花鲈鳃与鳔器官发育的组织学与形态学观察

为阐明花鲈鳃与鳔器官的发生机制,实验采用连续组织切片技术接合形态学观察对出膜后1～45 d花鲈胚后发育的鳃与鳔器官的发生、发育过程进行了系统的观察与研究。结果显示,花鲈仔稚鱼鳃的胚后发育分为4个阶段,鳃原基出现期(0～3 d)、鳃丝分化期(4～14 d)、鳃小片分化期(15～25 d)与鳃器官完善期(26～45 d)。在水温15～18°C条件下,花鲈孵化后的第1天,鳃原基出现;孵化后的第15天,仔鱼假鳃上分化出鳃小片结构;孵化后的第25天,仔鱼各鳃弓上均分化出鳃小片结构;孵化后的第45天,稚鱼鳃结构发育完全,与成鱼相同。组织学观察结果显示,花鲈鳔器官的发育时期分为形成、扩张、充气和退化4个阶段。花鲈初孵仔鱼未出现鳔原基,在孵化1 d后,仔鱼出现鳔原基,5 d后仔鱼鳔开始扩张,11 d后仔鱼鳔充气完成,13 d后仔鱼鳔开始退化。     

南方鲶、大鳍鳠鳔发育的组织学研究

有关硬骨鱼类鳔的研究多集中于形态学和组织学方面[孟庆闻、李婉端,1984;孟庆闻等,1987;郑文彪等,1988;秉志,1983;Harder,1975;Whitehead和Blaxter,1989],而鳔发育的组织学研究较少,仅见王瑞霞[1982]和Berra与David[1989]描述了青鱼及Lepidogalaxias samlamandroides的鳔原基来源。作者选择鲶形目两个不同科的代表种,鲂科的南方鲶Silurus meridionalis(Chen),鲿科的大鳍鳠Mystus maeropterus(Bleeker)为研究对象,详细研究了两种鱼鳔的原基来源、衍化,并比较了二者在结构上的差异。现将结果报导于下。     

大菱鲆早期变态发育和体表黑色素细胞形态学观察

对大菱鲆早期变态发育及体表黑色素细胞的形成过程进行了研究。绘制了1－60日龄大菱鲆鱼苗形态发育图，同时观察拍摄不同发育时期体表黑色素细胞的形态变化。14－17℃水温时，大菱鲆早期变态发育约需60d。1－14日龄主要为器官发育；14－40日龄主要为形态变化，25日龄左右开始变态；40－60日龄变态基本完成。变态前，鱼苗体表的幼体黑色素细胞对称分布，以素细胞密度先增加后减少。变态开始后，鱼体两侧体色出现不对称。有眼侧体表幼体黑色素细胞减少，逐渐由成体黑色素细胞替代，体色变深；无眼侧幼体黑色素细胞逐渐消褪，未出现成体黑色素细胞，体色逐渐变为白色。若有眼侧体表成体黑色素细胞的出现受阻，则形成白化。     

养殖与野生银鲳精巢发育形态学和组织学的初步比较

采用组织学与形态学等方法研究养殖与野生银鲳(Pampus argenteus)精巢结构、细胞形态、发育过程的异同点。结果表明:银鲳精巢结构为典型的小叶型结构,由精小叶、精小囊、小叶间质、小叶腔和输出管构成;生殖细胞可划分为5类;精巢发育与其他海水鱼类一样,可划分为6个时期。通过实验得知,养殖银鲳个体普遍小于野生银鲳的个体,且同等大小个体的养殖银鲳的精巢发育也不如野生银鲳精巢饱满,推测可能由于营养和环境温度的差异所造成。     

尼罗非鲫摄食器官胚后发育的组织学研究

对全长８．５－１９９ｍｍ的尼罗非鲫的横，纵，水平向石蜡连续切片进行了系统观察，描述了口腔壁，颌齿，鳃，耙，前咽顶壁和上下咽摄食器官胚后发育的组织结构特征。探讨了该结构特征与摄食方式和食性转化的关系，并对该结构的发育特点与青鱼，鲢的作比较。     

鳔器官的发育对人工培育鱼苗的影响

论述了鳔器官的发育对海水鱼类人工培育苗种的影响，仔鱼期鳔的形成和充气是影响闭鳔海水鱼类人工育苗成效的重要因素之一，鳔发育异常一是导致仔稚鱼死亡，二是导致脊柱前凸。在人工养殖条件下，影响海洋闭鳔鱼类鳔器官充气的因子有营养因子和环境因子，充气量，水表面的油膜，温度，盐度和光照等环境因子影响仔鱼水表面吞饮空气，影响鳔的充气率，仔鱼摄食EPA和DHA含量低的饵料后，活力差，仔鱼到达水表面吞饮空气的能力下降，鳔的开腔率降低，此外仔鱼体内甲状腺素的含量可能对仔鱼鳔的开腔率产生影响。     

哈氏仿对虾卵巢发育的形态学与组织学观察

根据哈氏仿对虾卵巢的组织学和外部形态特征，卵巢发育可分为六个时期：形成期、小生长期、大生长期前期、大生长期后期、成熟期和恢复期。卵巢发育在浙江海区一年一个周期，产卵期为5月至9月，产卵高峰期在6月至7月，为多次产卵类型。     

四指马鲅淋巴器官发育组织学观察

采用石蜡组织连续切片和HE染色技术,对1~60 dph(Days post hatching)四指马鲅(Eleutheronema tetradactylum)的淋巴器官个体发育进行研究,描述了淋巴器官发育特点及组织学特征。结果显示,在盐度为9.0±0.5,水温为(28±2)℃条件下,3 dph胸腺原基出现,由4~6层未分化干细胞和淋巴母细胞样的细胞组成;胸腺发育迅速,主要由淋巴细胞填充;至25 dph皮质区和髓质区分明显,胸腺发育基本完成。3 dph头肾原基形成,由前肾管和少量造血干细胞组成;5 dph胸腺淋巴细胞向头肾迁移,头肾开始淋巴化;随着鱼体生长,造血干细胞分化成不同类型细胞;18 dph前肾管开始退化,至53 dph完全消失,头肾主要由网状内皮系统支持下的淋巴造血组织构成。7 dph脾脏原基形成,至16 dph开始淋巴化;脾脏内皮系统较头肾发达,但其发育速度较胸腺和头肾慢,淋巴细胞明显少于胸腺和头肾。研究表明,四指马鲅淋巴器官原基出现及淋巴化的顺序是胸腺、头肾、脾脏。免疫淋巴器官结构及功能尚未发育完善,可能是四指马鲅在变态期间幼体死亡率高的主要原因之一。     

鳜鱼早期发育的生态形态学特征

近年来，鳜鱼的人工繁殖工作进展迅速，催产、受精、孵化已能有效控制，但是，鳜鱼早期发育的详细资料却报道甚少。本文对鳜鱼胚胎阶段的32个发育时期及胚后发育阶段的9个发育时期的主要生态学特征作了较详细的记述。     

大菱鲆AFLP分析体系的建立

本研究构建了大菱鲆扩增片段长度多态性(AFLP)分析体系,对DNA提取、双酶切反应、连接反应、预扩增反应、选择性扩增反应和银染等步骤进行了分析。结果表明,用EcoRI/MseI双酶切、核心序列加3个选择性碱基的选择性扩增引物、1∶6(w∶w)的EcoRI端与MseI端选择性扩增引物比和20μl选择性扩增体积,可得到十分稳定的结果。所得产物经电泳和银染后可获得条带清晰、背景干扰小的图像。该体系的构建为AFLP技术在大菱鲆相关研究中的应用奠定了基础。     

大菱鲆工厂化养殖试验

2001年4月22日－2002年4月22日的实验结果表明，大菱鲆工厂化养殖应选择水温为7－24℃的水源，最好控制在13－18℃之间，PH值大于7，盐度高于15，水循环量6－8个，在上述条件下，其生长速度为1龄期间1mm/d左右，养殖12个月后体重平均可达700g左右，密度15－20尾／m^2，成活率93．7％，湿性颗粒饵料系数1．83，随着个体长大，雌、雄个体出现明显差异，水温13－18℃时，摄食量变化不明显；9－13℃时，摄食量随水温降低而减少，投饵量视鱼体大小和摄食状况而定。     

大菱鲆源杀鱼爱德华氏菌(Edwardsiella piscicida)的分离鉴定

从患腹水病大菱鲆Scophthalmus maximus的肝脏中分离到一株优势细菌G1,经人工感染实验表明G1为引发大菱鲆腹水病的致病菌,且半致死浓度为LD50=1.21×105 CFU·g-1。采用常规的生理生化鉴定方法及分子生物学方法对G1进行分析,结果表明,G1的16SrRNA基因序列与杀鱼爱德华氏菌Edwardsiella piscicida的同源性达100%,系统发育分析表明菌株G1与杀鱼爱德华氏菌分支聚为一支,结合生理生化鉴定结果确定G1为杀鱼爱德华氏菌。药敏试验表明菌株G1对头孢曲松、环丙氟哌酸、左氧氟沙星等8种抗菌药物高度敏感。     

Dietary protein requirement for young turbot (Scophthalmus maximus L.)

This study was conducted to determine the optimum dietary protein level for young (an initial weight of 89 g) turbot, Scophthalmus maximus L. Duplicate groups of the fish were fed the five isoenergetic diets containing the various protein levels ranging from 290 to 570 g kg^?1 diet for 45 days. Survival was not affected by dietary protein level. Weight gain and feed efficiency were improved with dietary protein level up to 490 g kg^?1 diet. Dietary protein requirement of young turbot using the broken‐line model was estimated to be 494 g kg^?1 diet based on weight gain response. Protein efficiency ratio was not influenced by dietary protein level. The highest protein retention was obtained from the fish fed the 490 g protein kg^?1 diet. Proximate composition of the fish was not significantly affected by dietary protein level. In considering these results, it was concluded that the 494 g protein kg^?1 diet with 100 g lipid kg^?1 diet (15 MJ kg^?1 diet) provided optimal growth of young turbot under these experimental conditions.     

大菱鲆胚胎玻璃化方法研究

用大菱鲆(Scophthalmus maximus)神经期胚对6种抗冻剂的毒性进行检测,发现其毒性排列为1,2-丙二醇(PG)<甲醇(MeOH)<甘油(Gly)<二甲基甲酰胺(DMF)<乙二醇(EG)<二甲亚砜(DMSO).以DMF为主因子配制和筛选出11种玻璃化程度较好的玻璃化液,并用大菱鲆肌节期胚对其中5种玻璃化程度最好的玻璃化液进行检测,结果显示,A4(DMSO 20%+DMF 25%)、A7(DMSO 25%+DMF 20%)较适合于大菱鲆胚胎的平衡处理,利用A4和A7平衡处理神经期胚、肌节期胚、心跳期胚、出膜前期胚,结果显示大菱鲆神经胚和肌节胚对玻璃化液的适应能力较强.实验测试出不同时期胚胎在两种玻璃化液中的成活率,为大菱鲆各期胚胎在玻璃化液中的平衡处理提供了依据.利用大菱鲆肌节胚对不同的平衡步骤进行了筛选,发现五步法的平衡效果较好.     

大菱鲆生长性状在不同生长发育阶段的相关分析

为培育优良大菱鲆养殖品种,收集来源于不同国家、不同地区和不同批次的大菱鲆亲鱼8批,从各群体中挑选性腺发育良好的个体,利用不平衡巢式设计方法和人工授精技术,每条雄鱼个体配两条雌鱼个体,共构建38个父系半同胞和76个母系全同胞,分别测定了每个家系生长到25和80日龄的体重、全长和体长,利用父系半同胞组内相关法估计各性状之间的相关性。对大菱鲆遗传相关分析表明,体重和全长的遗传相关系数为0.95,体重和体长的遗传相关系数为0.88和1.00,全长和体长的遗传相关系数为0.99。对大菱鲆表型相关分析表明,体重和全长的表型相关系数为0.881,体重和体长的表型相关系数为0.622和0.871,全长和体长的表型相关系数为0.947。并且经相关系数显著性检验,各性状间的表型相关都呈极显著水平(P<0.01)。另外,多元回归分析建立了全长(X1)和体长(X2)对体重(Y)的回归方程,生长性状与体重的复相关指数为R2=0.789,说明它们都是直接影响体重的重要指标。     

养殖大菱鲆蟹栖异阿脑虫感染及其危害

从养殖大菱鲆（Scophthalmus maximus）患病鱼体中分离出一种寄生性纤毛虫，通过活体观察、碳酸银法染色和扫描电镜对其形态学进行特征分析。经鉴定，该纤毛虫为蟹栖异阿脑虫（Mesanophrys carcini Groliere ＆ Leglise，1977），隶属于寡膜纲、盾纤目、嗜污科、异阿脑虫属。患病鱼常表现为静伏池底，体色变暗，活力弱，摄食差，生长减慢，并发生急、慢性死亡。最明显的特征是病灶部位变白，略有浮肿，触摸柔软。流行病学特征显示，在大菱鲆的苗期、养成期、亲鱼培育期均可发生纤毛虫感染，幼鱼期发生率较高，发病水温14-20℃，盐度12～40。组织病理学观察分析表明，病灶组织处以盾纤虫为主要入侵微生物，常伴有细菌存在，但没有发现病毒性细胞病变和霉菌等其他寄生生物。     

大菱鲆受精卵显微注射技术的建立

本研究将100~300 pg含有肌肉特异表达启动子和绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)基因的重组质粒(smyd1:gfp)显微注射到大菱鲆(Scophthalmus maximus)受精卵动物极细胞中,通过细心培育,成功孵化出鱼苗约120尾。统计分析显示,显微注射后,大菱鲆胚胎存活率为4.8%。利用荧光显微镜观察大菱鲆胚胎及仔鱼,只在注射smyd1:gfp质粒的胚胎及仔鱼的肌肉中发现有绿色荧光。通过进一步PCR扩增检测,在注射的大菱鲆胚胎及仔鱼DNA中扩增出了GFP特异片段,大小约为340 bp。研究表明,本研究成功建立了大菱鲆显微注射技术,可为大菱鲆基因功能研究和遗传育种奠定基础。     

大菱鲆类胰岛素生长因子3基因的克隆和表达分析

类胰岛素生长因子3 (insulin-like growth factor 3, IGF3)在硬骨鱼类性别分化过程中扮演重要角色,但其是否影响卵巢发育尚不明确。本研究以欧亚养殖良种大菱鲆(Scophthalmus maximus)为实验材料,通过RACE (rapid-amplification of cDNA ends)克隆技术,获得了IGF3全长cDNA序列,分析了其生物信息学特征,预测了其与IGF特异性受体(IGF receptors, IGF-1R, IGF-2R)结合情况,查明了其组织和卵巢不同发育时期表达规律。结果显示,大菱鲆IGF3 cDNA全长为1 255 bp,编码259个氨基酸。生物信息学分析发现,IGF3为亲水性蛋白,具有典型的IGF特异性结构域和信号肽序列,同狭鳞庸鲽(Hippoglossus stenolepis)同源性最高;蛋白质三级结构域由3个α螺旋串联而成,同IGF-1R和IGF-2R紧密结合。组织表达分析显示,igf3在大菱鲆各个组织中均有分布,雌、雄大菱鲆表达规律显著不同,但皆在脑组织中表达最高。在卵巢发育过程中,igf3在卵黄生成后期表达量显著上升...     

大菱鲆子二代家系白化与正常幼鱼生长及形态学差异

白化现象是大菱鲆(Scophthalmus maximus)生产中存在的主要问题之一.2009年,采用大菱鲆育种标准化苗种培育方案培育大菱鲆子二代全同胞家系32个,选取其中白化较为严重的16个全同胞家系(包括6对半同胞家系组合)作为样本家系,抽样测定统计各家系85日龄(dph)幼鱼的形态指标,比较了各全同胞家系白化和正常鱼的形态特征,以及全同胞家系间生长的差异.大菱鲆幼鱼体色分为完全正常、局部白化和完全白化3个类型,白化率统计时将部分白化幼鱼归于白化幼鱼一类.16个全同胞家系的白化率处于17.2％～86.7％范围内,6对半同胞家系组合的白化率差别较大,姊妹家系间白化率差值0 ～ 46％,因此认为白化可能受到母系遗传或卵子质量的影响.多数家系的白化与正常幼鱼的全长、体长、总高、体高、全重差异不显著(P＞0.05).16个全同胞家系样本中,除2个家系外,其余家系的白化与体色正常鱼的可比性状差异不显著(p＞0.05).将各全同胞家系抽样的全部90尾鱼的全重平均值作为指标进行比较,发现全重的生长差异在全同胞家系间表现较为明显.因此,白化鱼与原色鱼的生长和身体形态整体上不存在显著差异.本研究还获得速生候选家系1个,高体型候选家系3个.根据研究结果分析大菱鲆白化现象发生的原因,认为虽然遗传不是大菱鲆白化与否的决定因素,但却是一个重要因素.