肾素-血管紧张素系统2条通路在油酸致大鼠BRL-3A细胞非酒精性脂肪肝中的作用

[目的]通过建立油酸诱导的大鼠肝脏间质BRL-3A细胞非酒精性脂肪肝(NAFLD)损伤模型,探讨BRL-3A细胞中RAS的ACE/AngⅡ/AT1R和ACE2/Ang-1-7/Mas这2条通路相互负向调节与NAFLD细胞损伤的关系。[方法]采用不同浓度油酸(0.025、0.05、0.1和0.2 mmol·L~(-1))处理BRL-3A细胞24 h,通过检测细胞活力、细胞内甘油三酯(TG)含量、丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性以及油红染色确立NAFLD细胞模型条件,然后选取低、中、高3个浓度(0.025、0.1和0.2 mmol·L~(-1))油酸作用于细胞24 h,用ELISA法检测细胞上清液中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血管紧张素1-7(Ang1-7)水平;Western blot分析细胞内血管紧张素转化酶(ACE)、血管紧张素转化酶2(ACE2)、血管紧张素Ⅱ受体1(AT1R)、Mas受体(MasR)蛋白水平;斯皮尔曼相关分析法分析油酸浓度与细胞内ACE、ACE2表达水平的相关性。[结果]1)用0.1 mmol·L~(-1)油酸处理BRL-3A细胞24 h,成功建立BRL-3A细胞NAFLD模型。2)油酸处理24 h后,BRL-3A细胞出现脂滴沉积,在0.025 mmol·L~(-1)油酸(低浓度)组,ACE2、MasR表达水平和Ang1-7水平有升高趋势,AngⅡ水平与AT1R表达水平下降,ACE/ACE2值下降;0.1 mmol·L~(-1)油酸(中浓度)组ACE、AT1R表达水平显著升高,其他RAS成员变化不明显;0.2 mmol·L~(-1)油酸(高浓度)组,ACE2、MasR表达水平和Ang1-7水平下降,AngⅡ水平和ACE、AT1R表达水平及ACE/ACE2值升高。3)斯皮尔曼相关分析显示,油酸浓度、血液相关生化指标(TG含量、AST和ALT活性)和脂滴数及脂滴面积与ACE2表达水平和Ang1-7水平负相关,而与ACE表达水平和AngⅡ水平正相关。[结论]BRL-3A细胞中的2条轴共同参与了油酸致BRL-3A细胞NAFLD损伤的发生和发展过程。低浓度油酸时,ACE2介导的Ang1-7/MasR通路占优势;高浓度油酸处理细胞损伤加重,ACE介导的AngⅡ/AT1R通路占主导地位。ACE2与油酸致细胞炎性损伤的程度呈显著负相关关系。     

蒙药乌兰温都苏-11丸对自发性高血压大鼠Ang-Ⅱ受体AT1R、AT2R蛋白表达的影响

目的:研究乌兰温都苏-11丸对自发性高血压大鼠(SHR)心、肾、血管组织中AT1R、AT2R蛋白表达的影响。方法:SHR大鼠60只和同源相匹配的Wistar Kyoto(WKY)大鼠10只,随机分为模型组、对照组、缬沙坦胶囊组、丹参酮Ⅱ_A硫酸钠注射液组、乌兰温都苏-11丸低、中、高剂量组,每组10只。对照组和模型组给予蒸馏水,缬沙坦胶囊组、蒙药乌兰温都苏-11丸低、中、高剂量组每天同时按相应剂量灌胃药物、丹参酮Ⅱ_A磺酸钠注射液组相应剂量腹腔注射药物。给药治疗4周后,采用蛋白质免疫印迹方法分别检测大鼠心、肾、血管中血管紧张素Ⅱ受体AT1R、AT2R蛋白表达水平。结果:Western blot的检测结果表明乌兰温都苏-11丸干预显著降低SHR大鼠心、肾、血管的血管紧张素Ⅱ受体AT1R蛋白表达水平,同时显著增加血管紧张素Ⅱ受体AT2R蛋白表达水平。结论:乌兰温都苏-11丸治疗能够明显抑制AT1R蛋白表达,并显著激活AT2R蛋白表达。其作用机制可能是可通过拮抗血管紧张素Ⅱ受体AT1R的同时激活血管紧张素Ⅱ受体AT2R调节高血压,对高血压引起的靶器官损伤有一定的防治作用。     

“高原明珠”绿茶对自发性高血压大鼠血压、心肌超微结构及血管紧张素Ⅱ含量的影响

为进一步研究茶与健康的关系,初步探讨了“高原明珠”拼配绿茶对自发性高血压大鼠(SHR)血压、血浆血管紧张素Ⅱ( AngⅡ)含量及其左心室组织超微结构的影响.结果表明:“高原明殊”拼配绿茶能显著降低SHR大鼠的血压和血浆Ang Ⅱ含量,改善左心室的线粒体和肌原纤维的超微结构.“高原明珠”拼配绿茶具有减肥、保护心脏及降血压等生理保健功能.     

应激大鼠血浆与肾上腺组织血管紧张素Ⅱ的水平及ANGmRNA在肾上腺组织中的表达

目的：观察应激大鼠血浆与肾上腺组织血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的水平及血管紧张素原(ANG)mRNA在肾上腺组织中的表达。方法：24只雄性大鼠随机分为3组(急性游泳组，慢性电击组和对照组)，采用放免分析法和原位杂交技术分别检测不同应激情况下大鼠血浆与肾上腺组织AngⅡ的水平及ANGmRNA在肾上腺组织中的表达。结果：急性游泳组和慢性电击组血浆与肾上腺组织AngⅡ含量及ANGmRNA在肾上腺组织中表达均显著高于对照组(P＜0．05，P＜0．01)。结论：应激时肾上腺局部肾素—血管紧张素系统(RAS)被显著激活，进一步支持局部RAS参与了应激反应的观点。     

血管紧张素转换酶2(ACE2)基因在家猫不同组织中的表达差异分析

【目的】分析血管紧张素转换酶2 (ACE2)基因在家猫不同组织中的相对表达量及特定组织中的蛋白定位,为后续以ACE2基因为受体的疫病防控提供理论基础。【方法】采用qRT-PCR技术检测ACE2基因在家猫8个组织(心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胰腺、小肠和肠系膜淋巴结)中的mRNA相对表达水平,并利用免疫组织化学法检测家猫肾脏、胰腺和小肠中ACE2蛋白的组织定位。【结果】ACE2基因在家猫肾脏、胰腺和小肠组织的表达量极显著高于肺脏组织(P<0.01),在心脏、脾脏和肠系膜淋巴结组织的表达量极显著低于肺脏组织(P<0.01);不同性别家猫的ACE2表达量存在一定差异,但不显著;ACE2蛋白在小肠组织中的表达量最高,其次是肾脏,在胰腺的表达量最低。【结论】家猫ACE2基因在各组织中广泛分布且存在一定的表达差异。     

“高原明珠”绿茶对自发性高血压大鼠血压、心肌超微结构及血管紧张素Ⅱ含量的影响(英文)

[目的]该研究旨在进一步研究茶与健康的关系。[方法]初步探讨了"高原明珠"拼配绿茶对自发性高血压大鼠(SHR)的血压、血浆血管紧张素(Ang)含量及其左心室组织超微结构的影响。[结果]"高原明珠"拼配绿茶可显著降低 SHR大鼠的血压和血浆Ang II含量,并改善左心室的线粒体和肌原纤维的超微结构。[结论]"高原明珠"拼配绿茶具有减肥、保护心脏及降血压等生理保健功能。     

红肉火龙果果原汁对肾性高血压大鼠的降压作用研究

目的 研究红肉火龙果果原汁(RPJ)对肾性高血压大鼠(RHR)的降压作用。方法 采用两肾一夹(2K1C)针灸针缩窄法制备大鼠肾性高血压模型,将造模成功的大鼠随机分为假手术组、模型组、卡托普利组和RPJ高、中、低剂量组,连续灌胃8周末,测定各组大鼠收缩压(SBP),记录左肾重量与右肾重量比值(LK/RK)和左心室重量指数(LVMI);光学显微镜观察心肌组织及主动脉弓病理学变化;ELISA法测定大鼠血浆、心肌及肾脏血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、醛固酮(Ald)及内皮素-1(ET-1)含量。结果 与模型组相比,RPJ高、中剂量组大鼠血压均明显降低(P＜0.05),LK/RK比值明显升高(P＜0.05),其中高剂量组能够明显降低LVMI值(P＜0.05);RPJ高、中剂量组可以使血浆、心肌及肾脏中的AngⅡ、Ald和ET-1含量不同程度减少(P＜0.01或P＜0.05),RPJ低剂量组血浆AngⅡ含量明显下降(P＜0.05)。结论 RPJ对肾性高血压有较好的治疗作用,值得进一步深入研究。     

牛磺酸对预防大鼠发生高血压的影响

通过检测补充不同水平牛磺酸和β-丙氨酸(牛磺酸转运抑制剂)大鼠血液中血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,ATⅡ)含量和血管紧张素转换酶(angiotensinconvertingenzyme,ACE)活性及一氧化氮含量,探讨牛磺酸对高血压发生的预防作用。试验结果证明补充牛磺酸可使大鼠血中ATⅡ含量、ACE活性降低(P<0.05)和提高了NO的含量(P<0.01)。     

高精料日粮诱导奶牛乳腺应激和凋亡中血管紧张素转化酶2的作用

[目的]本试验在已有研究血管紧张素系统(RAS)在乳腺中保护作用的基础上,对该家族的主要成员血管紧张素转换酶2(ACE2)在对抗高精料所致奶牛乳腺氧化应激、炎性损伤及细胞凋亡中的作用及机制进行了探讨。[方法]6头健康的泌乳期荷斯坦奶牛,随机分为对照组[m(精)∶m(粗)=4∶6]和高精料组[m(精)∶m(粗)=6∶4],采用单栏、定时、定量饲喂。饲喂20周后,活体取乳腺组织,进行如下试验:1)测定乳腺组织中氧化应激指标·OH水平及TNOS、SOD活性;2)ELISA法测定炎性指标TNFα、IL-1β和凋亡指标Caspase-3、Bax、Bcl-2;3)Western blot分析乳腺组织中ACE2和ACE蛋白的表达;ELISA法测定AngⅡ和Ang1-7的含量。[结果]高精料长期饲喂,奶牛乳腺组织中·OH自由基水平显著升高(P0.05),SOD活性降低,TNOS活性降低显著(P0.05);炎症因子TNF-α和IL-1β水平均显著升高(P0.05);促凋亡蛋白Caspase-3和Bax水平显著升高(P0.05),抑制凋亡蛋白Bcl-2水平显著降低(P0.05);乳腺组织中AngⅡ浓度(P0.05)和ACE蛋白表达水平极显著升高(P0.01),ACE2蛋白表达水平降低(P0.05),但Ang1-7浓度显著降低(P0.05)。[结论]长期饲喂高精料可导致奶牛乳腺自由基激活、炎症因子释放、细胞凋亡,乳腺局部损伤。乳腺局部组织中RAS处于激活状态,2条轴互相拮抗,表现为AngⅡ水平升高,ACE2水平降低。     

乳酪蛋白源抗高血压活性肽的制备及其生理活性

本文研究乳酪蛋白源抗高血压活性肽(Antihypertensive peptides of casein)的制备及其在体内与体外对高血压的影响.乳源酪蛋白酶解产物经过大孔树脂DA201C脱盐处理,并采用RP-HPLC的分离纯化,检测了脱盐酶解产物与活性肽产物对血管紧张素转化酶(ACE)的抑制活性,并用活性肽产品与酶解物灌胃SHR,观察SHR血压的影响.结果显示,活性肽(02mg·mL-1)与酶解产物(1 mg·mL-1)对ACE的活性有很强的抑制作用,抑制率分别为75.5%、80.1%;活性肽(5 mg·kg-1)与酶解产物(500mg·kg-1)均对自发性高血压大鼠(SHR)有较显著的降血压作用.     

雪莲通脉丸对冠心病气虚血瘀证小鼠血管内皮细胞功能相关指标ET-1、NO、ACE的影响

目的 观察雪莲通脉丸对冠心病气虚血瘀证小鼠内皮素-1（ET-1）、一氧化氮（NO）和血管紧张素转换酶（ACE）的调节作用。方法 建立冠心病气虚血瘀证小鼠模型,随机分为空白对照组、模型对照组、地奥心血康组和雪莲通脉丸组。给药4周后取小鼠血清,ELISA试剂盒测定ET-1、NO和ACE浓度。结果 与模型组比较,雪莲通脉丸组NO浓度显著升高,差异具有统计学意义（P<0.01）;ET-1浓度降低,差异具有统计学意义（P<0.05）;ACE浓度显著降低,差异具有统计学意义（P<0.01）。与地奥心血康组比较,雪莲通脉丸组NO浓度显著升高,ACE浓度显著降低,差异具有统计学意义（P<0.01）。结论 冠心病气虚血瘀证的发生可能与血管内皮细胞的功能指标具有相关性。其中,冠心病气虚血瘀证可能与血清ET-1、ACE浓度呈正相关、与血清NO浓度呈负相关。雪莲通脉丸对冠心病气虚血瘀证小鼠血管内皮细胞的功能指标具有调节作用,其机制可能与升高血清NO浓度、降低ET-1、ACE浓度有关,且与地奥心血康组比较在改善血清NO、ACE方面具有一定优势。     

发酵牛肉火腿中ACE抑制肽的稳定性研究

研究了发酵牛肉火腿中提取的ACE抑制肽的热处理、室温储存和模拟胃肠道消化稳定性。结果表明,发酵牛肉火腿中提取的ACE抑制肽,在50、72、85和100℃下处理5 min和100℃下5、10、20和40 min处理后,处理组和对照组ACE抑制活性无显著差异。在室温下储存2 d,处理组和对照组ACE抑制活性无显著差异(P0.05),但储存至3 d,它的ACE抑制活性显著低于对照组(P0.05),其后储藏时间对提取物的ACE抑制活性无显著影响。ACE抑制肽经体外模拟胃肠道消化后,其活性与对照组无显著差异。     

猫血管紧张素转换酶2的三维结构模拟与真核表达

家猫能自然及人工感染SARS病毒,本研究旨在探讨家猫ACE2潜在的SARS病毒受体功能。以人血管紧张素转换酶2(ACE2)序列为模板,用同源模建法模拟了家猫ACE2的三维空间结构,发现家猫ACE2与人ACE2结构十分相似,其结合严重急性呼吸综合症(SARS)病毒囊膜纤突(S)蛋白的关键氨基酸的同源性很高(15/18)。将家猫血管紧张素转换酶2基因N端1-367 aa对应的基因片段及其跨膜区克隆到真核表达载体pcDNA3.1/myc-his( )B中,构建了表达质粒pcDNA-mA367,转染HeLa细胞,间接免疫荧光检测表明fACE2的N端片段已在细胞膜上成功表达。     

挤压协同酶法制备高粱蛋白ACE抑制肽及其稳定性

【目的】 利用挤压协同酶法制备高粱蛋白ACE抑制肽,为提高高粱蛋白资源的利用效率提供参考。【方法】 以高粱粉为原料,先经挤压处理,再经淀粉酶酶解,最后通过碱性蛋白酶酶解,获得高粱蛋白ACE抑制肽。研究物料水分、挤压温度和淀粉酶活力对高粱蛋白酶解液的水解度和ACE抑制活性的影响,并探讨高粱蛋白ACE抑制肽的稳定性。【结果】 随着物料水分含量和挤压温度的增加,挤压过程中单位机械能耗（SME）逐渐降低。在挤压环境下,高粱中淀粉和蛋白质的相互结合变得松散,淀粉-蛋白质包埋体系被破坏;同时高粱中球形蛋白质体被打破,提高所获得高粱蛋白的酶敏感性,在碱性蛋白酶的作用下生成更多具有抑制活性的短肽。挤压过程中物料水分含量和挤压温度以及α-淀粉酶活力对高粱蛋白酶解液的水解度和ACE抑制率有显著影响。随着物料水分的增加,蛋白质分子的聚合程度下降,使得高粱蛋白酶解液的水解度和ACE抑制率随之增加,当物料水分增加至19%后,挤压过程对蛋白质周围的淀粉分子的破坏作用降低,水解度和ACE抑制率的上升趋势趋于平缓;当挤压温度从120℃增加至180℃时,高粱内部的蛋白质-淀粉包埋体系破坏加剧,同时蛋白质的空间结构在高温作用下的变性程度加大,高粱蛋白酶解液的水解度由7.42%增加至11.06%,同时高粱蛋白ACE抑制肽的抑制率也由46.57%增加至53.41%;挤压后高粱粉经α-淀粉酶处理,进一步去除包裹在蛋白质周围的淀粉,发现随着α-淀粉酶活力的增加,高粱内部的蛋白质-淀粉包埋体系破坏程度加剧,为制备高粱蛋白ACE抑制肽提供更多原料,导致高粱蛋白酶解液的水解度和ACE抑制率随之增加,当α-淀粉酶活力增加至2.0 U·g ^-1时,淀粉酶与淀粉结合达到饱和状态,水解度和ACE抑制率趋于稳定。高粱蛋白ACE抑制肽经温度和酸碱处理后,ACE抑制活性在68.1%—71.31%,保持了良好的抑制活性;高粱蛋白ACE抑制肽在体外经胃肠道酶系消化酶解后,ACE抑制活性均高于73%,依然保持了较强的ACE抑制活性,说明挤压协同酶法制备的高粱蛋白ACE抑制肽具有长期保存有效性,同时能够在胃肠道消化后保持生物活性。 【结论】 采用挤压协同酶法可以显著提高高粱蛋白酶解液的水解度和ACE抑制肽的活性,同时制备的高粱蛋白ACE抑制肽具有良好的稳定性,为拓宽高粱的利用和制备功能性食品配料提供了一条新途径。     

苏钟猪ACE2基因克隆及其遗传进化分析

为了克隆苏钟猪的血管紧张素转化酶2(ACE2)基因,根据GenBank发表的ACE2基因序列,设计合成1对引物,从苏钟猪心脏提取总RNA,对ACE2基因进行RT-PCR扩增并测序,然后利用DNAstar软件对序列进行比对分析。产物经琼脂糖电泳分析,呈现1条约641 bp的条带,回收纯化后对扩增的猪心肌ACE2 mRNA进行了测序和比较分析。扩增的猪ACE2核苷酸序列与GenBank中已登录的2只猪ACE2核苷酸序列同源性分别为98.6%和99.2%。同时,利用DNAstar将其与人、牛、大鼠和小鼠等物种相应序列进行比较,结果表明苏钟猪ACE2基因与牛同源性最高,达到87.5%;与人的同源性为82.5%,与斑马鱼的同源性最低,仅为52.3%。对由苏钟猪ACE2基因核苷酸序列推导的氨基酸序列进行同源性比较也得到了同样的结果。     

醋蛋中ACE抑制肽的分离及其活性保护的研究

ACE抑制肽在体内稳定性的研究对于其功能活性的保护具有重要意义。采用凝胶色谱层析法对经酶解后的醋蛋液进行分离纯化,收集具有较高抑制活性的多肽组分。再将其与卵磷脂结合形成复合物,目的是利用卵磷脂的乳化性保护多肽活性。利用FT-IR、XRD对复合物的结合效果进行验证分析,结果发现卵磷脂与活性肽结合后,活性肽的ACE抑制活性在体外模拟前后相较于未经结合处理得到明显的升高。红外光谱研究发现复合物中活性肽与卵磷脂发生相互作用。通过XRD进一步验证并推断是活性多肽被卵磷脂吸收后以无定形或分子态的形式存在。因此,可认为经过卵磷脂复合的多肽可以很好保留ACE抑制活性且可以降低其被胃肠道酶降解的风险。     

CO2超临界和乙醇提取蜂胶对大鼠降血脂效果

试验用健康雄性SD大鼠,给予高脂颗粒饲料喂饲后第9 d,大鼠眶静脉取血,测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和高密度脂蛋白(HDL-C)值。高脂血症动物模型成功后,随机分为对照组1(给予聚乙二醇400)、超临界蜂胶高剂量组(600 mg/kg BW)、超临界蜂胶中剂量组(300 mg/kg BW)、超临界蜂胶低剂量组(150 mg/kg BW);对照组2(给予食用油)、乙醇提取蜂胶高剂量组(600 mg/kg BW)、乙醇提取蜂胶中剂量组(300 mg/kg BW)、乙醇提取蜂胶低剂量组(150 mg/kg BW)8个组。分组后连续4周蜂胶灌胃,同时各组大鼠继续给予高脂颗粒饲料喂饲,之后各组大鼠取血测定TC、TG和HDL-C。结果表明:喂蜂胶28 d后,只有超临界蜂胶高剂量组(600 mg/kg BW)的TG值和乙醇提取蜂胶高剂量组(600 mg/kg BW)的TC值分别与相对照组差异显著,其它指标都差异不显著。     

碱性蛋白酶水解大豆多肽及抑制ACE效果的研究

[目的]为了进行碱性蛋白酶水解大豆多肽及抑制ACE效果的研究。[方法]利用胰蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶和碱性蛋白酶分别水解大豆蛋白,制备具有ACE抑制活性的大豆多肽,通过正交优化试验确定碱性蛋白酶的最佳水解条件,考察底物浓度、反应时间、反应温度与大豆蛋白酶解多肽对ACE抑制活性的影响,并将超滤法和聚丙烯酰胺凝胺电泳技术相结合,考察大豆蛋白酶水解物的分子量分布。[结果]结果表明,碱性蛋白酶的最佳水解条件为底物浓度5%,加酶量4%,水解时间2h。[结论]该研究为更好地利用大豆蛋白展示了良好的应用前景。     

高血压心力衰竭大鼠动物模型的研制

目的 研制高血压引起的心衰大鼠动物模型。方法 将18只Dahl盐敏感性大鼠分为正常组和模型组并分别使用0.3% NaCl低盐饲料和8% NaCl高盐饲料喂养大鼠20周,观察大鼠行为及体征,检测大鼠血压、血清氨基末端脑钠肽前体（N-terminal Pro-brain natriuretic peptide,NT-proBNP）含量,彩色超声多普勒检测大鼠左室射血分数（left ventricular ejection fraction,LVEF）和左室短轴缩短率（left ventricular fractional shortening,LVFS）及电镜观察HE染色心肌细胞以及肾脏组织等。结果 正常组大鼠血压一直维持在140 mmHg左右,而模型组大鼠从进食高盐饲料后血压保持持续上升,最高可达250 mmHg;与正常组比较,模型组的NT-proBNP、LVEF、LVFS在统计学上有显著差异（P<0.01）。结论 本研究制作的动物模型可较好地模拟正常大鼠继发高血压病进而发展成高血压心衰大鼠模型的过程,可用于高血压心力衰竭疾病的研究。     

大孔树脂吸附分离米糠中ACE抑制肽工艺

采用大孔吸附树脂对米糠ACE抑制肽进行分离,比较6种大孔吸附树脂对米糠蛋白中肽的静态吸附和解吸效果,从中筛选出适合该米糠蛋白中肽分离纯化的树脂。结果表明,筛选出HPD-400型树脂最适合米糠蛋白中肽的混合物的纯化。通过对影响树脂吸附解吸的各种因素进行系统地研究,确定工艺参数。HPD-400树脂对米糠多肽的静态吸附4h左右基本达到吸附平衡,选择吸附温度45℃较为适宜;吸附时间达到2h后HPD-400型树脂对米糠蛋白肽的吸附量已达到饱和;在pH4．0时吸附效果好,吸附率达85．4％。解吸液为pH8．0的70％乙醇溶液,洗脱时间确定为30min。通过动态吸附分离实验得出,该树脂可以达到分离纯化米糠ACE抑制肽的目的。