传染性喉气管炎鸡痘基因工程疫苗

鸡传染性喉气管炎(ILT)是由传染性喉气管炎病毒(ILTV)引起的鸡的一种急性呼吸道传染病,疫苗接种是防制本病的一条切实可行的措施。然而常规弱毒疫苗存在毒力偏强,接种后反应大,也能导致潜伏感染,在鸡体间传播可使毒力返强,使免疫鸡群有可能成为潜在的传染源,且该病毒强、弱毒无鉴别诊断方法等缺点。基因工程疫苗不仅很好地解决了这些问题,而且具有以下特点。     

鸡传染性喉气管炎病毒病原学和基因工程疫苗的研究进展

本文综述了鸡传染性喉气管炎病毒的病原学特点，并介绍了鸡传染性喉气管炎病毒分子生物学及基因工程疫苗方面的进展情况。     

鸡传染性喉气管炎重组鸡痘基因工程疫苗免疫效果试验

用鸡传染性喉气管炎重组鸡痘基因工程疫苗、英特威鸡传染性喉气管炎弱毒疫苗分别免疫鸡群后,观察接种反应并做免疫保护力试验。结果表明,鸡传染性喉气管炎重组鸡痘基因工程疫苗几乎没有接种反应,基因工程疫苗与英特威疫苗对ILT免疫保护率是相同的。一般鸡群通过两次的疫苗免疫接种5个月后,对ILT的免疫保护率能够达到100%。通过对鸡传染性喉气管炎重组鸡痘基因工程疫苗田间试验和区域试验结果表明,用该疫苗免疫鸡群,不仅接种反应小、安全、能有效地防止ILT的发生,而且由于鸡群几乎没有接种反应,育成期死淘率低,鸡群生长发育整齐,在产蛋期能表现优良的生产性能。     

鸡传染性喉气管炎基因工程疫苗研究进展

鸡传染性喉气管炎(Infectious laryngotrac-theitis,ILT)是由传染性喉气管炎病毒(Infectiouslaryngotractheitis virus,ILTV)引起的一种急性呼吸道传染病,其特征性病变是呼吸困难、气喘、咳出血样渗出物,喉部和气管粘膜肿胀,严重者会导致糜烂和出血[1].     

抗传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗

前言 1925年鸡传染性喉气管炎(Infectious Laryngo-tracheitis,ILT)首次发生于美国洛岛,是鸡的一种病毒性呼吸道传染病,该病可引起鸡死亡和产蛋下降,目前在多数国家仍有流行,对养禽业造成了严重的危害。疫苗接种是防制本病的一条切实可行的措     

抗鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗同居感染试验

疫苗的接触传播是疫苗免疫接种需要考虑的重要因素,为了检测重组鸡痘病毒载体疫苗水平传播的能力,对隔离条件下饲养的SPF鸡用重组鸡痘病毒基因工程疫苗接种,同时设立非免疫对照鸡,饲养期间特意延长清粪时间以增加感染的机会,1个月之后攻击传染性喉气管炎WG株强毒和鸡痘102株强毒,疫苗免疫鸡全部获得保护,而非免疫鸡则全部发病.在试验动物饲养场的自然条件下,将免疫鸡和试验对照两组鸡饲养在同一个鸡舍内,让疫苗毒的传播更接近自然条件.在每个月的攻毒试验中,对照鸡都没有获得对鸡痘和传染性喉气管炎强毒的保护.在疫苗免疫期间进行连续5个月的跟踪检测,同居未免疫鸡没有检测到抗传染性喉气管炎病毒gB抗体.这些实验结果表明抗鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗不能通过接触传播.     

生产鸡传染性喉气管炎病毒疫苗的探讨

喉气管炎病毒能引起鸡的一种急性呼吸道疾病,病毒的自然人侵门户是上呼吸道和眼,鸡是喉气管炎病毒感染的自然宿主,它引起产蛋量下降及死亡,给养鸡事业的发展带来了很大的危害。上海地区是养鸡业密集的区域,因而喉气管炎疫苗的需要量逐年增加。我厂于1993年底从广东生物药厂引进LT弱毒株,进行喉炎疫苗的试生产,碰到最大的难题是效价不稳定。我们在喉炎疫苗试生产过程中,着重在种毒的不同的稀释倍数、不同接种方法的比较试验、原苗(无菌膜)保存期试验、冻干曲线的改进试验……进行了多次的试验和探讨,现报告如下:1.材料和方法1.1.材料(1)毒种:LT弱毒K株CFF3,广东生物药厂提供。(2)鸡胚:生产、效检非免疫10～11日龄鸡胚,本厂动物房提供。(3)种子批蛋源:SPF种蛋,山东济南斯达鸡场购入。     

鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗

鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗是由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所与哈尔滨维科生物技术公司经过多年的课题攻关，研制而成的世界上第一个传染性喉气管炎的活载体疫苗，该疫苗目前已经获得农业部颁发的新兽药(二类)证书(农业部公告第461号)，是世界上第一个达到国际疫苗应用标准，并且完全拥有自主知识产权的禽痘病毒活载体疫苗。     

鸡传染性喉气管炎及其防制研究

作者论述了鸡传染性喉气管炎的病原及培养特性、发病机制、诊断方法及其防制，并对传染性喉气管炎的控制和根除进行了展望。     

传染性喉气管炎病毒基因疫苗免疫效应

以传染性喉气管炎病毒（ILTV）WG株gB和gD基因为目的基因构建真核表达质粒pCAGG-gB和pCAGG-gD。将75只SPF鸡随机分为7组，经肌肉注射接种pCAGG-gB、pCAGG-gD、pCAGG-gB＋pCAGG-gD、pCAGG-gB＋rFPV-ILTVgB以及rFPV-ILTVgB，并设有生理盐水和空载体（pCAGG）对照组。免疫2周后以500EID50 ILTV WG株强毒进行攻击，以评价ILTV基因疫苗以及基因疫苗和重组病毒联合应用对SPF鸡的免疫保护作用。血清抗体的检测表明：在免疫后的2周，各免疫组的鸡只均产生了特异性的ILTV抗体，外周血CD4^＋T、CD8^＋T、TCRTγδ^＋T细胞明显高于对照组，并且pCAGG-gB和pCAGG-gD分别诱导了高水平的IL-18和IFN-γ的表达。ILTV强毒攻击后，非免疫鸡全部发病，并在第2天出现死亡。而各质粒免疫组均获得了一定的保护（保护率44％），两种质粒联合免疫（pCAGG-gB和pCAGG-gD）和重组病毒（rFPV-ILTVgB）与质粒（pCAGG-gB）联合免疫的免疫组的保护率（56％）高于单独免疫组，产生高水平细胞因子表达的免疫组的保护率高于对照组。重组鸡痘病毒免疫组的保护率（69％）最高。这些结果表明ILTV的DNA疫苗能够诱导鸡体产生特异性免疫应答，并能对传染性喉气管炎强毒的攻击提供一定的免疫保护。     

鸡传染性喉气管炎人工感染试验

为建立人工模拟自然感染途径诱发鸡传染性喉气管炎病理模型,本试验采用80日龄京粉鸡随机分成健康对照组和试验组,试验组又设10-4、10-5、10-6 3个不同稀释度的剂量组,每组20只,将鸡传染性喉气管炎病毒经口腔滴注到鸡喉气管内进行攻毒,观察攻毒结果并统计发病和死亡情况。结果表明,10-4攻毒剂量组发病时间为1～8 d,发病率100％,死亡率10％;10-5攻毒剂量组发病时间为2～8 d,发病率100％,死亡率５％;10-6攻毒剂量组发病时间为4～9 d,发病率90％,死亡率0％。各组鸡均表现张口呼吸,咳出带血黏液的临床症状,剖检后均可见气管粘膜肿胀、出血,其中10-5组比较典型。10-5组经喉气管内滴注可以引起鸡100％发病,潜伏期、临床症状和病理变化典型,并且与自然感染基本一致,可用作鸡传染性喉气管炎病理模型。     

鸡传染性喉气管炎病毒中国王岗株gX基因的克隆及鉴定

以ｐＵＣ１９质粒为载体克隆鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）中国王岗株的ＤＮＡ，构建了鸡传染性喉气管炎病毒ＤＮＡ的ＫｐｎⅠＤＮＡ文库。参考ＩＬＴＶ－ＳＡ２株ｇＸ基因的核酸序列，设计并合成了分别为１２ｂｐ和１３ｂｐ的１对引物。以ＩＬＴＶ中国王岗株ＤＮＡ为模板，用ＰＣＲ方法特异性地扩增出０．８４ｋｂ的ＩＬＴＶ－ｇＸ基因片段。以地高辛标记该０．８４ｋｂ的片段为探针，经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交从ＩＬＴＶ中国王岗株ＫｐｎⅠＤＮＡ文库中筛选出３个含５．２ｋｂ外源ＩＬＴＶＤＮＡ片段的ｇＸ基因阳性重组子。经酶切分析、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交、ＰＣＲ检测和该片段部分酶谱分析表明，ＩＬＴＶ中国王岗株ＤＮＡ５．２ｋｂ的ＫｐｎⅠ片段无论是片段大小还是酶切图谱均与ＩＬＴＶ－ＳＡ２株完全相同，而且Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和ＰＣＲ检测均为ｇＸ阳性，证明其中含有完整的ｇＸ基因     

鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)王岗株糖蛋白gB基因序列比较分析

根据已经发表的鸡传染性喉气管炎病毒（ILTV）SA2的株的gB基因序列,设计了1对引物,通过PCR扩增了ILTV王岗株的gB基因,并克隆到pUC119质粒的EcoR I位点中,经酶切鉴定证实后,进行了序列测定。结果表明,gB基因长2619bp,包含完整的阅读框架。序列比较分析表明,ILTV王岗株的gB基因核苷酸序列与英国的Throne 882和美国的6322个强毒株的gB基因序列完全一致,而与澳大利亚SA2疫苗株gB基因核苷酸同一性为99.8%,氨基酸的同一性为98.4%。与澳大利亚SA2疫苗株gB基因核苷酸和氨基酸序列比较发现,ILTV3个强毒株（王岗株,Throne 882株和632株)gB基因的核苷酸序列在第89位上均缺失1个碱基G,而在第102位核苷酸处又插入了1个碱基A,从而引起了在氨基酸序列中第29～32位5个氨基酸的移码突变。此变异是否与病毒的毒力有关尚待进一步研究。     

禽传染性喉气管炎病毒TK基因狄高辛探针的研制及应用

应用狄高辛标记禽传染性喉气管炎病毒（ＡＩＬＴＶ）ＴＫ基因制备探针,经斑点杂交显色后,探针同以ＡＩＬＴＶ北京株为模板的ＴＫ基因ＰＣＲ产物及北京株核酸均呈阳性紫色斑点,而与正常尿囊液、新城疫病毒和火鸡疱疹病毒、禽传染性支气管炎病毒无反应,２株确诊为ＡＩＬＴＶ的野外分离毒也呈阳性。本研究结果表明,该ＴＫ基因探针是敏感和特异的,可用于禽传染性喉气管炎和其它呼吸道疾病的鉴别诊断。     

1株鸡传染性喉气管炎病毒的基因组特征与致病性

本研究旨在了解我国鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)流行毒株的分子特性.对1株分离自国内养殖场的鸡传染性喉气管炎病毒毒株BT株进行了部分基因序列(TK、ICP4、gB、UL32)测定分析,并研究了其对2周龄SPF鸡的致病性.遗传进化分析表明,BT株核苷酸序列与国内其他流行毒株相似性在97％以上,属于同一进化分支,未出现较...     

传染性支气管炎病毒S1基因DNA免疫质粒的构建及其免疫原性

为探讨ＤＮＡ免疫防制传染性支气管炎（ＩＢ）的可能性,以克隆的Ｍａｓｓｃｈｕｓｅｔｅ型类Ｍ４１地方分离ＱＤ株Ｓ１基因为免疫原基因,引入终止密码后插入ＳＶ４０启动子、增强子下游和ＳＶ４０ｐｏｌｙＡ信号上游,构建了Ｓ１基因ＤＮＡ免疫表达质粒ｐＳＶＱＤＳ１。将大量扩增并经聚乙二醇纯化的ｐＳＶＱＤＳ１溶于ＰＢＳ,以３００μｇ／只的剂量肌肉注射免疫小鼠,于４周后采集分离免疫小鼠血清进行鸡胚病毒中和试验。结果表明,ｐＳＶＱＤＳ１能够诱导产生针对传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）Ｍ４１株的中和抗体,具有良好的免疫原性。