免疫PCR检测技术及其在食品安全领域中的应用

免疫PCR技术是一种在免疫学和PCR技术基础上建立起来的新型检测技术,这种技术同时具有ELISA的高特异性和PCR的高灵敏性。本文介绍了免疫PCR的技术原理和反应体系,比较其不同种类和应用范围,指出免疫PCR存在的问题并提出相应的对策;归纳了目前免疫PCR在食品安全等领域中的应用;并结合免疫PCR技术的优势提出其在食品安全检测中的应用前景。     

微滴PCR技术的研究进展

微滴PCR(microdroplet PCR)技术结合了PCR技术和乳化技术,该技术在乳化剂中进行,是一种新型的核酸扩增技术。它可以高效、高通量地扩增DNA分子,在生命科学研究领域得到了广泛的应用。文章就微滴PCR技术的基本原理、建立与发展及其应用作一综述。     

克隆启动子方法的比较及应用

基因的表达调控已成为分子生物学研究热点之一。启动子是基因表达调控的重要顺式元件,启动子的克隆对于研究基因表达调控、构建基因工程载体、表达目的蛋白有着重要的意义。启动子克隆的方法很多,从常用的启动子陷阱技术筛选启动子到PCR方法的应用,基于PCR克隆启动子技术有:载体锚定PCR、反向PCR、接头PCR、交错热不对称PCR等,为克隆启动子提供了更可靠,更合理的方法。文章着重介绍了几种启动子的克隆方法,分析了它们的优缺点,并展望了今后的研究前景。     

基于随机引物的PCR-Walking技术

染色体步行技术越来越倾向于采用PCR技术,不同随机引物的应用产生了不同的方法。针对目前应用较广的热不对称交错PCR（TAIL-PCR）、单寡核苷酸巢式PCR（SON-PCR）、基于RAPD原理的单引物PCR、位点寻找PCR和自我形成接头式PCR进行了介绍,侧重说明了热不对称交错PCRTAIL-PCR的原理、优缺点及应用。     

利用重叠延伸PCR技术进行DNA的人工合成

重叠延伸PCR技术是一种通过寡聚核苷酸链之间重叠的部分互相搭桥、互为模板进行PCR扩增,从而获得目的DNA基因片段的方法。该技术在目的基因的人工合成及外源蛋白在宿主中的高效表达等方面显示出良好的应用前景。综述了重叠延伸PCR技术的原理、反应条件的优化及其应用。     

荧光PCR技术在动物医学中的应用

荧光PCR技术是利用荧光技术对核酸进行绝对定量的一项新兴技术,与普通的PCR技术相比,荧光PCR技术具有特异性强、灵敏度高、无污染和快速等优点。近几年,荧光PCR技术在动物医学中得到了广泛的应用,本文着重介绍其在细菌性和病毒性疫病的诊断中所发挥的作用。     

PCR技术在植物病害检测中的应用*

 PCR技术是20世纪末出现的新兴生物技术。当前，该技术广泛地应用于分子生物学、医学、农学等学科。简要介绍了在植物病害检测中，病原特异的PCR引物的设计、模板的制备、PCR反应体系对检测灵敏度和特异性的影响等几个方面，并综述PCR技术在植物病害检测中的应用。     

多重PCR技术在植物生物学研究中的应用进展

多重PCR是近年来兴起的一项分子生物学技术,它是在一个反应体系中同时扩增多个核酸片段的PCR技术,具有高效快捷、成本低廉、适合大量样本分析与鉴定等优点.就多重PCR技术原理及其在植物种质、转基因植株、植物病害、抗病基因和植物育种检测中的应用现状进行了综述,并对其应用前景作了展望.     

PCR技术在食源性病原微生物检测中的应用

PCR技术具有敏感、专一等特点,不仅可以对病原微生物进行特异性识别,而且可以鉴别同一种类病原微生物的致病性菌株和非致病性菌株,因此应用PCR技术进行病原微生物的检测具有十分独特的优势。本文对PCR技术在食源性病原微生物检测中的研究与应用情况进行了综述。     

原位PCR及其在植物研究中的应用

原位PCR是继PCR技术发明以来,分子生物学技术上又一个革命性的突破。由于该技术可检测出组织或细胞中低拷贝,甚至是单拷贝的特异序列,而被越来越多的研究人员青睐,但它在植物上的应用报道较少。该文简要介绍了原位PCR的技术原理;综述了国内外研究人员以植物材料为研究对象进行原位PCR的技术操作;综述了原位PCR在植物细胞水平、组织水平和染色体水平的应用进展;探讨了原位PCR在植物上应用难的原因;从4个方面阐述了原位PCR在植物上的应用前景:(1)单拷贝、低拷贝和多拷贝的基因或特异序列的检测;(2)杂种中亲本染色体的鉴定;(3)物种进化的研究;(4)遗传转化材料的分析。     

聚合酶链式反应技术在食品源性分析中的应用

[目的]比较不同聚合酶链式反应(PCR)技术在食品源性分析中的应用,分析引物、荧光染料和探针的特点及其发展前景。[方法]介绍PCR、荧光定量PCR技术,比较该技术及荧光标记基团的特性,及其在食品源性成分鉴定方面的实际应用。[结果]通过完善DNA提取方法、优化反应体系、设计特异性引物或探针均能有效提高PCR检测的灵敏度及准确性。[结论]采用PCR、荧光定量PCR技术能有效地实现食品中源性成分鉴定,且方法具有高灵敏度、高特异性、高效率等优势,能满足实验室对食品中源性成分的检测分析。     

聚合酶链式反应(PCR)技术在环境监测中的应用

聚合酶链式反应（PCR）技术因其特异性强、灵敏度高以及快速简便等优点,广泛应用于环境监测.综述了改进PCR新技术：逆转录PCR、多重PCR、实时定量PCR、免疫捕捉PCR以及PCR-DGGE的原理及其在环境监测中的应用现状.PCR技术为在分子水平上进行环境微生物监测、污染物的生物损伤作用、群落结构多样性分析提供了有力的试验手段,具有广泛的应用前景.     

鸭疫里默氏杆菌PCR快速检测方法的建立

鸭疫里默氏杆菌病对养鸭业危害严重,传统及常规检测方法均有不足,因此有必要建立起一种更加快速简捷、敏感实用的菌落PCR法。根据GenBank公布的鸭疫里默氏杆菌ATCC株OMPA基因序列,在基因保守区设计特异性引物,直接挑取单菌落作为模板,从分离鉴定的1,2,10,11型15株菌及1,2,10,11型4株参考菌株中均能扩增出大小为670 bp的特异性核酸片段,而对照的大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌的扩增结果均为阴性;将培养菌用TE作10倍梯度稀释,最低检出限量为80个鸭疫里默氏杆菌;建立的菌落PCR与常规PCR法比较,两种方法均能扩增出相同的特异性条带。结果表明,菌落PCR法具有较好的特异性和敏感性,与常规PCR法结果完全一致,且更加快速简捷,在临床应用上具有更好的实用价值。     

利用单线虫多重PCR技术快速制备DNA分子量标准

基于单只线虫6对染色体及多重PCR技术建立一种特异性扩增特定长度核酸片段的方法,进而探索其在常规核酸分子量标准制备中的应用。利用多重PCR引物设计及特异性评估软件以秀丽线虫6对染色体为模板,分别设计扩增不同长度核酸片段的特异性引物对,并直接对单只秀丽线虫进行多重PCR扩增,采用20g/L琼脂糖凝胶电泳进行分离鉴定并采集图像,通过系统研究优化获得特异性高的1～6重PCR扩增产物,产物大小经鉴定与预期目的条带一致,6重PCR扩增产物条带与常规分子量标准DL 2 000相应条带完全吻合,说明采用该方法能够有效制备特定片段大小的分子量标准。     

利用搭桥PCR技术对蛋白质内含子HP进行改造(英文)

[目的]利用搭桥PCR技术对蛋白质内含子HP进行改造。[方法]根据搭桥PCR中寡聚核苷酸链之间重叠的部分互相搭桥、互为模板的原则设计多对引物,通过多次PCR扩增获得目的基因片段,进而实现对蛋白质内含子HP在基因水平上进行多个位点同时定点突变和添加Linker。[结果]搭桥PCR产物克隆经DNA测序分析,证明蛋白质内含子HP内部的4个半胱氨酸成功突变成丝氨酸,几个PCR前体片段也无缝的融合成HP基因片段,而且没有引进任何其他突变;经DNA测序,46bp的DNALinker成功的插入到设计好的HP基因序列中,且没有任何碱基突变和错配。[结论]该研究不仅实现了对蛋白质内含子HP的快速改造,而且扩大了搭桥PCR的应用范围,同时也为蛋白质内含子的基础改造提供了低成本、简捷、高效的方法。     

多重PCR技术在动物病原检测中的应用

多重PCR技术是近几年兴起的一项新技术,具有高效快捷、高度特异敏感、实验成本低等优点,能够同时扩增出多个核酸片段,具有普通PCR方法不可比拟的优越性。文章主要论述了多重PCR技术的影响因素、条件优化以及多重PCR技术在动物病毒病原体、细菌病原体、动物产品及寄生虫和微生物耐药性等方面的检测应用,指出当前应用PCR技术对动物疫病病原诊断中存在的问题,并提出了解决问题的方法。     

新会陈皮及其副产物的研究进展

综述了陈皮中挥发油、黄酮、生物碱和多糖等主要有效成分的提取工艺和药理功效等。其中,2-甲氨基-苯甲酸甲酯是新会陈皮挥发油特有成分,可用于陈皮的鉴别;黄酮类化合物含量较高,常作为评价陈皮质量的指标;生物碱类、陈皮多糖和微量元素等药用价值也比较高,值得深入探究。目前,新会柑肉、柑橘核和柑橘络等副产物主要被种植户和消费者废弃,但其具有一定的药理活性和应用价值,值得进一步研究利用。     

AFLP技术流程的改进及其在种子研究中的应用

概述了扩增片段长度多态性（AFLP）在模板、酶切、扩增体系、检测和分析方法等方面的技术流程,并探讨了近年来AFLP在种子研究中的应用。