OMP16抗体竞争ELISA方法，该方法与试管凝集试验检测结果相比总体符合率为90.53%,显示出良好的一致性。本研究有望为布鲁氏菌病的临床防控提供特异性高、敏感性好的免疫血清学检测方法。     

布鲁氏菌病检测和防治方法研究进展

布鲁氏菌病被我国列为二类动物疫病,严重威胁畜牧业发展和进出口贸易,同时也对人类健康造成危害。本文概述了布鲁氏菌病流行现状,从细菌学、免疫学、分子生物学方面综述了布鲁氏菌病最新检测技术,从疫苗研发及药物治疗方面研究了布鲁氏菌病防治进展,从而提出了积极探索准确快速的检测技术,加快新型疫苗制备等建议。     

新疆哈密市布鲁氏菌病阳性畜群抗体跟踪监测及影响因素分析

为了解新疆哈密市阳性畜群的布鲁氏菌病检疫净化效果及其主要影响因素,采用竞争ELISA方法,在哈密市131个曾检出布鲁氏菌病阳性的养殖场户中,随机抽检1 699份非免疫牛羊血清样品进行布鲁氏菌抗体检测,并从养殖区域、养殖模式、年龄及性别等方面对检测结果进行统计分析。结果显示：131个布鲁氏菌病阳性养殖场户的牛羊血清样品抗体阳性率为（8.65%,147/1 699）。从养殖区域看,各区县牛布鲁氏菌阳性率差异较小（P＞0.05）,而羊阳性率存在一定的地区差异,其中伊州区（12.38%）显著高于巴里坤县（P＜0.01）;从养殖模式看,全程舍饲、全程放牧、半农半牧、混牧模式下的牛羊布鲁氏菌抗体阳性率依次升高（3.49%~16.72%）,差异显著（P＜0.05）;从年龄看,牛布鲁氏菌抗体阳性率随年龄增加呈上升趋势,而羊则无明显规律性;从性别看,雌性牛羊布鲁氏菌抗体阳性率均高于雄性。结果表明：哈密市阳性畜群的布鲁氏菌病流行率较高,净化效果不佳;养殖区域、养殖模式、年龄和性别等是家畜布鲁氏菌病的潜在影响因素。结果提示,需根据该病的流行特点,制定有针对性的阳性畜群布鲁氏菌病防控策略。本研究可为哈密市及周边地区布鲁氏菌病防控策略的制定与实施提供参考。     

锡盟东苏旗绵羊布病血清抗体调查

通过对临床血清样本布鲁氏菌抗体检测,调查锡林浩特地区绵羊布鲁氏菌病发生与流行情况。应用虎红平板凝集试验对1216份绵羊血清进行了布鲁菌血清抗体检测,结果羔羊、基础母羊和商品羊的抗体阳性率分别为5．57％、769％和2．69％,总的抗体阳性率为4．4％。     

荧光免疫层析法与试管凝集试验检测布鲁氏菌病抗体的分析比较

使用荧光免疫层析法和试管凝集试验两种方法检测布鲁氏菌病抗体(考虑试验成本,所检测样品是经过虎红平板凝集试验初筛后的阳性血清),通过对检测过程和检测结果的分析比较,可以表明,荧光免疫层析法检测布鲁氏菌病抗体,操作简单、方便快捷,灵敏度高,且对检测结果进行定量分析,更适于基层畜牧兽医部门和养殖场户开展大规模监测。     

布鲁氏菌20kD外膜蛋白的表达和鉴定

布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的一种人畜共患病,在家养和野生哺乳动物中会引起流产和不育.目前,世界各国动物布病的普查、监测及贸易检疫的检测方法难以区别布鲁氏菌自然感染动物和疫苗免疫接种动物,而且也不能鉴别布鲁氏菌与其他革兰氏阴性菌存在免疫学交叉反应.许多学者报道,通过检测动物血清中的布鲁氏菌菌体蛋白抗体可以大幅度提高布鲁氏菌病诊断的特异性.由于布鲁氏菌外膜蛋白暴露于细菌表面,在布鲁氏菌不同种之间具有保守性,动物感染后可以产生针对不同蛋白的特异性抗体[1-4].因此,本研究试图通过克隆、表达布鲁氏菌的不同种类外膜蛋白抗原,探讨该蛋白抗原对布病自然感染动物血清的反应性,以期获得适合布鲁氏菌不同感染时期的诊断、检测试剂,同时为动物布鲁氏菌病基因工程疫苗研制奠定基础.     

山东省部分地区奶牛场布鲁氏菌病血清学调查

2016年5—12月,从山东省泰安市、枣庄市、菏泽市和青岛市等地区6个奶牛场的成母牛群中,随机采集血清1 736份,分别用虎红平板凝集试验(RBPT)、试管凝集试验(SAT)和间接酶联免疫吸附试验(ELISA)平行检测布鲁氏菌病血清抗体。结果显示:该6个奶牛群的布鲁氏菌病抗体总阳性率为11.12%;3种方法的阳性检出率各不相同,其中RBPT的阳性检出率为12.73%,SAT为11.12%,ELISA为11.75%;5个免疫牛场的布鲁氏菌病血清抗体检测均呈阳性,并且不同地区奶牛场之间的抗体阳性率差异较大,最高的为40.00%,最低的为8.93%;1个非免疫牛场的布鲁氏菌病血清抗体检测结果为阴性。检测结果提示:鉴于当前严重的布鲁氏菌病疫情形势,山东省的布鲁氏菌病防控压力加大;任何一种检测方法都有局限性,3种方法联合应用可有效降低出现假阳性和假阴性的概率;上述检测方法均无法区分免疫和感染,因此免疫给布鲁氏菌病的检测净化带来了极大困难。