丝状霉形体山羊亚种巢式PCR检测方法的建立

根据已发表的丝状霉形体簇各成员核苷酸序列，设计合成了2对引物McF、McR和MmcF、MmcR，建立了可以鉴别丝状霉形体山羊亚种（Mycoplasma mycoides subsp．capri，Mmc）的巢式PCR方法。特异性和敏感性试验结果显示，该方法只能对Mmc扩增出195bp的片段，而对其他病原菌不能扩增出任何条带，它最低能够检测出10Pg的Mmc DNA，说明该方法具有良好的特异性和很高的敏感性。田间试验结果显示，对4株霉形体分离株及其病料均可扩增出Mmc特异性片段，表明，该巢式PCR方法可用于Mmc快速鉴定和流行病学调查。     

丝状支原体引起山羊传染性胸膜肺炎的临床诊断

1998年 8月 ,我省罗甸县和习水县几个养羊专业户的羊群先后发生了以咳嗽 ,体温升高 ,呼吸困难为主要特征的传染病 ,经临床观察 ,尸体剖解 ,并采取病料进行病原分离鉴定 ,确诊为丝状支原体引起的山羊传染性胸膜肺炎。现将诊断情况报告如下 :1　流行情况丝状支原体引起的山羊传染性胸膜肺炎为接触感染性传染病 ,潜伏期 7～ 4 0天 ,在急性暴发期病情严重 ,病程一般 7～30天 ,死亡率可高达 70 %～ 90 % ,暴发期后 ,病情转缓 ,病程相应变长 ,有的可达 2～ 4个月 ,死亡率降至 10 %～ 30 %。2　临床症状及剖检变化2 1　临床症状　患羊潜伏期无明显…     

丝状霉形体丝状亚种SC型脂蛋白LppQ基因的序列分析

根据基因库发表的丝状霉形体丝状亚种SC型(MmmSC)脂蛋白LppQ基因序列设计引物，采用PCR对国内MmmSC分离株HVRI-X株的脂蛋白LppQ基因进行扩增，将扩增产物与pMDl8-T载体连接并测序。核苷酸序列比较结果显示，HVRI-X株的LppQ基因序列与基因库发表的核苷酸序列同源性为99．8％；由其推导的氨基酸序列同源性为99．3％。     

羊传染性胸膜肺炎的诊断方法与防治策略

动物病害是畜禽养殖业重点关注的问题。动物病害种类繁多,逐渐呈现出多元化的趋势,影响着养殖场的经济收入。本地区的畜禽养殖业中,羊养殖的占比很大,羊的养殖数量与密度每年不断增长。然而,羊传染病危害了羊养殖业的发展,发病率也越来越高。本文以羊传染性胸膜肺炎的诊断方法与防治策略为研究对象,旨在为畜禽养殖业提供参考。     

山羊传染性胸膜肺炎的实验室诊断

为明确贵州省开阳县1例疑似山羊传染性胸膜肺炎(CCPP)病原种类,实验通过病原分离培养、形态学观察、生化试验和PCR方法对病原进行了分离与鉴定。结果显示,所分离病原具有支原体的生长特性,菌落形态与支原体相似;支原体分离株与Mo模式株生化试验结果相同,与Mmc模式株存在差异;PCR试验进一步确定分离株为Mo模式株。试验结果表明,本次山羊传染性胸膜肺炎疫情应为绵羊肺炎支原体感染所致。     

羊传染性胸膜肺炎诊断与治疗

羊传染性胸膜肺炎是由肺炎支原体感染引起的一种急慢性呼吸道疾病,俗称烂肺病。在新疫区和老疫区,该种疾病的流行发生存在很大差异。新疫区常由于引种不当导致,引进的羊群中存在隐性带菌羊,没有被及时发现,到达养殖场后没有隔离观察便立即混群养殖,使疫病在羊群中快速传播蔓延。老疫区由于慢性患病羊或隐性带菌羊的存在,使疫病反复感染,反复传播。     

山羊传染性胸膜肺炎

山羊传染性胸膜肺炎又称烂肺病,是以丝状霉形体山羊亚种为病原体的引起的山羊的一种接触性传染病,以纤维素性肺炎和胸膜肺炎为特征。     

山羊传染性胸膜肺炎的诊断及防治

1995年3～4月，我县大庙口、紫溪、水岭等乡镇的山羊突然发生一种发病急、传播快、死亡率高，以高温、咳嗽、流浆液性鼻液为主要特征的急性传染病．仅1个多月的时间发病1132只，治愈1029只．死亡73只．经病理解剖和实验室诊断为山羊急性传国性胸膜肺炎．1流行病学调查1.1发病情况我县以前极少发生山羊传染病．1995年3月8日大庙口镇早采田村4组村民唐XX家的山羊首先发病，到1月15日已有2镇1乡6村39户的1132只山羊发病，发病羊占39户中存栏羊的74．7％；死亡73只，占发病于的6．45％．本病的发生不分品种、性别，但以3岁以下的山羊易感．1132…     

山羊传染性胸膜肺炎的诊断与防治

山羊传染性胸膜肺炎的诊断与防治李桂平衡江鸿（承德农业学校畜牧兽医科，河北０６７４１１）近几年来，围场县发生了一种山羊“烂肺病”。主要以高热、咳喘、肺和胸膜发生浸润性炎症为特征。有的乡镇死亡率达４０％。１发病情况与临床症状自１９９２年春至１９９４年底，...     

丝状支原体丝状亚种SC型脂蛋白Q的N末端定点突变及表达载体的构建

根据已发表的丝状支原体丝状亚种SC型（MmmSC）LppQ基因序列设计引物，从MmmSC HVRIx株中扩增出了LppQN末端基因，并将其分别克隆到pUC18和pUC19上，利用一步重叠延伸PCR突变方法将其66位的TGA突变为TGG，经克隆与序列测定证实突变成功后，将已突变的LppQN末端基因插入原核表达载体pET32a的多克隆位点，成功地构建了LppQN末端基因原核表达载体pET32a-LppQ，为其下一步体外表达奠定了基础。     

丝状支原体山羊亚种最佳培养基的筛选

在不同条件下对丝状支原体山羊亚种进行培养,通过PPLO精氨酸培养基、牛心汤培养基、MEM-KM2培养基以及不同种类动物血清和同一动物不同浓度血清,从生长滴度、生长速度、培养基来源、造价各个方面的比较试验,结果显示,加100 mL/L马血清的MEM-KM2培养基更适合于丝状支原体山羊亚种的培养,它的生长滴度可达109,所需时间只为5 d,并且配置方便,价格合理。这一结果为丝状支原体山羊亚种抗原的大批量生产奠定了良好的基础。     

Differential clustering of Mycoplasma mycoides subsp. mycoides SC strains by PCR-REA of the bgl locus

In order to develop a specific tool differentiating the African field strains of Mycoplasma mycoides subsp. mycoides SC from other potentially less virulent strains, including the vaccine strains, we have developed a PCR followed by a restriction enzyme analysis (PCR–REA). This approach also differentiates the African field strains from the Australian strains and the type strain PG1. The genomic marker detected by the PCR–REA is based on a single nucleotide change in the bgl gene that codes for 6-phospho-β-glucosidase (Bgl), an enzyme that is involved in sugar metabolism.     

基于丝状支原体丝状亚种P35反应原性的验证及其间接ELISA方法的建立

为建立检测丝状支原体丝状亚种(Mmm)的间接ELISA方法,本研究利用生物信息学软件对Mmm的全基因组序列进行了分析,选定大小为540bp的0584基因,该基因是编码分子量为35ku的脂蛋白,并对其免疫反应原性进行研究。利用原核表达系统获得了0584基因的重组蛋白rP35,以牛传染性胸膜肺炎(CBPP)阳性血清为一抗进行western blot分析,试验结果为阴性,但Dot-blot试验结果为阳性,证明该蛋白可能是Mmm特有的一种构象依赖性免疫相关蛋白且具有反应原性。以rP35蛋白为包被抗原,通过反应条件优化初步建立了检测CBPP血清抗体的间接ELISA方法,特异性为88.0%,敏感性为89.8%,批内和批间变异系数均小于10%,与商品化试剂盒符合率为84.8%。本研究为研制CBPP血清检测试剂盒提供了一种候选蛋白。     

丝状霉形体丝状亚种SC型脂蛋白LppQ N末端基因克隆与序列分析

脂蛋白LPPQ是丝状霉形体丝状亚种SC型(MmmSC)非洲株、欧洲株和疫苗株所特有的。LPPQ N末端域具有良好的免疫原性，在牛体内可诱导产生强大、特异、早期、持续的免疫反应。本研究根据已发表的LPPQ基因序列设计引物，用Pyrobest^TM高保真DNA聚合酶从MmmSC HVRI X株中扩增出了LPPQ N末端基因序列，并进行了克隆与序列测定。核苷酸序列比较结果显示，HVRI X株的LPPQ N末端基因序列与国外发表的序列同源性为99．7％，由其推导的氨基酸序列同源性为99，1％，为脂蛋白LPPQ N末端基因体外表达奠定了基础。     

丝状霉形体山羊亚种血清抗体间接ELISA检测方法的建立

利用丝状霉形体山羊亚种标准株PG3制备抗原,经纯化后作为包被抗原建立了间接ELISA方法,用于检测丝状霉形体山羊亚种血清抗体。经方阵滴定确定最佳抗原包被浓度为1.09μg/mL,血清样品最佳稀释度为1∶64,兔抗羊IgG辣根过氧化物酶结合物的最佳稀释度为1∶40 000,抗原抗体最佳结合时间为1 h。判定标准为样品D490 nm值与标准阴性血清D490 nm值之比（P/N）≥3为阳性,≤2.5为阴性,介于二者之间的为可疑。重复性和稳定性试验证明,建立的间接ELISA的稳定性和重复性良好,与间接血凝试验相比,其敏感性较高。     

猪传染性胸膜肺炎诊断方法研究进展

猪胸膜肺炎是国际上公认的危害现代养猪业的五大疾病之一。在我国,其血清阳性率呈上升趋势。研究快速、科学、准确的诊断方法对于本病的监测和控制具有很大的意义。本文从病原学、血清学和分子生物学等几个方面对该病的诊断研究进展作了综述。     

丝状支原体丝状亚种SC生物型PCR检测方法的建议

建立了一个可以识别丝状支原体丝状亚种SC生物型（MmmSC)的PCR方法。根据丝状支原体丝状亚种SC生物型（MmmSC)相关核苷酸序列，设计合成了MC1、MC2和SC1、SC2两对引物。MC1、MC2是一对簇特异性引物，用于鉴别丝状支原体族6个成员，对MmmSC、MmmLC扩增出与预期结果相符的462bp片段；而SC1、SC2是针对MnnSC的一对特异性引物，只能对MmmSC扩增出277bp的片段，经过VspI、Bsp143I和Dral三种限制性内切酶鉴定与预期结果相符，而不能扩增出MmmLC型Y－goat代表株，说明具有非常好的特异性。对MmmSC进行的敏感性试验显示SC1、SC2引物能够检测到100个CFU，具有非常高的敏感性。     

丝状支原体山羊亚种LPPA蛋白原核表达及间接ELISA方法的建立

【目的】建立基于丝状支原体山羊亚种(Mmc)膜脂蛋白LPPA的间接ELISA方法。【方法】扩增Mmc LPPA基因并将其克隆至pCold-Ⅰ载体,构建重组质粒pCold-Ⅰ-LPPA,测序鉴定正确后转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,经IPTG诱导表达后纯化得到Mmc LPPA重组蛋白,采用SDS-PAGE验证该重组蛋白是否表达,并采用Western blotting和传统经典的琼脂扩散血清学试验分析其与Mmc阳性血清的反应原性。以该重组蛋白为包被抗原,建立Mmc重组LPPA蛋白的间接ELISA抗体检测方法,对该方法进行反应条件优化后开展特异性、重复性试验,并将其初步应用于184份山羊血清样本。【结果】通过PCR扩增得到Mmc LPPA基因,成功构建了重组质粒pCold-Ⅰ-LPPA,经诱导表达后得到Mmc LPPA重组蛋白,SDS-PAGE结果显示,获得了大小约23 ku的LPPA重组融合蛋白;琼脂扩散及Western blotting试验证明该蛋白反应原性良好。ELISA方法反应条件优化结果显示,LPPA抗原蛋白的包被浓度为2.0μg/100μL,血清稀释度为1∶300,3%BSA封闭...