禽霍乱·新城疫二联油乳剂灭活疫苗研究(Ⅲ报)——疫苗对鸭和鹅的安全性及免疫效力试验

[目的]为禽霍乱、新城疫二联油乳剂灭活疫苗免疫鸭和鹅等水禽提供理论依据。[方法]将禽A型多杀性巴氏杆菌接种固体培养基收获的菌液与鸡新城疫病毒弱毒株La Sota接种易感鸡胚收获的感染鸡胚液混合,用甲醛溶液灭活后制备成5批二联油乳剂灭活苗,用于鸭和鹅的安全性及免疫效力试验。[结果]5批二联苗对鸭和鹅的安全性试验表明,免疫鸭和鹅均未出现任何不良反应;免疫效力试验表明,免疫后3周,鸭和鹅的新城疫血凝抑制抗体效价均≥4 log2,新城疫攻毒保护率均为100%,禽霍乱攻毒保护率为66.7%~83.3%。[结论]该二联苗用于免疫鸭和鹅安全可靠,免疫效果良好。     

鸡霍乱组织灭活苗的研究

选择鸡源多杀性巴氏杆菌C481强毒株(血清1型)接种鸡胚,收集死胚组织,分别以油乳剂、蜂胶和铝胶为佐剂,按一定比例配制成含1.5×1010个/ml巴氏杆菌的灭活苗。经试验证明,该疫苗安全、有效,其中油乳剂灭活苗的保护期和蜂胶灭活苗的保护期相当,但蜂胶灭活苗的抗体水平上升速度比油乳剂苗快且保护率高;铝胶苗的效果不及蜂胶苗和油苗。     

IBD组织灭活油乳苗的研制和应用

采用1BD发病鸡法氏囊、脾脏研制成组织灭活油乳苗，经田间试验表明，免疫保护率达100％。     

鸡肾型传染性支气管炎(IB)疫苗的研制

用鸡传染性支气管炎病毒X株接种10日龄鸡胚尿囊腔,收集尿囊液,经甲醛灭活后,按一定的比例,以矿物油为佐剂制成油乳剂灭活苗,免疫鸡30d后,保护率达100％,并呈现良好的体液免疫应答,血凝抑制抗体效价达2     

IBD组织灭活油乳苗的研制和应用

采用ＩＢＤ发病鸡法氏囊，脾脏研制成组织灭活油乳苗，经田间试验表明，免疫保护率达１００％。     

几种鸡新城疫油佐剂灭活疫苗免疫效果的比较

比较研究了鸡新城疫(ND)二价灭活苗、ND灭活苗、进口ND灭活苗、ND强毒(CNDV)灭活苗和ND克隆-30弱毒苗的免疫效果。结果表明,不同ND疫苗首次免疫鸡所产生的抗体有差异,ND二价灭活苗免疫鸡的抗体上升最快,免疫后20 d左右可达到最高峰。1日龄免疫,14日龄攻毒,ND二价灭活苗、ND灭活苗的保护率分别为5/5,4/5;10日龄和10日龄以上免疫,免疫后7 d或7 d以上攻毒,ND二价灭活苗、ND灭活苗、进口ND苗的保护率分别为4/5~5/5,2/5~5/5,0/5~2/5。攻毒后ND二价灭活苗、进口ND灭活苗免疫的与对照鸡的肛棉拭子NDV阳性数分别为0/5,5/5,5/5。结果表明,ND二价灭活苗免疫效果优于进口ND灭活苗、ND强毒灭活苗,稍优于ND灭活苗。     

鸡肾型传染支气管炎（IB）疫苗的研制

用鸡传染性支气管炎病毒Ｘ株接种１０日龄鸡胚尿囊腔,收集尿囊液,经甲醛灭活后,按一定的比例,以矿物油为佐剂制成油乳剂灭活苗,免疫鸡３０ｄ后,保护率达１００％,并呈现良好的体液免疫应答,血凝抑制抗体效价达２＾Ｈ,病毒中和效价达１：１０＾６,疫苗在４℃保存７个月后用来免疫鸡,其对同源毒株的攻击仍呈现较好的保护作用,保护率达９５％,该疫苗安全、可靠、稳定性高,４℃放置１年不分层,不破乳。     

鸡胚增菌研制鸭疫里氏杆菌灭活苗

鸡胚增菌培养鸭疫里氏杆菌有很好效果 ,增菌后的菌液含菌量一般可达 2 70× 10 8～ 3 0 8× 10 8CFU/ml。通过鸡胚增菌法所研制的鸭疫里氏杆菌灭活苗 ,1次免疫保护率平均可达 82 .4% ,2次免疫保护率平均可达 93 .5 % ,能很好地控制鸭传染性浆膜炎的发生     

两种鸡大肠杆菌油佐剂灭活苗对雏鸡免疫效果的比较

为了探讨用鸡胚和普通培养基增殖的大肠杆菌在免疫效果方面有无差异,用致病性大肠杆菌地方菌株与标准菌株混合,经鸡胚及固体培养基增殖后,制成两种油佐剂灭活疫苗,分别免疫10日龄雏鸡,免疫后21d抗体达到峰值,抗体在3log2以上维持35d以上,免疫后42d用混合菌液对两种菌苗免疫组分别进行攻击,鸡胚苗免疫组对混合菌液的攻击保护率为93.3%,常规培养苗免疫组对混合菌液的攻击保护率为83.3%。     

禽霍乱-新城疫二联油乳剂灭活疫苗研究 (Ⅳ报)——疫苗的田间试验

[目的]评价禽霍乱-新城疫二联油乳剂灭活疫苗的临床应用效果,为联合防制禽霍乱和新城疫提供条件。[方法]将禽A型多杀性巴氏杆菌1502强毒株与鸡新城疫病毒La Sota弱毒株混合,制备成5批合格的二联油乳剂灭活苗,用于鸡、鸭和鹅的田间安全性和免疫保护试验。[结果]田间安全性试验表明,免疫鸡、鸭和鹅均未出现不良反应;鸡的田间免疫效力试验表明,7～14日龄雏鸡和60～90日龄青年鸡免疫3周后新城疫血凝抑制（ND-HI）抗体效价均比对照组高2～3 log2,可持续4个月以上,禽多杀性巴氏杆菌攻毒保护率均达到75.0%以上,免疫效力可持续6个月;鸭和鹅的田间免疫效力试验表明,接种3周后免疫组ND-HI抗体效价均≥4.2 log2,对照组均≤2 log2;鸭、鹅的禽多杀性巴氏杆菌攻毒保护率分别在75.0%和62.5%以上。[结论]该二联苗免疫禽类安全可靠,具有良好的免疫效果。     

鸡单增李斯特菌全菌灭活苗的制备与效果检测

采用甲醛将分离自鸡的单增李斯特菌灭活后再与弗氏完全佐剂按体积比1:1混合制备成全菌灭活疫苗,通过平板划线和动物接种试验对制备的疫苗进行安全性与免疫效力检验.结果表明,15日龄京粉雏鸡接种1×1010 CFU/mL抗原含量的全菌灭活苗后无异常反应,注射部位及内脏器官无病变损伤,对致死量的本菌攻毒具有100％的保护率;1×109 CFU/mL抗原保护率达85％以上,表明所制备的全菌灭活苗具有对雏鸡具有较好的免疫效力.     

鸡新城疫法氏囊病细胞组织培养灭活油乳化两联疫苗的研制

采用细胞组织培养代替鸡胚培养的技术，分别对鸡新城疫细胞适应病毒株和本研究所分离鉴定的法氏囊细胞适应Ｑ病毒株进行细胞组织培养，收获病毒，灭活，油乳化，制成联苗。经疫苗安全性、效力、免疫期和保存期测定，结果表明细胞组织培养联苗不仅安全，免疫率在９２％以上，而且在保存期、免疫期超过半年以上时仍有坚强的免疫力，免疫效果理想。     

EDS76—ND二联油乳剂苗的研究

本试验以减蛋综合症(EDS76)病毒株,新城疫(ND)Laosota 株为制苗毒株,分别经鸭胚和鸡胚增殖后,甲醛灭活.灭活毒液按适当比例混合加入油佐剂中,乳化制成“二联苗”.对所研制的二联苗的安全性、保存期、免疫效力等进行测试.结果表明:1.疫苗本身安全,对鸡无副作用;乳化度、稳定性和通针性良好;易于保存,常温避光6个月以上,4℃左右12个月,免疫效力无明显下降(P>0.05).2.疫苗免疫效果良好.ND于注苗后7天即产生免疫(HI抗体效价GMT log2为 7.5);EDS76免疫产生较慢,15天可产生较强免疫(HI价为7.3log2);两种HI抗体均于免疫后21天达到高峰值(ND为10.7long2.EDS76为10.2log2);免疫期可持续一年左右,即免疫活360天时,ND、EDS76两种HI抗体分别为7.1log2和6.2log2.区域试验免疫蛋鸡100多万只,临床调查可抽检证明该苗质量稳定,效果良好.     

不同基因型NDV灭活油乳苗与La Sota株灭活油乳苗的免疫效果比较

用地方分离的基因Ⅵ型和Ⅶ型代表株 (LD - 3- 0 0株和LD - 7- 0 2株 )配以传统的LaSota株所制备的灭活油乳苗与LaSota株单价灭活油乳苗进行的免疫效果比较显示 :前者在接种后各个时期所产生的HI抗体效价与LaSota株灭活苗免疫鸡所产生的HI抗体效价无明显差异 ,至接种后第 4 2天两者均具有 7.3log2 的HI效价。在对具有不同HI抗体水平的试验鸡进行的攻毒试验中 ,对F4 8E9标准强毒株的攻击 ,无论是LaSota株疫苗免疫鸡 ,还是不同基因型灭活苗免疫鸡 ,在HI抗体效价为 6log2 以上时均能 10 0 %地被保护 ;但对不同基因型野毒株的攻击 ,尤其是基因Ⅶ型野毒株的攻击 ,2种疫苗则呈现出明显的差异。在LaSota株疫苗免疫鸡HI效价为 6log2 时 ,对不同基因Ⅶ型野毒株的攻击 ,保护率只有 0～ 2 0 % ;而具有 6log2 效价的不同基因型疫苗免疫鸡则对不同基因Ⅶ型野毒株的攻击具有 6 0 %～ 70 %的保护率 ;当HI效价达 8log2 左右时 ,LaSota株疫苗免疫鸡对基因Ⅶ型野毒株的攻击也只有 80 %的保护率 ,而不同基因型疫苗免疫鸡已能 10 0 %地被保护 ;LaSota株疫苗免疫鸡只有在HI效价在 9log2 以上时 ,方可 10 0 %地抵抗基因Ⅶ型野毒株的攻击。     

特异性抗体对新城疫疫苗免疫原性的影响研究

对特异性抗体对新城疫活疫苗和灭活疫苗免疫原性的影响进行了研究。鸡源抗体与Ⅰ系苗制备的复合物(ND-IC)对有、无抗体的1,28日龄雏鸡安全,能诱导产生良好的免疫应答,免疫14d后获得完全的攻毒保护;18日龄鸡胚免疫接种后不影响孵化率和8日龄内雏鸡的死亡率,14日龄小鸡血清抗体滴度在5log2(HI)左右及获得80％～100％的攻毒保护率。特异性抗体与灭活病毒混合后制备的油佐剂苗免疫1,28日龄鸡,血清抗体水平高于传统油佐剂苗,且免疫原性不受母源抗体的影响。以上结果表明,鸡源特异性抗体能提高Ⅰ系苗的安全性,而不影响免疫原性;对灭活抗原具有免疫增强作用。     

特异性抗体对新城疫疫苗免疫原性的影响研究

对特异性抗体对新城疫活疫苗和灭活疫苗免疫原性的影响进行了研究.鸡源抗体与Ⅰ系苗制备的复合物(ND-IC)对有、无抗体的1,28日龄雏鸡安全,能诱导产生良好的免疫应答,免疫14 d后获得完全的攻毒保护;18日龄鸡胚免疫接种后不影响孵化率和8日龄内雏鸡的死亡率,14日龄小鸡血清抗体滴度在5 log 2(HI)左右及获得80%～100%的攻毒保护率.特异性抗体与灭活病毒混合后制备的油佐剂苗免疫1,28日龄鸡,血清抗体水平高于传统油佐剂苗,且免疫原性不受母源抗体的影响.以上结果表明,鸡源特异性抗体能提高Ⅰ系苗的安全性,而不影响免疫原性;对灭活抗原具有免疫增强作用.     

禽霍乱强化苗研究——Ⅰ.强化苗研制与免疫保护性试验

本试验通过筛选抗原性较好的多杀性巴氏杆菌,经禽胚培养增殖细菌,灭活后加入免疫增强剂左旋咪唑和亚硒酸钠维生素E,制成油乳剂强化苗。试验表明,每头份含抗原量100亿,左旋咪唑和亚硒酸钠维生素E合用组免疫效果最佳。注射本苗后,鸡群第4天产生免疫应答,第7天即可产生坚强的免疫力,试管凝集抗体效价达到1:86,攻毒保护率达83.3％,第14天即可达100％,免疫期6个月。免疫期内攻毒保护率为97.6％,当试管凝集抗体效价为1:40时,80％的试验鸡能抵御C_(48-1)的攻击。临床上免疫接种4个鸡场12批商品蛋鸡共14.5万羽,有效地控制了该病的流行。     

鸡传染性支气管炎H120鸡胚毒与细胞毒的免疫效力比较试验

试验以相同病毒量的鸡胚毒及细胞毒分别免疫试验鸡,结果表明,两者的免疫效力无明显差异。随着鸡免疫病毒量的适当增加,免疫效果趋好,每只鸡免疫103EID50病毒量时,攻毒保护率可达70%~90%;每只鸡免疫104~105EID50病毒量时,攻毒保护率可达90%。     

七彩山鸡新城疫病毒的分离鉴定与免疫保护试验

用SPF鸡胚从疑似七彩山鸡新城疫病鸡群中分离到一株病毒,进行HA及HI试验以及病毒中试验。结果表明,血凝作用可被NDV阳性血清所抑制,而不能被AIV（H9亚型）、EDS76所抑制,经ND标准阳性血清处理的病料接种的鸡胚未见死亡,证明分离毒为NDV。动物回归试验表明,分离毒肌肉注射非免疫七彩山鸡能使之发病、死亡,出现与自然病例一致的症状与病变,但肌注SPF鸡只感染,不出现临床症状。其生物学特性NHAT为快、HOT为8min、ICPI为1．73、IVPI为1．45、MDT为44h。表明该七彩山鸡NDV分离株与鸡F48E9株在生物学特性上表现出不同的特性。用分离毒株制成油乳剂灭活疫苗,分别以分离毒株和Lasota株的灭活苗免疫广西麻鸡和七彩山鸡,进行疫苗免疫效果比较和交叉免疫保护试验。结果表明,分离毒株灭活苗免疫组鸡各个时期所产生的HI抗体效价和Lasota灭活苗免疫纽鸡的抗体效价相差不明显,各组的升降规律也基本一致;Lasota灭活苗免疫七彩山鸡对分离毒株的攻击只能80％保护。而其他各免疫组的无论是对分离毒株还是F48E9株的攻击均能100％保护。说明NDV不同毒株之间的毒力和抗原性存在一定的差异。     

鸡传染性支气管炎H120鸡胚毒与细胞毒的免疫效力比较试验

试验以相同病毒量的鸡胚毒及细胞毒分别免疫试验鸡,结果表明,两者的免疫效力无明显差异.随着鸡免疫病毒量的适当增加,免疫效果趋好,每只鸡免疫103EID50病毒量时,攻毒保护率可达70%～90%;每只鸡免疫104～105 EID50病毒量时,攻毒保护率可达90%.