鸭坦布苏病毒冻干高免卵黄抗体的研制

本研究用鸭坦布苏病毒病灭活苗三次免疫SPF蛋鸡,收取高免鸡蛋,制备成冻干高免卵黄抗体;用鸡胚中和试验和间接ELISA方法进行效价检测。试验结果显示,第3次免疫后2周,卵黄抗体中和效价为1∶103.5,4、5周达到最高值1∶104.5;间接ELISA方法检测冻干前后的抗体效价结果均为阳性;对鸭坦布苏病毒强毒的攻毒保护率达100%,可为鸭坦布苏病毒的防控提供一种有效的冻干高免卵黄抗体制剂。     

鸭坦布苏病毒高免卵黄抗体的研制

将鸭坦布苏病毒浓缩后制备灭活苗,免疫试验鸡制备卵黄抗体,鸡胚中和试验表明,第3次免疫后15d,卵黄抗体中和效价为1：10^3.5,雏鸭攻毒保护试验结果表明,预防组和治疗组的保护率分别达到90％和78％,说明本试验制备的卵黄抗体对鸭坦布苏病毒病有着显著的预防和治疗作用。     

鸭坦布苏病毒E蛋白结构域III原核表达产物诱导中和抗体的研究

黄病毒E蛋白结构域Ⅲ能够介导病毒与宿主受体结合以及诱导产生中和抗体,本研究利用原核表达系统表达了鸭坦布苏病毒E蛋白结构域Ⅲ,并研究了其免疫原性。按照大肠杆菌偏好性密码子对鸭坦布苏病毒E蛋白结构域Ⅲ核苷酸序列进行优化并合成后,克隆至pCold-TF载体构建重组质粒pCold-TF-optiEDIII。Western blot证实重组蛋白能与鸭坦布苏病毒特异性血清发生反应。用纯化的重组蛋白免疫BLAB/c小鼠3次,间接ELISA和间接免疫荧光实验证实E蛋白结构Ⅲ诱导了鸭坦布苏病毒特异性的体液免疫反应。中和实验证实鸭坦布苏病毒E蛋白结构域Ⅲ可诱导产生中和抗体。本研究为进一步研制鸭坦布苏病毒诊断抗原和亚单位疫苗奠定了基础。     

鸭病毒性肝炎高免卵黄抗体的研制

本文利用鸭病毒性肝炎(DVH)弱毒活疫苗和DVH灭活油乳剂疫苗制备高免卵黄抗体,研究表明,高免卵黄抗体具有治疗鸭病毒性肝炎的临床疗效。在治疗过程中发现,高免卵黄抗体对鸭病毒性肝炎的疗效,主要决定于卵黄抗体当中的中和抗体效价与免疫途径。卵黄抗体当中的中和抗体效价一般都会在28.5之上。研究说明高免卵黄抗体对于雏鸭感染鸭病毒性肝炎病毒的24h以内完成肌肉注射,能够达到的免疫疗效最佳。     

鸭病毒性肝炎卵黄抗体防治鸭肝炎研究

采用从淄博市分离到的Ⅰ型鸭肝炎病毒,免疫鸡制备高免卵黄抗体,经测定中和效价达到1:1024.经试验,用该卵黄抗体用于预防和治疗鸭病毒性肝炎,对1日龄雏鸭用于预防,总体保护率达到95.14%,对发病鸭群进行治疗,总体保护率达到94.67%.     

鸭病毒性肝炎高免卵黄抗体的研制

用DVH弱毒疫苗和DVH油乳剂苗免疫健康高产蛋鸡，可以制备高免卵黄抗体。高免卵黄抗体治疗雏鸭病毒性肝炎疗效的试验表明，用卵黄抗体治疗DVH的疗效取决于卵黄抗体的中和效价及治疗的时间。卵黄抗体的中和效价应达2^8.5以上，并且在感染DVH24h以内对雏鸭进行肌肉注射，免疫效果为最适宜。     

雏鸭病毒性肝炎卵黄抗体的研制

选取鸭肝炎病毒(duck hepatitis virus,DHV)分离株BZ-Ⅰ株作为疫苗株制备灭活苗,多次免疫蛋鸡制备卵黄抗体。经鸡胚中和试验法测定卵黄抗体的中和效价为2^9.6;经动物试验证实卵黄抗体可有效预防和治疗雏鸭对鸭病毒性肝炎(duck viral hepatitis,DVH)强毒的攻击,为雏鸭DVH的防治提供了新的技术手段。     

应用高免卵黄抗体防治鸭病毒性肝炎的研究

应用雏鸭肝炎病毒（ＤＨＶ）鸡胚化弱毒株（ＱＬ７９）和鸭病毒性肝炎油剂苗免疫鸡制备了高免卵黄抗体。考察了使用高免卵黄抗体治疗雏鸭病毒性肝炎（ＤＶＨ）的疗效。结果表明，用卵黄抗体治疗ＤＶＨ的疗效取决于卵黄抗体的中和效价及治疗的时间。卵黄抗体的中和效价应达２８．５以上，治疗最佳时间应在ＤＨＶ强毒进入鸭体后２８小时内，抗体效价在２８．５以下或错过最佳时间或超过３６小时，则治疗效果极差。     

鸡抗鸭病毒性肝炎高免卵黄抗体的研制及应用

应用雏鸭病毒性肝炎病毒（DHV）弱毒疫苗和DHV油乳剂灭活苗多次免疫产蛋鸡，制备鸡抗鸭病毒性肝炎高免卵黄抗体，自制鸭病毒性肝炎病毒高免卵黄抗体的疗效取决于卵黄抗体的中和效价及治疗的时间。实验室试验及临床应用结果表明，卵黄抗体的中和效价应达2^8以上，并且在感染DHV 24h以内对雏鸭进行肌肉注射，治疗效果最为理想。     

检测鸭坦布苏病毒卵黄抗体间接ELISA方法的建立

本研究以纯化的鸭坦布苏病毒WR株为包被抗原,建立检测鸭坦布苏病毒卵黄抗体的间接ELISA方法。经优化后确定检测样品的结果P/N([样品孔OD450nm-空白孔OD450nm)/(阴性孔OD450nm-空白孔OD450nm)]≥2.1判为阳性,<1.5者为阴性;1.5≤P/N<2.1者判为可疑,重检后仍可疑者定为阴性。以建立的间接ELISA方法对H9亚型禽流感病毒、H5亚型禽流感病毒、减蛋综合征病毒、鸭瘟病毒和大肠杆菌卵黄抗体进行了检测,结果均为阴性,表明该方法具有良好的特异性。经重复性试验表明,该方法重复性好。本方法的建立对开产种鸭和蛋鸭坦布苏病毒疫苗免疫效果的评价具有十分重要的意义。     

鸭坦布苏病毒病-H9亚型禽流感二联灭活疫苗免疫佐剂筛选

为筛选出理想的鸭TMUV-AIV(H9亚型)二联灭活疫苗免疫佐剂,将灭活的坦布苏病毒液和禽流感病毒(H9亚型)尿囊液分别与白油佐剂、卡波姆佐剂、铝胶佐剂、蜂胶佐剂制成抗原含量相同的TMUV-AIV二联灭活疫苗。应用阻断ELISA方法和血凝抑制方法测定免疫鸭血清中坦布苏病毒和禽流感病毒抗体,比较不同佐剂疫苗对试验鸭的免疫效力。结果表明,以白油作为佐剂的灭活疫苗组免疫效果最好,抗体产生快、抗体水平优于其他各组,免疫2周后60%(6/10)血清样品HI抗体可达1∶8以上,80%血清样品呈TMUV抗体阳性,是制备鸭TMUV-AIV(H9亚型)二联灭活疫苗的理想佐剂。     

应用高免卵黄抗体防治鸭病毒性肝炎的研究

应用雏鸭肝炎病毒（ＤＨＶ）鸡胚化弱毒株（ＱＬ７９）和鸭病毒性肝炎油剂苗免疫鸡制备了高免卵黄抗体，考察了使用高兔卵黄抗体治疗雏鸭病毒性肝炎（ＤＶＨ）的疗效。结果表明，用卵黄抗体治疗ＤＶＨ的疗交取决于卵黄抗体的中和效价及治疗的时间，卵黄抗体的中和效应应达２＾８．５以上，治疗最佳时间应在ＤＨＶ强毒进入鸭体后２８小时内，抗体效价在２＾８．５以上或过最佳时间或超过３６小时，则治疗效果极差。     

抗鸭坦布苏病毒卵黄抗体的制备

鸭坦布苏病是鸭的一种烈性传染病,目前尚无有效的预防和治疗措施。为了获得一款可用作紧急预防和治疗的被动免疫生物制剂,本研究以临床分离的鸭坦布苏病毒为基础毒株,经RT-PCR鉴定后在鸭胚中大量繁殖、离心去除杂质,再经切向流浓缩。加入β丙内脂灭活病毒,与佐剂混合制成灭活疫苗。以该疫苗3次免疫蛋鸡,收集高免鸡蛋,提取蛋黄液,采用水稀释法抽提和硫酸铵盐析法纯化卵黄抗体。结果显示,以RT-PCR方法可从尿囊液中扩增153bp的DNA片段,经测序为DTMUV。制备的灭活疫苗呈乳白色,液质均匀。获得的粗制抗体呈白色半透明,液质均匀。     

抗新型鸭细小病毒卵黄抗体的制备、纯化及效价测定

为了制备抗新型鸭细小病毒卵黄抗体并改良其制备工艺,试验采用新型鸭细小病毒SD株尿囊液制备的油乳剂灭活苗免疫产蛋鸡,收取高免蛋分别用氯仿法、辛酸法和水稀释-硫酸铵二次沉淀法对其中的卵黄抗体进行提纯,比较提纯效果,然后采用SDS-PAGE和Western-blot法对制备效果进行评价,采用鸭细小病毒抗体酶联免疫检测试剂盒进行效价测定,分析卵黄抗体的消长规律。结果表明:氯仿法提取的卵黄抗体浓度为4.512 mg/mL,透明,呈浅黄色;辛酸法提取的卵黄抗体液浓度为3.422 mg/mL,半透明,呈浅白色;水稀释-硫酸铵二次沉淀法提取的卵黄抗体浓度为3.837 mg/mL,透明,澄清。SDS-PAGE结果显示卵黄抗体有两条特异性条带,一条重链(约为65 ku)和一条轻链(约为33 ku)。制备的卵黄抗体具有特异性。试剂盒测定卵黄抗体效价,氯仿法为1∶6 000;辛酸法为1∶8 000;水稀释-硫酸铵二次沉淀法最高,为1∶10 000,其中水稀释-硫酸铵二次沉淀法效果较优。说明本试验成功制备了新型鸭细小病毒的卵黄抗体。     

鸭瘟与鸭坦布苏病毒病活疫苗联合免疫效果研究

鸭瘟鸡胚化弱毒活疫苗与鸭坦布苏病毒病活疫苗通过肌肉注射途径,同时接种21日龄健康易感肉鸭,检测两种活疫苗联合免疫的安全性和免疫效力。将两种活疫苗同时免疫雏鸭,免疫后14d检测血清抗体值,并在14d时采用鸭瘟强毒和鸭坦布苏病毒强毒株同时攻毒,观察试验组与对照组的攻毒保护情况。结果表明:两种活疫苗联合免疫健康易感雏鸭后,血清抗体上升快,可同时抵御鸭瘟强毒与鸭坦布苏病毒强毒株的攻击,保护效果良好。结论:鸭瘟与鸭坦布苏病毒病活疫苗联合免疫,对雏鸭安全,免疫保护效果好,避免多次免疫对雏鸭带来的应激反应,提高养殖经济效益。     

一例鸭病毒性肝炎病毒与鸭坦布苏病毒混合感染的病例报告

诸城市某养鸭场1 000余只雏鸭发病,首先对该鸭场的饲养、发病情况及发病鸭临床症状进行调查,对该鸭场送检的死鸭进行病理剖检,取病变明显的肝脏组织利用PCR(RT-PCR)进行多种禽病病原检测。结果表明:鸭病毒性肝炎病毒(DHV)与鸭坦布苏病毒(DTV)阳性,说明该鸭场发生了鸭病毒性肝炎病毒与鸭坦布苏病毒的混合感染。建议对发病鸭群进行隔离饲养,紧急接种鸭病毒性肝炎与鸭坦布苏病毒病的高免卵黄抗体,以降低发病带来的经济损失。     

检测坦布苏病毒的双抗体夹心ELISA方法建立及初步应用

以鹅源坦布苏病毒JS804毒株制备的多克隆抗体为捕获抗体,抗鹅坦布苏病毒NS1蛋白的单克隆抗体4A9作为检测抗体,建立了检测坦布苏病毒的双抗体夹心ELISA方法。该方法的最佳反应条件为:兔抗鹅坦布苏病毒多克隆抗体的最适稀释度为1∶1 600,单克隆抗体的最适稀释度为1∶160,样品反应时间为1 h,酶标羊抗鼠二抗工作浓度为1∶5 000,以OD450nm≥0.245作为阳性判定标准。该方法的板间、板内重复性变异系数小于10%,病毒最低检测量为386.25TCID50/0.1 mL,与新城疫病毒(NDV)、禽流感病毒(AIV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、鸭肝炎病毒(DHV)和鹅细小病毒(GPV)无交叉反应。应用该方法与RT-PCR方法同时检测22份临床样品,符合率达到86.36%。结果表明,建立的双抗体夹心ELISA方法具有特异性好、灵敏性高和重复性好等优点,可用于坦布苏病毒的快速检测。     

鸡抗鸭病毒性肝炎(DVH)高免卵黄抗体的研制

应用雏鸭肝炎病毒鸡胚化弱毒株和ＤＶＨ油乳剂苗免疫鸡制备了高免卵黄抗体。通过实验室试验及临床应用,表明卵黄抗体治ＤＶＨ的疗效取决于卵黄抗体的呼效价和治疗的时间。卵黄抗体的中和效价应达２＾８．５以上,并且在感染ＤＶＨ２４ｈ以内对雏鸭进行肌肉注射,免疫效果为最适宜。     

一例I型鸭病毒性肝炎及其高免卵黄抗体的制备

对山东省蒙阴县某疑似鸭肝炎发病鸭肝脏进行超薄片电镜观察,发现两种不同的病毒颗粒,RT-PCR鉴定,确诊发病鸭为I型鸭病毒性肝炎和禽流感混合感染。用该鸭肝炎毒株接种易感雏鸭,取病死鸭肝脏,制备组织灭活苗,并加以不同的疫苗佐剂,设置蜂胶组、黄芪组及不加佐剂的对照组三组。按照免疫程序免疫高产蛋鸡,收集高免蛋。通过中和试验对三组卵黄抗体的效价进行了测定,选择效价较高的卵黄抗体将其应用于临床发病雏鸭的治疗。     

鸭坦布苏病毒病灭活疫苗(HB株)免疫产生期和持续期的试验

评价鸭坦布苏病毒病灭活疫苗(HB株)免疫16日龄北京鸭的效力、免疫产生期和持续期。利用实验室制备的3批鸭坦布苏病毒病灭活疫苗(201401、201402和201403批),以0.5 mL/只的剂量分别经肌肉或皮下注射途径免疫16日龄DTMUV抗体阴性北京鸭,首次免疫后14 d按照同样的剂量和途径进行二次免疫。分别于首免后14 d,二次免疫后7、14、42、60d和100 d采血分离血清,用ELISA方法检测抗体。采血后以0.5 mL/只含500 DID50的剂量经胸部肌肉注射鸭坦布苏病毒进行攻毒,攻毒后2 d采血,分离血清进行病毒分离。3个批次疫苗免疫16日龄北京鸭,二次免疫后7 d均可检测到血清抗体,至60 d检测时抗体阳性率在80%以上。三批疫苗二次免疫后7 d即对试验鸭产生保护,保护率可达到60%以上,其中皮下注射途径的免疫持续期为60 d,肌肉注射途径的免疫持续期为100 d。鸭坦布苏病毒病灭活疫苗对16日龄北京鸭采用二次免疫的程序可获得良好的保护效果,胸部肌肉注射途径优于皮下注射途径。