贵州省六盘水市马铃薯青枯病病原菌的初步研究

马铃薯(Solanum tuberosum L.)是贵州省六盘水市第三大粮食作物,具有重要的经济地位。由茄科雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)引起的马铃薯青枯病(Bacterial wilt)是一种世界性病害,是马铃薯生产中继晚疫病之后第二个最主要的限制性病害。本试验通过对贵州省六盘水市的马铃薯青枯病病原菌的生理小种及生化变种进行调查,为六盘水市马铃薯的抗病育种、引种栽培及青枯病的综合防治提供参考价值。结果表明,生理小种3号(生化变种2号)为优势小种,但生理小种1号(生化变种3号)、生理小种3号(生化变种2号)在本地区普遍流行,且两个生理小种分布无明显的地域特征,在海拔高度上亦无差异。     

引起广西桑树“褐枯”的病原菌及致病机制研究

对广西地区的桑树发病初期叶片褐枯情况进行调查，通过收集桑树病株并进行分离。结果表明，得到优势菌株42株，各菌株形态基本一致。对分离到的菌株进行16S rDNA序列鉴定，比对后发现所有菌株序列均与劳尔氏青枯菌Ralstonia solanacearum（RS）相似度达99％，生化型分析结果显示主要为生化Ⅰ型。随机选择10个菌株进行致病力实验，结果表明，各菌株均具有致病性，部分菌株致病率达90％以上。其后利用扫描电镜观察青枯菌侵染桑苗过程，发现侵染后期桑根木质部导管内聚集大量菌体，堵塞整个导管。上述结果表明：广西地区桑树“褐枯”症状病害属于桑树青枯病，病原菌为劳尔氏青枯菌RS，其致病机制是通过在桑根木质部导管内大量定殖，堵塞导管阻止水分运输，最终导致植株枯萎死亡。     

青枯病菌研究进展

细菌性青枯病是由茄科雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)引起的一种世界范围的细菌性土传病害,广泛分布于热带、亚热带及部分温带地区。青枯病菌寄主广泛,可侵染50多个科的200余种植物,给作物生产带来巨大损失。充分了解青枯病菌是进行青枯病防治的重要前提。本文从青枯病菌的菌群分类、基因组结构、致病机制与致病途径、病菌检测等方面做了系统的阐述,并对基于青枯病菌及寄主植物基因组序列信息,研究和探讨青枯病菌致病机制与青枯病防治进行了展望。     

海南青枯病抗、感桑品种根际土壤真菌群落多样性分析

通过比较青枯病抗、感桑品种根际土壤真菌群落结构与多样性差异,分析根际真菌群落与桑树青枯病抗性的相关性。采用Illumina Miseq高通量测序技术,对青枯病抗性桑品种‘抗青283’ב抗青10’和易感桑品种‘强桑1号’根际土壤真菌群落ITS1-ITS2区域进行扩增、测序,分析了2种桑品种根际真菌群落结构与多样性。（1）‘抗青283’ב抗青10’根际优势菌门主要为囊菌门（54.86%）、担子菌门（24.67%）、接合菌门（3.17%）,优势菌属主要为淡紫拟青霉属（5.71%）、镰孢菌属（5.43%）、旋孢腔菌属（1.29%）;‘强桑1号’根际优势菌门主要为囊菌门（68.04%）、担子菌门（15.12%）、接合菌门（1.90%）,优势菌属主要为腐质霉属（8.46%）、镰孢菌属（5.44%）、旋孢腔菌属（2.22%）。（2）抗性品种根际土壤中起重要作用的真菌群落为：海壳科、小皮伞科、球囊霉目_f_uncultured,而易感品种根际土壤中起重要作用的真菌群落为：毛孢壳目、赤壳科、干朽菌科、Cantharellales-fam-incertae-sedis。（3）抗性品种根际检测到淡紫拟青霉属和丛枝菌根真菌球霉菌目均为广泛应用的生防菌,推测与其抗性有直接关系。虽然2种桑品种根际土壤优势真菌群落丰度无显著差异,但抗性品种根际检测到丰度更高的淡紫拟青霉属和丛枝菌根球霉菌目,可能与其抗性有关。该研究结果为海南桑青枯病拮抗真菌的筛选与防控技术的研究奠定了基础。     

马铃薯青枯病病原的鉴定

利用湖北省四个地点的马铃薯青枯病样本,对其病原物的菌落形态、碳水化合物利用、显微形态、鞭毛引物序列、演化型以及致病力等方面进行了分析。结果显示,在2,3,5-氯化三苯基四氮唑培养基上检测得到16个病原物菌落符合青枯菌菌落形态特征,包括菌落圆形,隆起,中间红色,乳白色分泌物,并伴有褐色物质;显微观察16个病原物中仅有6个病原物具有短杆状、两端钝圆的特点;而其中能够通过PCR扩增得到鞭毛序列的病原物仅有源自武汉的HZ4-14和HZ5-1,序列比对发现两者序列一致且与GMI1000等已测序青枯菌株同源性达到99%;演化型测定结果显示HZ4-14和HZ5-1均能得到144 bp的目标条带,为演化II型;利用四种不同马铃薯材料试管苗伤根接种鉴定结果显示两个菌株均具有一定致病力。结果表明,引起湖北省武汉市青枯病的病原物为雷尔氏青枯菌Ralstonia solanacearum,生理小种2号,演化II型(美洲组)。     

青枯雷尔氏菌在不同作物根际定殖与轮作防病

青枯病是芝麻和花生的重要病害之一。为探索合理的轮作防控模式,运用青枯雷尔氏菌（Ralstonia sola⁃ nacearum）抗利福平标记菌株JXS02-L土壤接种,测定菌株在芝麻、花生、甘薯、大豆、玉米和小葱等6种作物根际土 壤和根部的定殖与消长动态,分析了不同轮作模式对芝麻/花生青枯病发生程度的影响。结果表明：播种后3w,6种 作物根际土壤菌量均低于初始接种菌量;播种后6 w,芝麻、花生、甘薯根际土壤菌量已上升至初始接种菌量水平 （3.20 ×106~4.93×106 CFU·g-1）,之后菌量持续上升,大豆、玉米根际土壤菌量则持续下降;播种后12 w,大豆、玉米根 际土壤菌量比芝麻、花生、甘薯根际土壤菌量低4个数量级,小葱植种后6 w~12 w,均未检测到病菌。播种后3 w~ 12 w,芝麻、花生和甘薯根部菌量持续上升,大豆和玉米根部菌量先升后降;至播种后12w,大豆和玉米根部菌量比 芝麻、花生和甘薯根部菌量低5个数量级,小葱根部则始终未检测到病菌。芝麻-大豆-小葱-芝麻、芝麻-大豆-玉 米-芝麻2种轮作模式芝麻青枯病病情指数比芝麻-花生-甘薯-芝麻轮作模式分别降低19.95%、12.87%;花生-大 豆-玉米-花生轮作模式花生青枯病病株率比花生-芝麻-甘薯-花生轮作模式降低11.63%。本研究结果对于了解 青枯雷尔氏菌的生态多样性,以及指导青枯病的科学防控具有重要意义。     

pBBR1MCS2-Tac-EGFP广宿主载体适宜标记Ralstonia so-lanacearum

利用标记基因追踪病原菌在植物体内的入侵和定殖,是研究病原菌-寄主互作的重要手段。本研究利用电转化法将广宿主载体pBBR1MCS2-Tac-EGFP导入青枯雷尔氏菌（Ralstonia solanacearum）GMI1000菌株中,获得了青枯雷尔氏菌带绿色荧光标记的转化子。转接试验结果表明,转化子的抗生素抗性和绿色荧光强度有良好的遗传稳定性。pBBR1MCS2-Tac-EGFP不影响GMI1000菌株的致病力,且EGFP蛋白能够在植物中稳定表达。灌根法接种试验结果表明,病原菌在第1天即完成对根系的侵染,并在第6天扩散至其他组织,随后造成植株萎蔫。研究结果表明所获转化子可用于后续的病原菌侵染机理等方面的研究。     

红壤连作花生青枯病发病规律及病原菌分离

以中国科学研究院红壤生态实验站花生连作障碍长期施肥试验为平台,研究了经过连续12年不同施肥处理后连作花生病害的发病规律,并分离其病原菌。结果表明,所有施肥处理的连作花生都有不同程度的发病。施用化肥的处理（F）花生发病率最高,到结荚期时已达68%,而有机肥＋有效菌剂的处理（BM）发病率在8%左右,这表明有机肥及配施有效菌剂能够有效抑制连作花生土传病害的发生。通过分离和鉴定,发现青枯病是连作花生主要病害,其病原菌是青枯雷尔氏菌（Ralstonia solanacearum）。     

广州地区番茄青枯病菌的系统发育分析及致病力评价

2012~2013年,于广州地区采集番茄青枯病病样并进行病原分离工作,经分子鉴定后获得9个菌株。通过PCR扩增获得了其中9个菌株的egl基因序列,采用国际新兴的青枯菌演化型分类框架进行系统发育分析,以NCBI数据库中分离自不同寄主的青枯菌菌株egl基因序列为参考序列进行系统发育树构建。结果表明:9个菌株属于青枯菌演化型I型即亚洲分支菌株的4个序列变种,分别为序列变种13、14、34、44。以高抗青枯病番茄材料‘兴农021’和敏感材料‘金冠3号’为试材,评价了其中5个菌株的致病力,结果表明3-1和18-6致病力较高。     

海南岛爪哇白豆蔻青枯病病原菌的进一步鉴定

爪哇白豆蔻青枯病是近年来在我国首次发现的一种新病害。通过对病害的诊断和病原菌的形态、染色反应、培养性状、生理生化特性以及致病性的进一步测定,确认本病的病原菌是青枯假单胞菌[Pseudomonas solanacearum(Smith)Smith]。根据本病菌的供试菌株对6种糖、醇的利用情况,认为本病菌株属于Hayward的生物型Ⅲ。     

Algicidal effect of 3-(3-indolyl)butanoic acid, a control agent of the bacterial wilt pathogen, Ralstonia solanacearum

The chemical control agent 3-(3-indolyl)butanoic acid, previously reported as a control agent for the bacterial wilt pathogen Ralstonia solanacearum, was shown to suppress the growth of green algae during hydroponic culture of tomato. The algicidal activity of the compound was effective at 10 μg/ml, completely preventing generation of green algae under non-shaded greenhouse conditions. The algicidal effect was mainly due to suppression of the growth of motile unicellular algal cells tentatively identified as Chlamydomonas spp., which are commonly occurring in the hydroponic solution and vigorously multiply to form an algal mat on the sponge supports. The compound has potential as a non-phytotoxic algicide for hydroponically cultured crop plants.     

钝叶草叶斑病病原鉴定

为鉴定钝叶草叶斑病的病原,通过对61份来自中国海南、广东、广西、云南、福建、江苏,以及美国和南非的疑似钝叶草叶斑病的叶片样品进行分离培养,获得120个菌株,对其进行纯化培养、形态学观察、致病性测定,利用来自海南的钝叶草为靶标寄主,并利用rDNA-ITS、GAPDH、TUB2引物对55号菌株进行分析鉴定.结果表明,经柯赫...     

橡胶树胶孢炭疽菌组蛋白乙酰转移酶CgGCN5调控致病力功能研究

胶孢炭疽菌引起的炭疽病害是造成海南省橡胶减产的主要原因之一。研究该病原菌致病力的分子机制能够为新型防控策略的研发提供理论依据。在橡胶树胶孢炭疽菌中,存在1个编码组蛋白乙酰转移酶的基因CgGCN5。在本研究中,通过同源重组原理及原生质体转化法构建了橡胶树胶孢炭疽菌CgGCN5的敲除突变株和互补菌株,并对其生长、产孢及致病力等表型进行了初步分析。结果表明,与野生型菌株相比,CgGCN5敲除突变株的生长速率、产孢能力均显著下降;并且突变株对橡胶树叶片的致病力也显著下降;进一步分析表明,突变株丧失了对玻璃纸的穿透力。与此同时,互补菌株能够恢复突变株的相应表型。以上结果表明,CgGCN5在调控胶孢炭疽菌的生长及致病力中起重要作用。     

化感水稻内生真菌的分离鉴定及其发酵产物的生物学效应研究

以化感水稻品种‘PI312777’‘6173’和‘6180’为研究对象,从水稻根、茎和叶中分离获得70株内生真菌,采用形态学观察和rDNA-ITS区序列分析,对内生真菌进行分类鉴定。进一步以化感水稻‘PI312777’分离得到的粘红酵母和塔宾曲霉为试验菌株,通过不同稀释倍数的真菌发酵液对非化感水稻进行MS半固体培养基育苗试验,研究化感水稻内生真菌发酵产物对非化感水稻萌发率、株高等形态指标及苯丙氨酸解氨酶（PAL）、过氧化氢酶（CAT）和过氧化物酶（POD）活性的影响。结果表明,从供试化感水稻品种中共分离得到17种内生真菌,经rDNA-ITS系统发育树分析鉴定为10个属,这些内生真菌主要分布在曲霉属（Aspergillus）（29.63%）、青霉属（Penicillium）（16.67%）和镰刀菌属（Fusarium）（12.96%）。不同稀释浓度塔宾曲霉发酵液对水稻幼苗生长均有促生作用,其中50倍稀释浓度处理可显著提高水稻幼苗的株高、根长及POD酶活性。粘红酵母菌发酵液5倍稀释浓度可显著提高水稻幼苗的PAL酶活性并对水稻幼苗有促生作用。稗稻共生条件下,塔宾曲霉和粘红酵母发酵稀释液对水稻均有促生效应。本研究可为化感水稻内生真菌进一步应用于水稻生产实践提供有益指导。     

国内新发危险性橡胶树拟盘多毛孢叶斑病鉴定及其病原学研究

基于目前橡胶树拟盘多毛孢叶斑病在境外主要植胶国爆发流行的态势,以及对天然橡胶产业经济带来的巨大影响。笔者前期对我国海南、云南、广东等省橡胶主产区的13个农场和胶园进行了病害踏查,在我国海南省乐东县志仲镇乐东保显农场发现了疑似橡胶树拟盘多毛孢叶斑病病样。本研究将该疑似病样病原菌进行分离、纯化和致病力测定,并通过形态学和分子系统学分析,确定该病原菌为新拟盘多毛孢属（Neopestalotiopsis）的Neopestalotiopsis aotearoa Maharachch., K.D. Hyde & Crous;基础生物学特性分析表明,该病原菌菌丝生长和孢子萌发的适宜温度为28℃,孢子致死温度为50℃;适宜pH为6.5,最适碳源为蔗糖和D-葡萄糖,最适氮源为硝酸钾和大豆蛋白胨;最适培养基为PDA,培养8 d后产孢。初步明确了该病的病原及其基础生物学特性,为提前储备防治该病的相关技术措施提供理论依据。     

番茄、茄子和辣椒枯萎病原菌分子鉴定及其致病性测定

调查了福建省番茄、茄子和辣椒3种主要茄科枯萎病的发生与症状情况,通过常规分离,依据Booth鉴定和分子鉴定相结合的方法,对从这3种茄科作物上采集的40个菌株进行了鉴定。结果表明,40株镰刀菌中有35株属于尖孢镰刀菌,占总数的87.5％;3株为串珠镰刀菌,另2株为茄形镰刀菌。进一步利用Koch氏法则进行菌株致病性检测,结果表明,尖孢镰刀菌是本研究中所采集的番茄、茄子和辣椒病株的病原菌,而3株串珠镰刀菌和2株茄形镰刀菌均不造成寄主植物发病。     

Effect of antagonistic Fusarium spp. and of different commercial biofungicide formulations on Fusarium wilt of basil (Ocimum basilicum L.)

The ability of antagonistic Fusarium spp. to control Fusarium wilt of basil caused by F. oxysporum f. sp. basilici was tested under glasshouse conditions from 1994 to 1996. Fusarium oxysporum antagonistic strain 251/2, a protoplast fusion-derived hybrid coded FI-11 and F. moniliforme strains TF4 and TF4 RB were able to decrease (P = 0.05) the incidence of Fusarium wilt significantly. Biocontrol was consistent, especially when the antagonists were applied by mixing a talc preparation of propagules in the substrate (10⁵ CFU/ml of substrate) 1–2 weeks before sowing or at sowing. Seed coating with the biocontrol strains (10⁸ CFU/g of seed) did not generally provide sufficient disease containment, whereas the combination of substrate treatment and seed coating did not improve wilt control in comparison with substrate treatment alone. Two commercial formulations, based on antagonistic F. oxysporum strains and one containing the antagonistic strain K61 of Streptomyces griseoviridis, were generally not sufficiently effective at the tested dosages.     

斑兰叶叶部病害病原菌的分离鉴定

斑兰叶作为一种新兴的食品香料备受消费者喜爱,其主要食用部位为叶片,但叶部病害成为影响斑兰叶产业发展的首要制约因素。目前,国内外关于斑兰叶叶部病害的研究鲜有报道,为了对斑兰叶叶部病害开展有针对性的防治工作,本研究通过调查斑兰叶叶部病害发生流行规律,明确叶部病害主要发病时期及病害种类,并对叶部不同病害病原菌进行分离鉴定,为推动斑兰产业发展提供技术支撑。结果表明,斑兰叶叶部病害的发生主要从每年11月中下旬开始到翌年4月结束,对这个时期的不同病害通过病原菌的菌落形态、孢子显微结构观察、真菌通用引物ITS1/ITS4鉴定和致病性测定,采用离体叶片和活体盆栽苗2种方式测定分离的28株菌株的致病性,通过柯赫氏法则验证,最终得到9株致病菌BDC4121、BDC11221、BDC4112、BDC21112、XYS211、LSS112、LSS214、LSS213、LSS221。通过产孢培养基筛选发现致病菌BDC11221在绿豆液体培养基、摇床培养5~7 d产孢,LSS214在PDA培养基28℃下恒温培养30 d左右产孢,BDC4121、BDC4112、XYS211、LSS112、LSS221、LSS213在PDA培养基28℃下恒温培养7~10 d产孢;并结合ITS1/ITS4鉴定和孢子显微结构观察,确定9株致病菌主要分布在篮状菌属（Talaromyces）、镰刀菌属（Fusarium）、炭疽菌属（Colletotrichum）、附球菌属（Epicoccum）、拟盘多毛孢菌属（Pestalotiopsis）、拟茎点霉属（Phomopsis）、链格孢属（Alternaria）及Acrocalymma属。下一步将结合多基因组测序技术对致病菌进行分子鉴定研究。