First report of raspberry yellows disease caused by raspberry bushy dwarf virus in Japan

Severe yellowing of leaves was observed on red raspberry in Akita Prefecture. When inoculated with sap from symptomatic raspberry leaves, Chenopodium quinoa plants developed chlorotic ringspot and mottling that are typical of raspberry bushy dwarf virus (RBDV) infection. In western blot analysis, an antibody to the coat protein (CP) of RBDV reacted against ca. 30-kDa protein specific to the diseased trees. In RT-PCR testing for RBDV, single DNA fragments were amplified from total RNA samples of the diseased trees. The nucleotide sequences of the DNA fragments covering the entire CP region revealed 87–97?% identities with those of RBDV isolates.     

烟草坏死病毒A大豆分离物的分子鉴定

 对曹琦和濮祖芹早期分离到的烟草坏死病毒大豆分离物的生物学、血清学和外壳蛋白的序列进行了进一步研究。该分离物能侵染8科29种植物, 除系统侵染大豆和本生烟外, 其余寄主均为局部侵染。电镜下病毒粒子呈球状, 直径约28nm。基因组为单组分RNA, 大小约为3.7 kb, 具有2条亚基因组, 分别约为1.6 kb和1.3 kb。外壳蛋白亚基的分子量约为30 kDa。血清学试验表明, 该分离物与TNV柳树分离物的抗血清呈特异反应, 与同属坏死病毒属(Necrovirus)的烟草坏死病毒D(TNV-D)和甜菜黑色焦枯病毒(BBSV)无血清学关系。利用简并引物通过RT-PCR克隆了该分离物的外壳蛋白基因。序列分析表明, 该分离物与烟草坏死病毒A(TNV-A)、TNV-D和TNV-D^H的外壳蛋白分别具有88.77%、45.13%和45.49%的氨基酸序列一致性。因此, 该大豆分离物属于TNV-A的一个新株系, 命名为TNV-A^C。     

树莓茎溃疡病病原菌鉴定及其生物学特性研究

在辽宁省沈阳市树莓园发现了一种新的茎溃疡病害,对其进行了组织分离、单孢纯化、致病性测定、形态学和分子生物学鉴定。结果表明,细极链格孢(Alternaria tenuissima)是引起此病害的病原菌。病原菌生物学特性研究表明,该病原菌菌落生长的最适培养基为PDA,最适碳源为麦芽糖,最适氮源为半胱氨酸,最适温度为25℃,光照对其无明显影响。本研究为细极链格孢(A. tenuissima)在我国引起树莓茎溃疡的首次报道。     

Serological differences between red currant spoon leaf virus,virus isolates from Eckelrade-diseased cherry trees and the Scottish raspberry ringspot virus

Antisera were made to red currant spoon leaf virus (SLV), an isolate of the Scottish raspberry ringspot virus (RRV), and two virus isolates from Eckelrade-diseased cherry trees (EV). Different virus isolates, including one from Belgium, were tested against these antisera. The results indicate that we are dealing with a group of virus isolates with different antigenic properties. SLV is very closely related to RRV, being undoubtedly a strain of this virus. Dutch EV isolates differ from SLV and RRV and from each other, the Belgian isolate being closely related to one of the Dutch EV isolates. The serological differences found do not correspond with the geographical distances between the localities where the viruses were collected.Samenvatting Antisera werden bereid tegen het lepelbladvirus van rode bes (SLV), een isolatie van het Schotse raspberry ringspot-virus (RRV) en twee virusisolaties uit kersebomen met Eckelraderziekte (EV). Met behulp van deze antisera werden verschillende virusisolaties getoetst, waaronder één uit België van kers met Eckelraderziekte. De resultaten zijn vermeld in de tabellen 1 en 2. Ze duiden erop, dat we te maken hebben met een groep van virusisolaties met verschillende antigene eigenschappen. SLV is zeer nauw verwant aan RRV en is ongetwijfeld een stam van dit virus. Nederlandse EV-isolaties verschillen zowel van SLV en RRV, als van elkaar. De Belgische isolatie is nauw verwant aan één van de Nederlandse EV-isolaties. De grootte van de gevonden verschillen correspondeert niet met de geografische afstand tussen de plaatsen waar de virusisolaties werden verzameld.     

Detection of Apricot latent virus and Plum bark necrosis stem pitting-associated virus by RT-PCR in Eastern Anatolia (Turkey)

Field surveys were carried out to determine presence and incidence of Apricot latent virus (ApLV) and Plum bark necrosis stem pitting-associated virus (PBNSPaV) in the main stone fruit growing areas of Eastern Anatolia. RT-PCR and nested-RT-PCR techniques were used to detect ApLV and PBNSPaV, respectively. Three apricot samples out of 224 tested positive for ApLV, although infected trees showed no apparent disease symptoms. Of 45 sweet cherry and plum trees tested for PBNSPaV, 35 tested positive. Stem pitting symptoms were observed on the trunks of PBNSPaV-infected sweet cherries. Trunk bark was spongy and thick; pits and grooves were observed on the woody cylinder. The overall incidence of ApLV was 1.3% and of PBNSPaV was 77%. This is the first report of ApLV and PBNSPaV in Eastern Anatolia, Turkey.     

Similarity of clover yellow vein virus and pea necrosis virus

There still is confusion concerning the relationships between clover yellow vein virus (ClYVV), pea necrosis virus (PNV) and bean yellow mosaic virus (BYMV). Therefore, three Swedish isolates of ClYVV and its type strain have now been compared with three isolates of PNV. A bean mosaic isolate and three pea necrosis isolates of BYMV have been used for reference. Based on host range tests, serology, and light microscope studies of inclusion bodies, ClYVV and PNV isolates are now considered to be strains of one virus, with the first name having priority. ClYVV (including the original PNV) especially differs from BYMV in its ability to infect white clover, to produce local lesions on cucumber cotyledons (at least two cultivars), to go systemic inChenopodium quinoa (the two local selections used at Wageningen and at Uppsala), to be rather virulent onNicotiana clevelandii, and to provoke extensive nucleolar enlargements in its host cells. Serologically the two viruses are more or less distinct.     

Infection and necrosis of cowpea mesophyll cells by tobacco necrosis virus and two strains of tobacco mosaic virus

When cowpea mesophyll tissue with or without any epidermal layer was inoculated with tobacco necrosis virus (TNV), local necrotic lesions were produced. In epidermal strips isolated after inoculation of intact leaves local lesions were never observed. Homogenates of epidermal strips removed within 30 min after inoculation of the leaf with the cowpea strain of tobacco mosaic virus (Cp-TMV) or with TNV and incubated on agar for 2 or 4 days were not infectious. However, when clusters of mesophyll cells or vein pieces were still attached to the epidermal strips after stripping, the homogenates showed virus activity. When cowpea leaves were inoculated with Cp-TMV or a common strain of TMV (TMV-U) infective virus material was present in the mesophyll tissue as measured in the homogenates, at the moment of stripping, i.e. within 10 min after inculation.It may be concluded that cowpea mesophyll cells can act as primary sites of viral ingress into the leaf and that the epidermis is not required for necrosis production after virus inoculation.Samenvatting De mogelijkheid werd onderzocht om cowpea-mesofylcellen zonder de aanwezigheid van epidermiscellen met TNV te infecteren. Kleine lokale necrotische lesies werden 40–72 uur na inoculatie zichtbaar waaruit blijkt, dat bij cowpea de epidermis niet noodzakelijk is voor de vorming van TNV-lesies. Geïsoleerd epidermisweefsel vertoonde nooit lokale lesies. Homogenaten van met TNV geïnoculeerde en daarna geïsoleerde cowpea-epidermisstukjes werden getoetst op virusactivitiet. Als de stukjes volledig vrij waren van mesofylcellen of nerfweefsel, dan vond daarin geen virusvermeerdering plaats tijdens een incubatie van 2 of 4 dagen op agar. Als na het strippen nog enkele mesofylcellen of nerfstukjes aanwezig waren, kon wel enige virusactiviteit in de homogenaten worden aangetoond.In cowpeabladeren die geïnoculeerd werden met de cowpea-stam van TMV of de normale stam van TMV had infectieus virusmateriaal al binnen 10 min na inoculatie het mesofyl bereikt. Blijkbaar is in cowpeabladeren de epidermis niet noodzakelijk voor de binnenkomst van virus of voor de necroseproduktie na virusinoculatie.     

烟草黑胫病和根黑腐病生防假单胞杆菌的筛选与鉴定

为获得对烟草黑胫病和根黑腐病具有双重防病效果且能够促进烟草生长的假单胞杆菌,采用稀释涂布法从40份土壤样品中分离出201株细菌,通过平板对峙和含毒介质法,筛选出对烟草黑胫病和烟草根黑腐病病原菌均具有良好拮抗作用的菌株PA2101和PG3402。盆栽促生试验表明,菌株PA2101和PG3402能协调地改善烟草地上部分的生长和烟草根系发育,均在一定程度上增加了烟草的株高、叶面积、株鲜重、根鲜重、叶片数和根长,提高了烟草的根冠比和根活力。盆栽试验结果表明,菌株PA2101对烟草黑胫病和根黑腐病的防效分别为70.11%和62.67%,均高于其对照药剂;菌株PG3402对两种病害的防效分别为60.92%和60.00%,与对照药剂相当。抗性标记菌株的定殖试验结果表明,菌株PA2101和PG3402在接种后第29 d能定殖于烟草根际土壤和根内,在烟草茎和叶内也能长时间存在,表明两菌株能够良好定殖。16Sr DNA序列、菌落形态和生理生化性状分析表明,菌株PA2101为铜绿假单胞杆菌Pseudomonas aeruginosa,菌株PG3402为格拉纳达假单胞杆菌Pseudomonas granadensis。综上所述,菌株PA2101和PG3402对烟草具有良好的促生作用,并对烟草黑胫病和根黑腐病有较好的防病效果,是具有生防潜力的菌株。     

The relationships between pea necrosis virus and bean yellow mosaic virus

A standard pea necrosis virus isolate (PNV-E178) and two isolates resembling PNV (Kow 14 and E242) were fully compared with bean yellow mosaic virus type strain B25 (BYMV-B25). PNV-E178 and PNV-like isolates Kow 14 and E242 resembled each other and the earlier described pea necrosis strain of BYMV in their reaction on pea, but differed from BYMV strains studied so far in inclusion bodies, and in their reaction in cucumber.Serologically, PNV isolates E178 and E242 were closely related to each other and both showed a more distant relationship to BYMV-B25. PNV isolate Kow14 was serologically intermediate between PNV and BYMV-B25, but was hardly infectious toPhaseolus beans.E242 and, to a lesser extent, also Kow14 were considered strains of the pea necrosis virus, which is closely related to BYMV, but apparently not more so than bean common mosaic virus, pea seedborne mosaic virus, clover yellow vein virus and some other members of the potyvirus group.The lack of well-definable borderlines between the different taxonomic entities unavoidably leads to problems in diagnosing (identifying) intermediate isolates.Samenvatting Een aantal virussen kan in erwten ernstige aftervingsverschijnselen doen ontstaan, zoals een eerder beschreven ertwtenecroserivus (PNV-E178) en een erwtenecrosestam van het bonescherpmozaïekvirus (BYMV). Twee nieuwe erwtenecrose-isolaten (Kow14 ene E242) werden bestudeerd en hun verwantschap met het erwtenecroserirus (PNV) en het bonescherpmozaïekvirus (BYMV) gaf aanleiding tot een nieuw onderzoek naar de relatie tussen de twee laatstgenoemde virussen.In hun reactie op erwt en boon leken PNV-E178, Kow14 en E242 veel op elkaar en op de erwtenecrosestam van BYMV. Ze verschilden echter van de mozaïekstam (B25) van dit virus in de geproduceerde celinsluitsels, vooral wat betreft de sterke vergroting der nucleodi en bij E178 bovendien door de opvallende uitstaande kristalnaalden in de celkern. Ook zijn de eerste drie isolaten duidelijk minder pathogeen voorPhaseolus-bonen (Fig. 1) dan de bonemozaïkstam en de erwtegeelmozaïekstam van het BYMV. Op deze plantesoort doet Kow14 slecht een gering aanal lokale vlekken ontstaan. Verder wordenNicotiana-soorten gemakkelijker door de drie isolaten aangetast (Fig. 2 en Tabel 1). Deze laatste worden ook niet veroorzaakt door de erwtenecrosestam van het BYMV, hoewel ook deze vrij gemakkelijkNicotiana-soorten aantast (o.a. het nu in de serologieproef gebruikte isolaat E221).Serologisch zijn PNV-E178 en E242 nauw aan elkaar verwant en zijn beide minder nauw verwant aan B25 (Tabel 2). Kow14 neemt serologisch een tussenpositie in, hoewel dit isolaat in biologisch opzicht meer een uiterste is omdat het nauwelijks infectieus is voorPhaseolus-bonen.E242, en hoewel minder verwant, ook Kow14, worden nu beschouwd als stammen van het erwtenecrosevirus (Tabel 3). Dit virus is weliswaar vrij nauw verwant aan het bonescherpmozaïekvirus, maar niet nauwer dan het bonerolmozaïekvirus, het erwterolmozaïkvirus, het nerfvergelingsvirus van klaver en enkele andere leden van de aardappelvirus-Y-groep.Het klaarblijkelijk on tbreken van shcerpe grenzen tussen de verschillende taxonomische eenheden leidt onvermijdelijk tot moeilijkheden bij de beschrijving en herkenning van intermediatire isolaten(tussenvormen).Guestworker from February through May 1, as afellow of the Netherlands Ministry of Education, research plant virologist of the Institute for Plant Protection, Budaperst, Hungary.     

复合RT-PCR方法同步检测百合X病毒、百合无症病毒及百合斑驳病毒

建立了特异性检测百合X病毒(LVX)、百合无症病毒(LSV)及百合斑驳病毒(LMoV)的单一、双重及三重PCR体系并对各体系的灵敏度进行了研究。结果表明,单一PCR体系可检测的LVX最低浓度在1×10^-7μg/mL,LSV最低浓度在1×10^-8μg/mL,LMoV最低浓度在1pg/mL;双重PCR体系可明显检测的LVX、LSV最低浓度在1pg/mL,LSV、LMoV最低浓度在1ng/mL,LVX、LMoV最低浓度在1pg/mL;三重PCR体系可明显检测的LVX、LSV和LMoV的最低浓度为1ng/mL。     

Stem necrosis of aster and Russell prairie gentian caused by Chrysanthemum stem necrosis virus

A new disease causing necrotic streaks on stems and necrosis on leaves of aster (Callistephus chinensis) and Russell prairie gentian (Eustoma grandiflorum) was observed in Toyama Prefecture, Japan, in September 2009. On the bases of host reactions, serological reactions, viral particle morphology, and the nucleotide sequence of the nucleocapsid protein gene, the causal pathogen was identified as Chrysanthemum stem necrosis virus (CSNV). This report is the first in the world of natural infection of aster and Russell prairie gentian by CSNV. We propose the name “stem necrosis of aster and Russell prairie gentian” for these new diseases.     

人参黑斑病生防菌的分离鉴定及防效

本研究以人参链格孢为靶标菌,采用平板对峙法从人参根际土壤筛选出一株拮抗细菌YJ 3-7,结合细胞形态判断、16S rDNA和gyrA基因序列比对分析,鉴定菌株YJ 3-7为贝莱斯芽胞杆菌Bacillus velezensis。该菌株的发酵液、菌悬液和无菌发酵液对人参链格孢的生长均具有抑制作用,抑制率分别为98.76%、98.27%和70.62%。离体叶片和盆栽试验表明YJ 3-7发酵液可以较好地防治人参黑斑病,防效分别为63.24%和67.92%,盆栽防效略低于多菌灵(72.81%)。除此之外,菌株YJ 3-7还能有效抑制其他8种病原真菌的生长。研究表明贝莱斯芽胞杆菌YJ 3-7抑菌谱广,对人参黑斑病具有显著的防治效果,在植物病害防治中具有一定的应用潜力,可为人参黑斑病生物防治药剂的开发奠定基础。     

烟草黑胫病拮抗菌的筛选、鉴定及发酵条件优化

为获得对烟草黑胫病（tobacco black shank）具有较好拮抗作用的菌株,从食腐昆虫美洲大蠊Periplaneta americana肠道分离纯化得到1株对烟草黑胫病具有较强抑制作用的D5-8菌株,拟进一步明确该菌株的分类地位,优化其发酵条件并测定其对烟草黑胫病的防治效果。利用形态特征、生理生化特性观察及16S rRNA基因序列分析对D5-8菌株进行鉴定;以细菌发酵液OD₆₀₀值及对病原菌的抑制率为指标,对其发酵培养基和发酵条件进行单因素试验及正交试验;通过室内盆栽试验,明确菌株D5-8对烟草黑胫病的防治效果。结果表明,经平板对峙试验发现菌株D5-8对烟草寄生疫霉的抑制率达66.80%;通过形态特征和生理生化特征初步确定菌株D5-8为芽胞杆菌属Bacillus,结合16S rRNA基因序列分析鉴定菌株D5-8为特基拉芽胞杆菌Bacillus tequilensis;其最适培养基：牛肉浸膏8 g,酵母浸粉5 g,麦芽糖10 g,蒸馏水1000 mL;最佳的发酵条件为温度28℃、初始pH 6、转速210 r/min、装液量30 mL、接种量2%、培养时间60 h、光照时间4 h;盆栽试验结果表明,发酵条件优化后D5-8发酵液（10⁸cfu/mL）对烟草黑胫病的保护防效和治疗防效可达66.89%和53.72%,均高于原始发酵液的61.84%和51.83%。研究结果为特基拉芽胞杆菌D5-8生防菌剂的开发及其对烟草黑胫病的防治应用提供了理论依据。     

Infection of cowpea mesophyll protoplasts by tobacco mosaic virus and tobacco necrosis virus

Samenvatting Protoplasten werden geïsoleerd uit cowpeabladeren en konden worden geïnfecteerd met tabaksmozaïekvirus en tabaksnecrosevirus serotype A. De virusvermeerdering in de protoplasten werd tot twee dagen na de inoculatie onderzocht.     

Detection,isolation and characterization of cowpea mosaic virus in Egypt

Journal of Plant Diseases and Protection - Cowpea mosaic virus is among the most economically important viruses infecting cowpea. Incidence of infection was assessed in two governorates in Egypt,...