番茄红素对赭曲霉毒素A诱导犬肾小管上皮细胞毒性损伤的缓解作用

[目的]本试验以犬肾小管上皮细胞(Madin-Daby canine kidney cell,MDCK)为模型,研究赭曲霉毒素A(OTA)对MDCK的毒性作用以及番茄红素(lycopene,LYC)对细胞损伤的缓解效应.[方法]将对数生长期MDCK,随机分为对照组(无添加)、OTA组(15μmol·L-1 OTA)、L...     

咖啡中赭曲霉毒素A研究进展

综述了咖啡中赭曲霉毒素A的污染情况、检测方法及预防措施等,为进一步研究咖啡中赭曲霉毒素A的污染提供了参考。     

赭曲霉毒素A无毒ELISA检测

[目的]研究赭曲霉毒素A毒素的替代ELISA检测.[方法]采用噬菌体展示技术筛选赭曲霉毒素A模拟表位,得到赭曲霉毒素A(OTA)模拟表位序列为IR(V)PMV(L)XX(X为任意氨基酸),化学合成法体外合成OTA模拟表位肽,通过化学交联法将OTA模拟表位肽与BSA连接,做成无毒抗原,建立无毒OTA间接竞争ELISA检测方法,同样通过化学交联法将OTA多肽-BSA与HRP相联,建立OTA无毒直接竞争ELISA检测方法.[结果]OTA多肽-BSA间接竞争ELISA检测50％抑制浓度(IC50)为5 ng/ml,OTA多肽-BSA-HRP一步直接竞争ELISA检测法IC50为2.5 ng/ml,二步直接竞争ELISA检测法IC50为2ng/ml.[结论]OTA模拟表位多肽能用于代替OTA毒素作为检测抗原使用,并建立无毒ELISA检测方法.     

赭曲霉毒素A对BHK细胞毒害作用的研究

以叙利亚仓鼠肾细胞(BHK cell)为模型,用噻唑兰(MTT)法检测赭曲霉毒素(ochratoxin A,OTA)对细胞活力的影响,用单细胞凝胶电泳法和DNA梯形条带法检测OTA对细胞DNA的损伤,用黄嘌呤氧化酶法检测细胞中SOD活力的变化,用硫代巴比妥酸(TBA)法测定细胞培养液中MDA的含量.结果显示:OTA对BHK细胞活力的影响呈现时间和剂量依赖性的抑制作用.染毒12 h后,2.5、5、10、20和40 μg·mL-1 OTA剂量组BHK细胞的活力均显著降低(P＜0.05),至染毒24 h,40 μg·mL-1 OTA染毒剂量组细胞活力下降达90%.OTA对BHK细胞DNA的损伤作用同样存在明显的剂量效应关系,与对照组相比,除2.5 μg·mL-1剂量组外,其余各剂量组的彗尾DNA含量和拖尾率差异极显著(P＜0.01),40 μg·mL-1剂量组的细胞拖尾率是对照组的80倍.40 μg·mL-1 OTA处理BHK细胞24 h后检测到特征性的凋亡梯形条带,而对照组则未检测到.OTA作用于BHK细胞使细胞内SOD活力显著降低(P＜0.05),细胞培养液中MDA含量则显著升高(P＜0.05).OTA染毒24 h后,40 μg·mL-1 OTA剂量组细胞内SOD活力降低至对照组的25%,培养液中MDA含量较对照组增高了500%.上述结果表明:OTA对BHK细胞活力的影响与细胞内过氧化物的大量生成和抗氧化酶活力下降有关,且对细胞DNA造成损伤,引起细胞凋亡.     

猪饲料中赭曲霉毒素A的危害及防控措施

近年来,猪发生赭曲霉毒素中毒的病例呈上升趋势,在黄曲霉毒素之后,赭曲霉毒素引起了从业者的广泛关注。为了保障养猪业的健康发展和人们的身体健康,将从赭曲霉毒素A的一般概况、猪饲料中OTA的污染现状、检测技术方面进行分析,并提出有效的防控措施。     

赭曲霉毒素的毒理学试验

用含2.569mg/kg赭曲霉毒素A (Ochratoxin A.以下称OA)的饲料,对40日龄左右的星波罗肉用鸡进行了饲喂试验试验鸡表现为精神沉郁,食欲不振、肠炎、贫血、极度消瘦等症状,于喂后13～18天,先后衰竭死亡,剖检发现肾、肝和肠道等都有明显的病理变化。经用高效液相色谱仪(HPLC)测定,肾脏,肝脏内OA的残留量分别为0.179mg/kg和0.1302mg kg。用从饲料中提纯的OA对孵化5日龄的鸡胚进行了气室内接种。根据接毒后记录的鸡胚死亡数和死亡率。计算出半数致死量为0.128μg。     

固相萃取法萃取葡萄酒中赭曲霉毒素A的方法研究

【目的】建立葡萄酒中赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)的固相萃取方法。【方法】分析了固相萃取小柱的活化方法、淋洗液、洗脱溶剂对萃取葡萄酒中OTA的影响,选择出最佳的参数后进行精密度与准确度试验。【结果】葡萄酒中OTA的固相萃取方法:C18固相萃取柱(简称C18-SPE柱)经5 mL甲醇、5 mL双蒸水活化后,进样10mL,先用1 mL双蒸水淋洗,充分干燥后,用5 mL乙酸乙酯洗脱,收集洗脱液并真空旋转蒸发至干,1 mL流动相溶解残渣待测。【结论】得到了萃取葡萄酒中OTA的固相萃取方法,此方法的平均回收率为88.2%~100.9%,变异系数为0.93%~2.19%,且具有操作简单,成本低,分析速度快等优点。     

赭曲霉毒素A,B的提取,分析与鉴定

用赭曲霉菌(也称棕曲霉菌)生产菌株,接种于无菌的混合饲料中培养。培养物用乙腈—石油醚—氯仿提取,用碳酸氢钠水溶液进行液液分配,水相酸化后再用氯仿萃取,经硅胶柱层析净化,用苯:冰醋酸(9:1)洗脱。紫外光下分别收集绿色萤光区带和兰色萤光区带,采用紫外分光光度计检测。选用波长333nm的赭曲霉毒素A(Ochratoxin A.简称OA)和波长318nm的赭曲霉毒素B(Ochratoxin B.简称OB)收集液,分别将收集液(OA和OB)浓缩,然后结晶。OA产品为无色针状晶体;OB为淡黄色颗粒状晶体。OA和OB的UV最大吸收峰分别为333nm和318nm。萤光最大激发波长分别为335nm和320nm,最大发射波长分别为465nm和456nm,通过UV、HPLC、NMR、IR谱图及TLC的R_f值证明产品是赭曲霉毒素A和B。     

适配体传感器结合便携式血糖仪定量检测赭曲霉毒素A的方法研究

目前大多数小分子毒素的定量检测方法仍需以实验室为基础或者定制设备,不能被公众广泛应用。研究开发了一种便携式适配体生物传感器,结合血糖仪用于赭曲霉毒素A(OTA)的定量检测。所开发的适配体生物传感器的线性范围是1×10-8~4×10-6mol/L,检出限6.7×10-9mol/L(2.69μg/kg);适配体生物传感器被成功地应用于婴幼儿米粉和羊草样品检测,回收率达84%~122%,表明所开发的适配体生物传感器为OTA的定量检测提供了一种新的方法,展现出良好的应用前景。     

小鼠吸入氢醌对肺外组织细胞 DNA 损伤的观察

目的:观察小鼠吸入氢醌对肺外组织细胞的遗传毒性。方法:将40只健康昆明种小鼠随机分为5组,室温下采用60 L静式有机玻璃染毒柜进行呼吸道吸入不同剂量(0.0、0.5、1.0、2.0、4.0 m g/m3)的氢醌染毒2周,用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)检测氢醌染毒后的小鼠肝、肾、脾、骨髓、胸腺和外周血淋巴细胞的DNA损伤情况,分析肺外组织DNA损伤与氢醌剂量间的关系。结果:0.5~4.0 m g/m3氢醌吸入染毒,均可诱导小鼠6种组织细胞的DNA链断裂,核DNA损伤程度与氢醌染毒剂量呈剂量-效应关系。结论:不同脏器细胞对氢醌的易感性不同,肝、肾、骨髓、外周血淋巴细胞可能是氢醌的遗传毒性靶细胞。     

Recognition of HLA-A2 by cytotoxic T lymphocytes after DNA transfer into human and murine cells

A gene coding for the major histocompatibility antigen HLA-A2 was transferred into human HLA-A2 negative M1 cells and murine L cells. Following transfection, these cells expressed molecules at the cell surface that are biochemically indistinguishable from HLA-A2 antigens on the human cell line JY from which the HLA-A2 gene was isolated. The M1A2 cells were recognized and lysed by a cytolytic T-cell clone specific for HLA-A2. The transfected L cells which express HLA-A2 in association with human beta 2-microglobulin were not lysed by this T-cell clone. The specific cytolysis of M1A2 cells could be inhibited by monoclonal antibodies to HLA-A2, and monoclonal antibodies to T3, T8, and LFA-1 on cytotoxic T lymphocytes. These results suggest that killing by allospecific T cells requires HLA-A2 antigens as well as other species-specific structures on the target cell surface.     

茶叶提取物对小肠Caco-2细胞糖吸收的抑制作用

利用水提法制备绿茶、乌龙茶、红茶、青砖茶和普洱茶提取物,研究5种提取物对体外小肠Caco-2细胞吸收葡萄糖的抑制效果。结果表明:在相同质量浓度(0.5mg/mL)条件下,5种茶叶提取物均能抑制Caco-2细胞吸收葡萄糖的活性,抑制能力大小依次为绿茶!乌龙茶!红茶!青砖茶!普洱茶;与对照相比,绿茶、乌龙茶、红茶和青砖茶提取物极显著抑制葡萄糖的吸收,但普洱茶提取物的抑制效果并未达到显著水平(P>0.05)。茶叶提取物抑制小肠Caco-2细胞吸收葡萄糖的能力可能与加工过程中儿茶素的转化有关。     

阿特拉津污染胁迫对典型细菌DNA损伤研究

采用随机扩增多态性DNA标记(RAPD)方法,研究阿特拉津浓度为0、25、50、75、100和125 mg·L-1污染胁迫条件下对阿特拉津高效降解菌Arthrobacter sp.DNS10和Acinetobacter sp.DNS32与非阿特拉津降解菌Escherichia coli K12和Micrococcus luteus N19生长影响及基因组DNA损伤情况。结果表明,在阿特拉津污染胁迫24 h后,随阿特拉津浓度增高,Escherichia coli K12和Micrococcus luteus N19生长速度受抑制强度逐渐明显。利用随机引物对上述四种细菌基因组DNA进行PCR扩增。结果表明,菌株Escherichia coli K12和Micrococcus luteus N19处理组与对照组之间RAPD指纹图谱存在明显差异,在阿特拉津浓度为100 mg·L-1时,基因组模板稳定性(GTS)分别降至52.3%和61.2%。同一浓度下,阿特拉津降解菌Acinetobacter sp.DNS32基因组模板稳定性为82.9%,Arthrobacter sp.DNS10基因组模板稳定性为92.1%。研究表明,阿特拉津胁迫对Escherichia coli K12和Micrococcus luteus N19基因组DNA产生损伤;阿特拉津降解菌Arthrobacter sp.DNS10和Acinetobacter sp.DNS32对阿特拉津胁迫有较高耐受性,适于阿特拉津降解。     

绿茶和红茶提取物抑制中波紫外线诱导HaCaT细胞氧化损伤和凋亡的比较

为比较绿茶、红茶提取物对中波紫外线(UVB)诱导角质形成细胞光损伤的抑制作用,用不同浓度的绿茶、红茶提取物对人表皮角质形成细胞(HaCaT)预处理6 h,以60 mJ/cm2的剂量照射细胞,比较细胞生存率和细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH–Px)、乳酸脱氢酶(LDH)的活性以及丙二醛(MDA)含量的变化,用荧光法检测细胞内活性氧(ROS)的含量,用流式细胞仪检测细胞的凋亡变化,并对绿茶、红茶的茶多酚及儿茶素类物质含量进行比较。结果表明：与空白对照组相比,UVB辐射模型组的HaCaT细胞活性下降了21.61%,细胞损伤严重;与UVB辐射模型组相比,绿茶、红茶提取物可提高UVB辐射后HaCaT细胞的存活率,提高SOD、GSH–Px活性(P<0.01),降低LDH活性、MDA含量和细胞内氧自由基含量(P<0.01),降低由UVB辐射导致的细胞凋亡率(P<0.01),使细胞凋亡率分别降低了6.94%和3.68%;绿茶中茶多酚和儿茶素类物质的含量明显高于红茶,绿茶提取物的抑制效果优于红茶提取物。综合分析以上结果,认为绿茶、红茶提取物可以减少由UVB辐射导致的HaCaT细胞损伤和凋亡,具有光保护作用,其机制与细胞抗氧化能力的增强和氧自由基的加速清除有关,且绿茶提取物的作用效果比红茶提取物的好。     

维生素A对大豆7S球蛋白致仔猪肠上皮细胞屏障功能损伤的影响

以仔猪肠上皮细胞(IPEC-J2)为研究对象,用大豆7S球蛋白作为诱导因素,通过检测细胞活力、细胞跨膜电阻(TEER)、荧光素钠渗透率、细胞膜完整性相关指标与紧密连接蛋白的mRNA表达情况,探究维生素A(V_A)对大豆7S球蛋白致IPEC-J2细胞屏障功能损伤的影响。结果显示:5.0 mg·mL^-1大豆7S球蛋白导致IPEC-J2活力、TEER与ZO-1、Claudin-1、Occludin的mRNA表达量极显著(P<0.01)降低,而荧光素钠渗透率和细胞培养液中碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)、二胺氧化酶(DAO)、肠型脂肪酸结合蛋白1(IFABP1)的含量极显著(P<0.01)升高;添加0.1和1 μmol·L^-1 V_A极显著提高了细胞活力(P<0.01),0.1~10 μmol·L^-1 V_A显著(P<0.05)缓解了大豆7S球蛋白导致的TEER、荧光素钠渗透率、细胞膜完整性相关指标与紧密连接蛋白mRNA表达的变化;10 000 μmol·L^-1 V_A反而加剧了这些影响。总体上,0.1~10 μmol·L^-1 V_A能通过保护细胞活力和细胞完整性、影响紧密连接蛋白的mRNA表达对大豆7S球蛋白导致的IPEC-J2细胞屏障功能损伤发挥保护作用,而10 000 μmol·L^-1 V_A反而加重了这种损伤。     

枯草芽孢杆菌拮抗病原菌黏附和入侵Caco-2细胞的研究

为探讨枯草芽孢杆菌及其培养上清液对产肠毒素大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌的抗黏附作用,本试验将产肠毒素大肠杆菌K88或鼠伤寒沙门氏菌SL1344与枯草芽孢杆菌及其培养上清液先后加到Caco-2细胞上,用活菌计数的方法观察产肠毒素大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌及枯草芽孢杆菌黏附Caco-2细胞的情况。结果显示:在排斥、竞争和置换试验中,枯草芽孢杆菌菌体均能够明显抑制K88和SL1344的黏附及SL1344的内化,在竞争试验时K88的黏附减少了71.2%、SL1344的黏附及内化减少了92.9%,但枯草芽孢杆菌的培养上清液只有在竞争试验中才能明显抑制K88和SL1344的黏附及SL1344内化。提示:枯草芽孢杆菌通过与病原菌竞争黏附位点来抑制病原菌对Caco-2细胞的黏附和入侵。     

Formaldehyde damage to DNA and inhibition of DNA repair in human bronchial cells

Cultured bronchial epithelial and fibroblastic cells from humans were used to study DNA damage and toxicity caused by formaldehyde. Formaldehyde caused the formation of cross-links between DNA and proteins, caused single-strand breaks in DNA, and inhibited the resealing of single-strand breaks produced by ionizing radiation. Formaldehyde also inhibited the unscheduled DNA synthesis that occurs after exposure of cells to ultraviolet irradiation or to benzo[a]pyrene diolexpoxide but at doses substantially higher than those required to inhibit the resealing of x-ray-induced single-strand breaks. Therefore, formaldehyde could exert its mutagenic and carcinogenic effects by both damaging DNA and inhibiting DNA repair.     

Langerhans cells facilitate epithelial DNA damage and squamous cell carcinoma

Polyaromatic hydrocarbons (PAHs) are prevalent, potent carcinogens, and 7,12-dimethylbenz[a]anthracene (DMBA) is a model PAH widely used to study tumorigenesis. Mice lacking Langerhans cells (LCs), a signatory epidermal dendritic cell (DC), are protected from cutaneous chemical carcinogenesis, independent of T cell immunity. Investigation of the underlying mechanism revealed that LC-deficient skin was relatively resistant to DMBA-induced DNA damage. LCs efficiently metabolized DMBA to DMBA-trans-3,4-diol, an intermediate proximal to oncogenic Hras mutation, and DMBA-treated LC-deficient skin contained significantly fewer Hras mutations. Moreover, DMBA-trans-3,4-diol application bypassed tumor resistance in LC-deficient mice. Additionally, the genotoxic impact of DMBA on human keratinocytes was significantly increased by prior incubation with human-derived LC. Thus, tissue-associated DC can enhance chemical carcinogenesis via PAH metabolism, highlighting the complex relation between immune cells and carcinogenesis.     

尾矿库渗漏水导致泥鳅氧化损伤与DNA损伤的研究

为评价包头尾矿库渗漏水污染对生物的毒性效应,选用泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)作为试验材料,应用单细胞凝胶电泳(SCGE)技术测定红细胞DNA损伤并测定肝脏组织的MDA含量。结果表明:血细胞DNA损伤率以及肝脏组织的MDA含量与尾矿库渗漏水浓度及处理时间存在一定的时间-剂量-效应关系,随渗漏水浓度和处理时间的增加,血细胞DNA损伤率增加,MDA含量呈上升趋势。说明尾矿库渗漏水污染对泥鳅的正常生理过程有明显的抑制作用,且存在遗传毒害效应。