蔗糖对茶树儿茶素生物合成的影响

儿茶素是茶树重要的次生代谢产物,也是茶叶的重要功能物质,具有多种药理活性。因此正确评价茶叶及其制品中儿茶素含量,了解儿茶素生物合成及其调控手段具有重要的意义。利用香草醛盐酸比色法、HPLC等方法,研究蔗糖诱导子处理对茶儿茶素生物合成的影响,并通过qRT-PCR技术分析蔗糖处理对茶树儿茶素生物合成过程中基因表达的影响。结果显示,无论是茶树愈伤组织还是茶树幼苗经蔗糖处理后其儿茶素含量及组分都有所增加,但是高浓度的蔗糖会抑制茶树愈伤组织的生长,特别是在液体培养的早期添加蔗糖。添加适当浓度的蔗糖能增加茶树愈伤组织中非酯型儿茶素C和EC的含量;蔗糖处理后茶树幼苗中非酯型儿茶素EGC和EC含量明显上升,而酯型儿茶素 EGCG相对含量有所下降。qRT-PCR分析显示蔗糖诱导了茶树幼苗中C4H、CHS、CHI、F3H、LAR、ANR、DFR、F3’H、F3’5’H基因表达,其中变化最明显的是F3H,其次是ANR、CHS。这进一步证实了F3H、ANR为茶树儿茶素合成的关键基因。     

白茶萎凋过程中儿茶素合成关键酶基因表达分析

[目的]研究白茶萎凋过程中茶多酚、儿茶素组分含量变化与其合成途径中关键酶基因的动态表达,为优化白茶的萎凋工艺提供参考依据.[方法]以不同萎凋阶段的白茶为原料,分别采用福林酚(Folin-Ciocalten)比色法和高效液相色谱法(HPLC)测定茶多酚、儿茶素组分含量的变化,并以实时荧光定量PCR检测白茶萎凋过程中与儿茶素物质代谢合成相关基因(PAL、C4H、CHS、CHI、F3'5'H、FYH、F3H、DFR、LAR、ANS、ANR和UGGT)的相对表达量.[结果]白茶萎凋过程中茶多酚含量呈逐渐降低趋势,儿茶素组分中表儿茶素(EC)、没食子儿茶素(GC)、表没食子儿茶素(EGC)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)含量整体上呈先上升后下降的变化趋势,且均在萎凋历时32h出现最大值.实时荧光定量PCR检测结果表明,儿茶素生物合成途径关键酶基因PAL、C4H、CHI、F3H、F3'H、F35'H、DFR、LAR、ANR和UGG丁均在萎凋历时32 b呈上调表达,CH基因则随萎凋历时的增加呈下调表达趋势,ANS基因表达在整个萎凋过程中呈先上升后下降的变化趋势,在萎凋历时16 h达最大值.白茶萎凋过程中儿茶素合成途径关键基因表达水平具有调控儿茶素生物合成的作用.[结论]在白茶萎凋过程中,儿茶素生物合成途径关键酶基因PAL、C4H、F3H、FYH、DFR、LAR、ANR的表达与儿茶素组分单体EC、GC、EGC的积累规律基本一致,其最大值均出现在萎凋历时32 h,因此在制茶时可适当缩短萎凋时长,以提高白茶品质.     

诱变茶树品种中儿茶素的分析

儿茶素属于黄烷醇类化合物,在茶叶中含量较高,是茶叶中重要的化学组分。现代研究证明,儿茶素具有抗衰老、降低胆固醇、抑菌、抗氧化、抗辐射和抑制强致癌物质亚硝酸胺的形成等。茶树品种中儿茶素组成及含量与制茶品质的关系十分密切,其含量越高,茶汤滋味越强。本文以诱变茶树品系为材料,对春茶一芽一叶蒸青样儿茶素组分及含量进行测定,并分别与原始材料黔湄419号(大叶类)品种和杂F1-1号(小叶类)品系中儿茶素组分及含量相比较,探讨诱变茶树品系中儿茶素组分及含量的变化,以掌握品种特有的生化组分,为品种的适制性和开发新的茶叶产品提供科学依据。     

湖北省地方审定茶树品种中儿茶素含量分析

以12个湖北省地方审定茶树品种为供试材料,采用高效液相色谱法（HPLC）检测分析8种主要儿茶素组分含量。结果表明,儿茶素各组分变异系数在1973%～6717%之间,变异幅度较大;非酯型儿茶素组分含量间的变化趋势不明显,而酯型儿茶素各组分含量大小为EGCG>GCG>ECG>CG。基于儿茶素品质指数进行聚类分析显示,鄂茶1号、鄂茶8号、鄂茶10号3个茶树品种可以作为适制名优绿茶的品种;五峰212、五峰310、鄂茶3号、鄂茶6号4个茶树品种EGCG含量高,可用于开发特殊茶饮;鄂茶2号儿茶素品质指数最低,适制红茶,但其EGC和儿茶素总量最高,应在今后的生产和育种中善加利用。     

外源物诱导茶树主要次生代谢物质儿茶素合成的研究进展

儿茶素是茶树主要次生代谢物质之一,也是茶叶的重要功能物质,具有多种生物活性。该研究简要介绍了儿茶素的组成和活性,重点综述了有关外源物诱导主要茶树次生代谢物质儿茶素形成的研究进展。     

云南茶树资源儿茶素和没食子酸的差异性分析

以勐海国家种质茶树资源圃中的121个云南茶树资源为材料,采用高效液相色谱法(HPLC)测定茶叶中的没食子酸(GA)、儿茶素(C)、表儿茶素(EC)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)、表没食子酸儿茶素(EGC)及表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的含量。结果表明,GA含量变幅为0.210%～1.902%,平均0.834%,在茶树中含量较低。C含量变幅为0.069%～8.865%,平均1.916%;EC含量变幅为0.126%～2.865%,平均1.112%;EGC含量变幅为0.00%～3.709%,平均0.954%;ECG的含量变幅为0.739%～8.957%,平均4.063%;EGCG含量变幅为0.819%～11.77%,平均5.939%;儿茶素总量含量为6.354%～22.654%,平均14.042%。资源间儿茶素差异较大,说明云南茶树资源具有丰富的生物多样性。同时,筛选出3份高EGCG含量(≥10%)的特异茶树资源,为高EGCG茶树品种选育提供了重要材料。     

茶树新品系“1005”儿茶素含量与结构基因关联分析

以茶树新品系“1005”新梢3个不同发育时期的芽头、二叶、四叶为试验材料,用高效液相色谱检测儿茶素含量,高通量测序技术分析结构基因表达差异,应用数据统计分析其儿茶素含量与结构基因表达的关联性.结果表明,茶树新品系“1005”的儿茶素总量与CHI、F3'5'H、ANR、aroG等结构基因的关联系数分别为0.339 74、0.716 47、0.467 89、-0.032 61;简单儿茶素含量与CHI、F3 '5'H、ANR、aroG等结构基因的关联系数分别为0.568 99、0.498 87、0.704 26、0.491 51;酯型儿茶素含量与CHI、F3'5 'H、ANR、aroG等结构基因的关联系数分别为0.160 66、0.598 08、0.250 61、-0.217 38.试验为研究茶树儿茶素生物合成过程的关键结构基因提供了理论基础.     

茶树芽叶儿茶素含量与转录因子 MYB、bHLH关联分析

以茶树芽叶为试验材料,用高效液相色谱检测儿茶素含量,用高通量测序技术分析转录因子MYB、 bHLH 表达差异,应用数据统计分析儿茶素含量与转录因子MYB、bHLH 表达的关联性。结果表明院3 个转录因子 MYB 基因comp150334_c1、comp143073_c0、comp130756_c0 与儿茶素总量、酯型儿茶素含量的关联系数均在0.80 以 上;3 个转录因子MYB 基因comp166178_c0、comp159173_c0、comp109329_c0,3 个转录因子bHLH 基因 comp159534_c2、comp159225_c0、comp142932_c0 与儿茶素总量、酯型儿茶素含量的关联系数均在0.75 以上,这将为 研究茶树儿茶素生物合成过程的关键转录因子基因提供理论依据。     

茶树不同儿茶素含量愈伤组织的蛋白差异分析

【目的】建立适合于茶树愈伤组织的蛋白质双向电泳技术,并比较不同愈伤组织间的蛋白表达差异,为深入开展茶树儿茶素生物合成的蛋白质组学研究奠定基础。【方法】在优化蛋白质提取技术的基础上,分别对"云茎63X"(儿茶素含量低)、"云茎63Y"(儿茶素含量较高)和光照诱导的"云茎63Y"(儿茶素含量最高)三类愈伤组织的蛋白质进行双向电泳分析,并对表达差异的蛋白质点进行质谱(LTQ-ESI-MS/MS)分析。【结果】通过对蛋白得率和SDS-PAGE单向电泳图谱的比较,发现TCA-丙酮法最适合茶树愈伤组织中蛋白质的提取;从三类愈伤组织的蛋白双向电泳图谱中,分析检测出14个差异较大的蛋白质;经质谱分析和数据库检索,14个蛋白中包括有谷胱甘肽S-转移酶、WD40蛋白、咖啡酸-O-转甲基酶、S-腺苷甲硫氨酸合成酶、果胶甲酯酶等。【结论】这些蛋白可能参与了苯丙烷及类黄酮途径的合成及其调控、乙烯合成、细胞壁代谢、糖酵解和信号转导等生理作用。     

云南茶树资源没食子酸和儿茶素的差异性分析(英文)

[目的]探讨云南茶树资源中没食子酸和儿茶素含量的差异。[方法]以国家种质勐海茶树资源圃中的121个云南茶树资源为材料,采用高效液相色谱法(HPLC)测定茶叶中的没食子酸(GA)、儿茶素(C)、表儿茶素(EC)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)、表没食子酸儿茶素(EGC)及表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的含量。[结果]GA含量变幅为0.210%～1.902%,平均0.834%,在茶树中含量较低。C含量变幅为0.069%～8.865%,平均1.916%;EC含量变幅为0.126%～2.865%,平均1.112%;EGC含量变幅为0.00～3.709%,平均0.954%;ECG的含量变幅为0.739%～8.957%,平均4.063%;EGCG含量变幅为0.819%～11.77%,平均5.939%;儿茶素总量含量为6.354%～22.654%,平均14.042%。[结论]资源间儿茶素差异较大,说明云南茶树资源具有丰富的生物多样性。同时,筛选出3份高EGCG含量(≥10%)的特异茶树资源,为高EGCG茶树品种选育提供了重要材料。     

茶树愈伤诱导及不同儿茶素含量细胞系筛选

茶树组织培养是开展茶树次生代谢及调控研究重要的研究平台。在建立茶树愈伤组织培养体系的基础上,开展了茶树含不同儿茶素含量的细胞系筛选方法的研究。结果表明,在H、S和B 3种诱导培养基中,只有B培养基适合于诱导生长迅速、组织疏松、质地均一且具有一定儿茶素合成能力的愈伤组织。从外植体方面考虑,种子诱导出的愈伤组织具有较强的植株再生能力;幼茎和叶片诱导出的愈伤组织,其生长速度快、组织疏松,但再生能力弱。在此基础上,采用目视法和二分法,结合HPLC分析,对B培养基诱导的细胞系“yunjing63Y”进行了筛选,得到含不同儿茶素含量的细胞系“yunjing63Y”和“yunjing63X”。分析结果显示,细胞系“yunjing63Y”和“yunjing63X”的儿茶素组分与鲜叶相似,且二者儿茶素含量（干重）差异较大,前者为7.77 mg·g^-1,后者为0.13 mg·g^-1。     

Research progress on isolation and cloning of functional genes in tea plants

Tea, which has many sanitarian functions, is one of the most popular non-alcoholic soft and healthy beverages in the world. In many countries, as well as in China, tea (Camellia sinensis) is an important cash crop. It has great value as a source of secondary metabolic products. Molecular biology of tea plants has been one of the most active and kinetic research fields of tea science for the last decade. Isolation and cloning of important functional genes of tea plants have a critical significance on elucidating the molecular mechanism of high quality, yield and resistance, as well as genetic manipulating via biotechnological approaches for tea plants. In this paper, we introduced the research progress on the isolation and cloning of functional genes in tea plants. In addition, the brief prospect on the research of functional genes of tea plants in the near future is also give out. __________ Translated from Molecular Plant Breeding, 2006, 4(3S): 16–22 [译自: 分子植物育种]     

Germplasm and breeding research of tea plant based on DNA marker approaches

Tea is the most popular non-alcoholic and healthy beverage worldwide. Tea production contributes greatly to the economy and the job opportunities for many countries in Asia and Africa. Meanwhile, the germplasm of tea, with a huge potential for the future of the whole tea industry, is presently one of the most valuable and fundamental materials for tea breeding and tea biotechnology. DNA molecular markers have been proven to be robust and valuable approaches in the studies of genetic diversity and variation, molecular identification, molecular phylogenetics, genetic stability and integrity of tea germplasm, and the genetic linkage map for breeding of tea. In this paper, a brief prospect on the molecular marker studies of tea has been summarized. The purpose is to provide an effective way for undertaking amassive tea germplasmappraisal and evaluation, to develop new applicable and cheap DNA markers, to establish a high density genetic linkage map and analyze the agronomically important QTLs, and finally, to facilitate the marker assisted early selection and shorten breeding procedures in tea. These authors contributed equally to this work.     

干旱-低温交叉适应性对茶树抗寒性的影响

为了解干旱-低温交叉适应对茶树抗寒性的影响,以一年生无性系品种舒茶早茶苗为试验材料,用20%聚乙二醇6000(PEG-6000)模拟干旱预处理,测定低温胁迫过程中茶树半致死温度、丙二醛、抗氧化酶活性、渗透物质和内源激素等部分生理指标的变化。结果表明,经过PEG-6000预处理的茶苗半致死温度LT50明显下降。低温条件下,茶苗叶片丙二醛、抗氧化酶活性、渗透物质和激素含量整体呈上升趋势。低温胁迫第7天时,与对照相比,PEG-6000预处理的茶苗叶片丙二醛含量下降44.6%,SOD、POD酶活分别升高78%和25%,可溶性蛋白、溶性糖含量分别增加44.6%及20.0%;内源激素ABA与SA含量分别提高97.7%和122.0%。干旱可诱导茶树对低温胁迫的交叉适应性,这种交叉适应性与茶树的抗氧化酶活性、渗透物质和内源激素的调节能力有关。     

茶愈伤组织实时定量PCR分析中内参基因的选取

为了选取合适的内参基因来分析培养基中前体物诱导及对照的茶愈伤组织中茶氨酸代谢相关基因的差异表达,利用GenBank上登录的茶树基因序列以及通过构建文库测序所得的基因（具有完整的阅读框）共7个持家基因设计引物。在分析这些引物的扩增效率和特异性后,测定了它们在茶愈伤组织生长过程中（对照和愈伤培养基中添加含氮外源物的情况下）的表达水平。利用geNorm 和NormFinder软件分析了这些持家基因的稳定性,确定在该条件下合适的内参基因为β-actin和GAPDH。     

茶树类黄酮合成与积累的组织器官特异性研究

类黄酮是茶树的主要次生代谢产物,对决定茶叶品质及其健康功效具有重要作用。利用LC-TOF/MS、qRT-PCR等技术研究了茶树类黄酮合成积累的组织器官特异性。结果显示,茶树不同器官中,鲜叶中的酚酸、儿茶素和黄酮醇化合物种类较多且含量较高,原花青素含量低但种类多,而在根中则相反。从基因表达差异上看,从鲜叶到茎到根,4CL、CHI、F3H and F3’5’H表达依次降低。酶学实验显示,从鲜叶到茎到根,DFR/LAR和ANR酶活在鲜叶和茎中无明显差异,而在根中只检测到微弱的DFR/LAR活性。在不同发育时期鲜叶中,儿茶素含量在一叶中最高,芽其次;黄酮醇的含量在一叶和二叶中较高;花青素的含量随着鲜叶发育依次减少。qRT-PCR结果显示,PAL、C4H、CHS、F3’H、 F3''5''H、DFR、LAR和ANR基因的表达与不同发育时期鲜叶中儿茶素和黄酮醇积累规律一致。酶学实验显示,随着鲜叶的发育,DFR/LAR的活性依次降低,ANR的活性呈增高趋势,它们的变化与酯型C和EGC含量趋势相吻合。     

安徽地方良种皖茶6号和皖茶7号的生理特性分析

皖茶6号、皖茶7号是源于皖南山区腹地石台县的地方良种。以皖茶6号、皖茶7号及对照品种舒茶早为材料,开展了不同茶树品种光合特性、儿茶素含量及相关基因表达量等指标的比较分析。光合色素含量结果显示,皖茶6号和皖茶7号的总叶绿素含量、叶绿素a含量及叶绿素b含量均略低于对照品种‘舒茶早’。田间光合速率分析结果显示,皖茶7号光合速率最高,舒茶早次之,且均显著高于皖茶6号。HPLC分析表明,皖茶6号和皖茶7号叶片中儿茶素总量、EC、EGCG及ECG含量均显著高于对照品种舒茶早。在皖茶6号和皖茶7号叶片中,2条类黄酮合成相关P450基因（C4H2和F3’5’H1）相对表达量显著高于对照品种,这可能与皖茶6号和皖茶7号中儿茶素含量显著提高有关。     

陕南无性系茶树良种的引进及筛选研究

【目的】筛选适合陕南茶区种植的无性系茶树良种,确定主推品种,加快陕南茶园无性系良种化进程,促进陕西茶产业的发展。【方法】以引进的17个国内适制绿茶的茶树无性系良种为材料,根据引种苗成活率和抗病虫害情况进行初选。之后以福鼎大白为对照,比较初选品种的物候期、产量和制茶品质等指标,筛选出综合性状表现较好的品种。【结果】初选出龙井长叶、舒茶早、乌牛早、平阳特早、翠峰、福鼎大白(对照)等6个表现较好的茶树品种。物候期上,平阳特早发芽最早,其次是龙井长叶和翠峰,其发芽期比福鼎大白早10～15 d。从发芽密度、百芽质量、春梢长度和着叶数量、扦插成苗率、出圃率和移栽成活率等指标综合来看,龙井长叶、平阳特早和翠峰3个品种表现较好。在产量上,翠峰、龙井长叶和平阳特早均高于其余品种,经方差分析其产量极显著高于对照福鼎大白。龙井长叶、平阳特早、翠峰的制茶品质较优,以香气显花香为特点。【结论】龙井长叶、平阳特早和翠峰的综合性状表现明显优于其他品种,可作为陕南茶区当前主推的无性系茶树良种。     

茶树根原花青素提取工艺及检测方法的优化

茶树(Camellia sinensis(L.)O.Kuntze)中含有丰富的多酚类化合物,统称为茶多酚,包括黄烷醇、黄酮、黄酮醇、花青素、原花青素和酚酸类等。对茶树根中原花青素的提取工艺进行优化,筛选出最佳的提取工艺条件:丙酮浓度80%、提取时间35 min、提取温度50℃、加酸量0.25%。对多酚的检测方法—香草醛法、对二甲氨基肉桂醛(DMACA)法进行了系统性的优化,结果表明香草醛法最优条件:0~25℃、反应时间15 min、硫酸体积分数为50%、香草醛浓度为10 g·L-1。对二甲氨基肉桂醛(DMACA)法最优条件:0℃、5 min内、盐酸浓度1.2 mol·L-1、DMACA浓度2 g·L-1。