山羊支原体山羊肺炎亚种培养基的筛选及生长曲线测定

为筛选出山羊支原体山羊肺炎亚种的适宜培养基,将山羊支原体山羊肺炎亚种分离株M1601分别接种Thiaucourt肉汤、MEM-KM2和TSA 3种不同的培养基,测定其在3种不同培养基中生长滴度、生长速度,并测定了M1601在最适培养基中在不同培养阶段的生长滴度。结果表明,添加2g/L丙酮酸钠和150mL/L马血清的Thiaucourt肉汤培养基最适宜山羊支原体山羊肺炎亚种的生长,生长滴度可达109 CCU/mL,在培养6h后开始进入对数生长期,培养60h后进入稳定期,培养72h时后进入衰亡期。此试验结果为山羊支原体山羊肺炎亚种培养特性研究提供了参考数据。     

一株山羊支原体山羊肺炎亚种的分离鉴定与分子特征

从送检的山羊肺炎肺脏中成功分离到一株支原体，经过3次克隆纯化后进行生化试验、电镜观察、PCR及酶切、基因特征鉴定，结果显示分离物SD3属于山羊支原体山羊肺炎亚种成员。将培养物经气管接种2只山羊可引起1只山羊典型发病，体温升高至41．5℃，IgG和IgM抗体效价明显升高，其中IgG抗体变化与临床表现基本同步。剖检发现肺脏发生严重病变，并从中再次分离到该病原体。     

山羊支原体山羊肺炎亚种甘肃株的分离及鉴定

2007年甘肃某地羊场山羊发生以呼吸困难、咳嗽和胸膜肺炎为特征的呼吸道传染病,经临床诊断为羊支原体性肺炎.用改良的Thiaucourt's培养基对病山羊的肺组织进行病原分离,成功分离到1株支原体M1601,经菌落形态观察、生化试验、PCR鉴定、以16S rRNA基因序列构建的分子进化树分析和动物致病性试验,证明该分离株属于山羊支原体山羊肺炎亚种.     

山羊支原体山羊肺炎亚种湖北株的鉴定及其外膜蛋白的免疫原性研究

从湖北某地山羊肺脏中分离支原体,经多次克隆纯化后进行生化试验、显微镜观察、PCR及酶切分析、基因特征鉴定以及用动物致病性试验对该菌株进行了鉴定,命名为GH2,进一步通过免疫印迹对GH2株外膜蛋白及GH2株全菌蛋白免疫原性进行分析,并用抗Y98血清和抗PG3血清进行比较,筛选GH2株特异性的外膜蛋白,结果表明GH2株为山羊支原体山羊肺炎亚种,存在于GH2外膜蛋白中的相对分子质量大约为60和49.7 ku的蛋白可能是其主要的免疫原性蛋白,也是GH2株区别于丝状支原体山羊亚种标准株PG3和绵羊肺炎支原体标准株的主要特异性抗原.这一结果为山羊支原体山羊肺炎亚种的诊断和疫苗研制提供了良好的理论基础.     

山羊支原体山羊肺炎亚种在2种培养基上的生长特性比较

为筛选出山羊传染性胸膜肺炎疫苗制备中抗原产量高且成本低的培养基,本试验将山羊支原体山羊肺炎亚种M1801株和M1601株接种于含20％马血清的改良Thiaucourt's肉汤(MTB)和新研制的含5％马血清的培养基(HF3),在120 h内监测其pH值、颜色变化单位(color change units,CCU)和菌体...     

丝状支原体山羊亚种最佳培养基的筛选

在不同条件下对丝状支原体山羊亚种进行培养,通过PPLO精氨酸培养基、牛心汤培养基、MEM-KM2培养基以及不同种类动物血清和同一动物不同浓度血清,从生长滴度、生长速度、培养基来源、造价各个方面的比较试验,结果显示,加100 mL/L马血清的MEM-KM2培养基更适合于丝状支原体山羊亚种的培养,它的生长滴度可达109,所需时间只为5 d,并且配置方便,价格合理。这一结果为丝状支原体山羊亚种抗原的大批量生产奠定了良好的基础。     

绵羊肺炎支原体、丝状支原体山羊亚种和精氨酸支原体多重PCR检测方法的建立及应用

根据GenBank登陆的绵羊肺炎支原体(MO)、丝状支原体山羊亚种(MmC)和精氨酸支原体(M.arg)的相关基因序列,分别设计了扩增MO hsp70基因、MmC hsp70基因和M.arg ADI基因片段的特异性引物,通过对反应条件和反应体系的优化,建立了MO、MmC和M.arg的多重PCR检测方法。特异性试验结果显示:该方法能同时扩增出MO 703bp、MmC 385bp和M.arg223bp的特异性目的片段,而对其他病原的DNA扩增为阴性。敏感性试验结果显示:该方法对这3种支原体的最低核酸检出量均为10pg。55份临床样品检测结果表明:三重PCR检测结果与分离培养诊断方法一致,均能检测出样品中的病原菌。本试验建立的多重PCR方法能为MO、MmC和M.arg的感染提供正确快速诊断方法。     

山羊支原体山羊肺炎亚种单克隆抗体的制备及抗体结合抗原表位的筛选

本研究旨在制备山羊支原体山羊肺炎亚种(M.capricolum subsp.capripneumoniae, Mccp)的单克隆抗体并筛选与抗体结合的抗原表位。试验用甲醛灭活的Mccp免疫BALB/c小鼠,运用传统的细胞融合技术进行融合获得杂交瘤细胞,亚克隆,制备单克隆抗体腹水,采用酶联免疫技术（ELISA）和免疫印迹（Western blotting）技术鉴定单克隆抗体的特异性及胶内酶切鉴定与抗体结合的抗原表位。最终成功筛选获得5株单克隆抗体,鉴定到3个与抗体结合的抗原表位,为下一步科学研究提供了初步且可靠的试验基础。     

山羊支原体山羊肺炎亚种和多杀性巴氏杆菌双重 PCR 检测方法的建立

为建立一种能够同时检测山羊支原体山羊肺炎亚种和多杀性巴氏杆菌的双重 PCR 方法,本研究采用2对特异性引物,对退火温度和引物浓度比进行了优化,成功建立了一种能同时检测上述两种病原的双重 PCR 方法。结果显示,该方法具有很好的特异性,仅对山羊支原体山羊肺炎亚种和多杀性巴氏杆菌有扩增,而对其他常见的羊呼吸道病原无扩增;该方法对两种病原的检测限分别为32 pg 和50 pg,与单独 PCR相同;26份临床样品中山羊支原体山羊肺炎亚种的检出率为23．1％,多杀性巴氏杆菌的检出率为26．9％。所建立的双重 PCR 具有特异性好、灵敏度高的特点,为临床上这两种病原感染的快速诊断和流行病学调查等提供了更为有用的手段。     

山羊传染性胸膜肺炎病原的分离鉴定

从内蒙古地区山羊病料中分离出疑似山羊传染性胸膜肺炎的病原,经染色镜检、生化鉴定、血清学等方法初步鉴定为山羊支原体山羊肺炎亚种.参照已知山羊支原体ADI基因设计的引物进行PCR扩增,通过电泳分析得到与文献报道相一致的大小为316 bp的条带,最终确定为山羊支原体山羊肺炎亚种.     

The pathogenicity and pathogenesis of Mycoplasma capricolum subsp. capripneumoniae (F38) in the caprine mammary gland

The right mammary gland of 12 lactating goats was inoculated intracisternally with 1 ml of Mycoplasma capricolum subsp. capripneumoniae (Mcc) containing 10>⁶ colony-forming units (CFU), while their left mammary halves received 1 ml of sterile PPLO broth only. Two goats served as uninfected controls. The clinical mastitis that developed in the infected mammary halves within 24 h was initially acute but became increasingly chronic by the end of the experiment at 24 days post inoculation (DPI). The disease was characterized by atrophy of the infected mammary halves, leading to marked agalactia and an increase in somatic cell counts, with a preponderance of neutrophils initially and lymphocytes later. The Mycoplasma was re-isolated from infected mammary secretions up to 16 DPI but not from blood. Histopathology revealed that the mastitis was acute and purulent initially, followed by infiltration of lymphonuclear cells and fibroplasia in the lymphomononuclear cells and fibroplasia in the interacinar tissue, and later by massive fibrosis. Immunohistology demonstrated the presence of Mycoplasma-like bodies localized mainly on the surface of acinar/duct epithelial cells. The studies showed that Mcc was highly pathogenic in the caprine mammary gland.     

丝状霉形体山羊亚种血清抗体间接ELISA检测方法的建立

利用丝状霉形体山羊亚种标准株PG3制备抗原,经纯化后作为包被抗原建立了间接ELISA方法,用于检测丝状霉形体山羊亚种血清抗体。经方阵滴定确定最佳抗原包被浓度为1.09μg/mL,血清样品最佳稀释度为1∶64,兔抗羊IgG辣根过氧化物酶结合物的最佳稀释度为1∶40 000,抗原抗体最佳结合时间为1 h。判定标准为样品D490 nm值与标准阴性血清D490 nm值之比（P/N）≥3为阳性,≤2.5为阴性,介于二者之间的为可疑。重复性和稳定性试验证明,建立的间接ELISA的稳定性和重复性良好,与间接血凝试验相比,其敏感性较高。     

土壤含盐量、pH对牧草品质的影响

根层土壤含盐量可以改善牧草品质,能促进部分禾本科牧草粗蛋白质、粗脂肪、灰分、磷的合成,而抑制粗纤维的合成。在中度和重度盐碱地上,ｐＨ对牧草品质影响不大。     

黄牛皱胃积食前后瘤胃内容物pH值与纤毛虫数量变化的探讨

从患有皱胃积食的5例黄牛瘤胃中采用胃管吸引法获得手术前、胃腔冲洗后及术后采食3 d后的瘤胃内容物,分别测定瘤胃内容物的pH值和纤毛虫数量。结果表明,患有皱胃积食的黄牛经5～8 d病程,其瘤胃内容物pH值为8.12±0.225,呈弱碱性,纤毛虫含量为(4.9±2.4)×10~4个/mL;手术掏空瘤胃并进行冲洗后,经过3 d采食,瘤胃内容物由刚冲洗完毕时的pH值为6.06±0.31、纤毛虫数量为阴性逐渐变化到pH值为7.5±0.179、纤毛虫数量为(25.8±9.7)×10~4个/mL。