抗氯霉素特异性单克隆抗体的制备及鉴定

为制备氯霉素单克隆抗体,并鉴定其特性,采用重氮化法合成氯霉素-牛血清白蛋白作为免疫原免疫小鼠,通过杂交瘤技术建立杂交瘤细胞株,利用体内诱生法制备单克隆抗体,用间接ELISA和间接竞争ELISA分别测定抗体效价和特异性.结果获得细胞株5C9,诱生腹水中抗体的效价在1.024×106以上,抗体IC50约为0.94 ng/mL,与其他同类药物交叉反应均小于0.01％.制备的单克隆抗体特异性强,可用于氯霉素快速检测试剂盒的研制.     

强力霉素单克隆抗体制备及ciELISA检测方法的建立

以人工合成的强力霉素-牛血清白蛋白(DC-BSA)为抗原免疫BALB/C小鼠,用间接ELISA和间接竞争ELISA法选择细胞融合的备用小鼠;应用杂交瘤技术建立分泌DCMcAb的杂交瘤细胞株,用体内诱生法制备DCMcAb,并对DCMcAb的免疫学特性进行鉴定;应用DCMcAb建立检测DC的ciELISA方法,并对其相关特性进行检测.结果表明:筛选后获得1株分泌特异性抗体的细胞3D1-H4,细胞培养上清效价为1∶(8×102),腹水效价为1∶(5.12×105),抗体为IgG1型免疫球蛋白,与四环素、土霉素和金霉素分别有8.87％、5.86％和2.74％的交叉反应率,与其他抑制物无交叉反应性;ciELISA检测方法的线性范围为1.58～199.53ng/mL,灵敏度为2.88 ng/mL,半数抑制的质量浓度IC50为36.31 ng/mL,斑点叉尾(鲴)肌肉和肝脏样品中DC的平均添加回收率分别为85.13％和79.69％,平均批间和批内变异系数均小于15％,不同基质对检测结果影响小.所建立的ciELISA方法可以应用于水产品中DC残留的检测.     

重金属钼离子单抗的制备及其免疫学特性研究

为了检测水质、土壤、食品中的重金属钼离子的残留,故制备用于钼离子检测用的单克隆抗体。采用已合成的钼离子人工抗原Mo6+-ITCBE-BSA免疫Balb/C小鼠,用间接ELISA和间接竞争ELISA法筛选出备用小鼠,用细胞融合技术筛选制作单克隆抗体。结果表明:筛选出4株特异性强、敏感度高的杂交瘤细胞,其中4B3杂交瘤细胞株间接ELISA检测培养上清抗体效价为1∶(3.6×102);体内诱生法制备腹水效价为1∶(5.12×105);杂交瘤核型鉴定结果显示4B3杂交瘤细胞株染色体数目平均为99.4。4B3杂交瘤细胞株用间接竞争ELISA结果显示,IC50值为23.4μg/L,与Cr3+-EDTA的交叉反应率为81.8%,与其他金属螯合物无交叉反应。说明Mo6+-EDTA-mAb可用于Mo6+污染检测的免疫学试验。     

醋酸甲羟孕酮单克隆抗体制备及ELISA检测方法的建立

建立饲料和食品中醋酸甲羟孕酮(MPA)残留快速、灵敏的检测方法.分别以碳二亚胺法、混合酸酐法合成MPA的人工抗原MPA-BSA、MPA-OVA为免疫原和包被原,采用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗MPA单克隆抗体(McAb),在Protein G Sepharose 4 Fast Flow纯化MeAb基础上通过对ELISA反应条件的优化建立了MPA检测的间接竞争ELISA方法,并对MPA标品添加试样进行了初步应用.结果获得1株能稳定分泌抗MPA McAb的杂交瘤细胞株M68F9H9,分泌McAb腹水效价为1∶1×107,属于IgGl亚类,MPA半数抑制浓度(IC50)为5.0 ng/mL,具有良好特异性;以纯化McAb为基础建立的间接竞争ELISA,MPA最低检测限为0.16 ng/mL,线性检测范围为0.1～80 ng/mL;除与甲羟孕酮、甲地孕酮、盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和已烯雌酚交叉反应率分别为100%、25%、<0.01%、<0.01%和<0.01%;MPA添加试样应用检测结果与进口试剂盒检测结果相符.     

睾酮多克隆抗体的制备及免疫学检测方法的建立

采用优化的碳化二亚胺法制备睾酮(TES)人工抗原,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,建立间接竞争ELISA标准曲线.标准曲线在PBS中的线性检测范围为0.096～92.200 ng/mL,相关系数R2=-0.972 2,半数抑制浓度(IC50)为2.800 ng/mL,最低检测限(LOD)为0.035 ng/mL;抗体与去甲睾酮的交叉反应率为22.3％,与其他检测化合物的交叉反应很小或忽略不计.羊尿20倍稀释后进行添加回收试验,其添加值与检测值的相关系数为0.985 2.因此,该免疫学方法可用于动物尿液中睾酮残留水平的定量分析.     

沙丁胺醇单克隆抗体的制备及其免疫学鉴定

采用混合酸酐法合成SAL-BSA和SAL-OVA,用紫外法和凝胶电泳法鉴定,使用细胞融合技术建立沙丁胺醇杂交瘤细胞株,通过体内诱生腹水法大量制备沙丁胺醇高亲和力单克隆抗体。结果显示,所免疫的小鼠抗体效价均达到10-4;融合后筛选出的3株杂交瘤细胞单抗亚型均为IgG1,细胞培养上清间接ELISA效价为1∶2.5×102~1∶1.02×103,用4D3E7细胞株制作的腹水效价为1∶5.12×105,对SAL的IC50为1.35μg/L,除与瘦肉精有10.8%交叉外,与其他β2-受体激动剂的交叉反应均小于0.2%。且具有较好的特异性。试验获得了高效价、敏感、特异的SAL mAb,为动物性食品中SAL残留的免疫学检测奠定了基础。     

伏马毒素B1单克隆抗体的制备及间接竞争ELISA方法的建立

采用戊二醛法将半抗原伏马毒素B1分别与载体蛋白钥孔血蓝蛋白（KLH）和蛋白卵清白蛋白（OVA）偶联成为完全抗原KLH-FB1和OVA-FB1。OVA-FB1作为包被抗原建立ELISA方法;KLH-FB1作为免疫原免疫8周龄Balb/c小鼠,应用杂交瘤细胞融合技术制备单克隆抗体。经三次亚克隆后,筛选出两株（6H3,6H11）能特异、稳定分泌抗FB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株。选择其中一株杂交瘤细胞通过体内诱生腹水的方法制备单克隆抗体,经检测表明单克隆抗体的亚型为IgG1,轻链为κ型。采用间接ELISA测得腹水纯化后效价达l∶16 000,抗体对伏马毒素的半数阻断浓度（IC50）为8.26 ng/mL,对玉米赤霉烯酮、黄曲霉素B1等结构类似物几乎不存在交叉反应,与其他结构的氯丙嗪、链霉素等无交叉反应。利用获得的抗FB1单克隆抗体,建立了间接竞争ELISA检测方法,检测灵敏度为0.44 ng/mL,检测线性范围为0.93~73.06 ng/mL,加标回收率在线性范围内达到回收率可达78.4%~102%。     

四环素全抗原的合成及多克隆抗体的制备

利用Mannich反应合成四环素(Tc)与BSA(牛血清白蛋白)的完全抗原,由紫外光谱确定是否偶联成功;同理,制备四环素OVA抗原作为包被抗原,以制备的完全抗原TC-BSA免疫清洁级新西兰兔制备多克隆抗体,运用间接ELISA法测定血清抗体效价。试验结果表明,紫外光谱确定偶联成功,血清抗体效价为105,间接竞争法测定抗体50%抑制率(IC50)检测限为200ng/mL,最低检测限量可达到20ng/mL,特异性好。     

醋酸甲羟孕酮(MPA)人工抗原的合成与单克隆抗体的制备

为研制检测醋酸甲羟孕酮（MPA）的免疫学检测技术进行MPA单克隆抗体的制备与鉴定,研究分别采用碳二亚胺法、混合酸酐法将MPA偶联到牛血清白蛋白（BSA）和鸡卵清白蛋白（OVA）上制备免疫原（MPA—BSA）与包被原聊PA—OVA）,通过BALB／c小鼠免疫、细胞融合、间接ELISA和阻断ELISA筛选、有限稀释法克隆亚克隆获得分泌MPA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并通过ELISA方法对其抗体效价、特异性、敏感性、亚类及稳定性进行鉴定。结果表明：成功合成2种人工抗原,MPA与BSA、OVA的偶联比分别为8：1、12：1;获得1株稳定分泌MPA单克隆抗体（McAb）的杂交瘤细胞株2G4H9,McAb腹水的间接ELISA效价为1：8×10^4,IgG1亚类,K型轻链,腹水抗体IC50为5．0ng·mL^-1,与甲地孕酮、盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和己烯雌酚交叉反应率为12．5％、〈0．01％、〈0．01％和〈0．01％。作者认为：MPA单克隆抗体特异性和敏感性良好,杂交瘤细胞株性能稳定,为进一步研究MPA相关免疫学分析技术奠定了基础。     

抗牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体的研制

将含有牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV1)囊膜糖蛋白E2编码基因的真核表达质粒pEC143免疫BALB/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术,以重组E2蛋白纯化产物为检测抗原,经间接ELISA法筛选和3次有限稀释法克隆,得到1株能稳定分泌抗BVDV1和BVDV2单克隆抗体的杂交瘤细胞株.该3D8株单抗能识别BVDV1标准毒株(NADL、OregonC24V)、BVDV2标准毒株(890、104)、2株BVDV1分离株和3株BVDV2分离株,而不能识别牛轮状病毒、牛疱疹病毒1型,显示出良好的特异性.阳性杂交瘤细胞的上清液、腹水ELISA抗体效价分别为2~9和10×2~7,为IgM亚类.其单克隆抗体杂交瘤细胞株的获得,为建立单抗介导的检测BVDV1和BVDV2抗原和抗体的血清学方法和实现标准化诊断奠定基础.     

浅谈饲料中有效能的测定技术

饲料中有效能是供动物生长发育的基础.不同动物所用的有效能体系不同,目前大多数动物采用消化能、代谢能体系,但随着研究的发展与深入,发现最能反映饲料有效能的是净能体系.无论哪种体系,采用合理的测定技术准确测定饲料中的有效能值显得尤其重要,通过对饲料有效能值的准确测定可以实现动物所需能量的精确供给,减少养殖成本,使经济效益最大化.文章综述了几种有效能评价体系的测定技术.     

高校贫困生认定工作面面观

国家贫困生资助政策实施以来,对贫困生帮助很大,同时在实际运行中还存在着一些问题。本文提出贫困生认定工作仍需要进一步采取各种相关配套措施,以推动和保障贫困生资助工作更好地开展。     

《河北农业大学学报》创刊年代考

清光绪二十八年(1902)河北农业大学前身—直隶农务学堂诞生,经几易其名,于1958年更名为河北农业大学至今。清光绪三十一年(1905)直隶高等农业学堂时期创办了《北直农话报》,清光绪三十四年(1908)更名为《直隶农务官报》,中华民国七年(1918)改出《农学月刊》,中华民国十七年(1928)易名为《河大农刊》,中华民国二十三年(1934)更名为《河北通俗农刊》,中华民国二十四年(1935)易名为《河北农林学刊》,1948年更名为《河北农学院研究专刊》,1959年更名为《河北农业大学学报》至今。《河北农业大学学报》前身诸刊都与现时的《河北农业大学学报》有着一脉相承的历史渊源,各刊之间联系紧密,连续性、继承性强。因此,《河北农业大学学报》的创刊时间应追溯至1905年创办的《北直农话报》。     

生态旅游潜在客源市场特征的调查研究--以湖南永州金洞森林旅游开发为例

为探明客源市场生态旅游消费的潜在特征,采用问卷调查的形式,就长沙市居民对湖南金洞生态旅游开发的意向等问题进行抽样调查．结果显示,生态旅游符合人们“回归自然”的旅游新时尚,有着极大的开发空间,指出生态旅游的开发要注重环境保护和可持续发展．开发的产品要以休闲度假类的大众产品为主,开发生态旅游都市客源市场还要多种渠道并用,尤其是要注重媒体的宣传．     

动物疫苗接种异常反应的处理

动物疫病是畜牧业生产的大敌,要发展畜牧业生产就要防治动物疫病。但在疫苗接种时,经常出现正常反应外的其他不利于机体的反应,如废食、皮疹、休克、死亡等,正确处理或避开这些问题,对推行动物疫病的计划免疫,实施强制免疫,保护人畜安全具有十分重要的现实意义和作用。     

探究板栗的科学贮藏方法

板栗属壳斗科栗属(Castanea mollisima Blume),其种子属于顽拗型种子,不耐贮藏。基于近年来板栗贮藏保鲜技术研究成果,从合理采收、贮前处理、贮藏方法等方面进行论述。     

厚胶合板弹性模量预测模型

为了预测厚胶合板弹性模量,通过简化层合板理论,该文建立了胶合板弹性模量预测模型,并以单板条、经过涂胶热压处理的单板条和相同工艺条件下的单板层积材的弹性模量,采用4种不同铺层方式的19层桉树胶合板对模型进行了验证。结果表明:3种预测值与实测值的趋势一致,相关系数R2顺纹在0.86以上,横纹在0.88以上,但是精度不同。采用单板条弹性模量预测的胶合板弹性模量比实测值偏低;采用经过涂胶热压处理后的单板条弹性模量预测的胶合板弹性模量比实测值偏高;采用相同工艺条件下的单板层积材弹性模量预测的胶合板弹性模量与实测值偏差较小,顺纹平均误差为4.64%,横纹平均误差10.94%。因此,采用相同工艺条件下的单板层积材的弹性模量来预测胶合板的弹性模量是可行的。      

增强我国水果业出口竞争力的思考

分析了入世4年来,我国水果出口在量上实现了突破,但并没有实现质变的主要原因,指出我国水果业存在的问题。论述了引进外资对发展我国水果业的意义,并提出了具体可行的对策与建议。     

山茱萸多糖提取工艺优化及马钱苷含量测定

采用L（934）正交设计试验,对山茱萸浸提液中山茱萸多糖的酶水解法提取工艺进行了优化研究,并对浸提液的中有效成分马钱苷含量进行了HPLC法分析。结果表明,山茱萸多糖浸提的最佳工艺为：液料比1∶5,浸提时间4 h,浸提温度80℃,果胶酶添加量0.55 g/L。用HPLC法测定出的山茱萸浸提液中马钱苷平均含量为0.512 ...     

甘肃省日光温室生产发展对策的探讨

甘肃省设施农业发展历史悠久,古代创造了麦草覆盖生产韭 黄及泥碗护苗等传统设施农业技术,至今仍然受到农民欢迎,在 甘肃省中部应用面积约5万多hm2。建国后,甘肃设施农业获得 了新生,大致经历了三个阶段;第一阶段为引进应用北京改良式 温室阶段,时间在20世纪50-60年代;第二个阶段为塑料拱棚 与地膜覆盖栽培阶段,时间在20世纪70-80年代:第三阶段为