腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定

从１９９７年在辽宁省大连市某鸡场发生的一种以腺胃肿大为特征的鸡的传染病病例中收集腺胃组织（Ｄ９７１）接种ＳＰＦ鸡胚,传至１３代,具有规律性死亡和典型胚胎病变特征,ＥＩＤ５０为１０－６．４８／０．２ｍｌ。Ｄ９７１毒株感染ＳＰＦ鸡胚尿囊液经负染电镜观察,可见直径为８０～１２０ｎｍ,有囊膜和纤突的冠状病毒粒子。Ｄ９７１毒株经卵磷脂酶Ｃ处理后能凝集鸡红细胞,并能特异的被Ｄ９７１多抗所抑制。用反转录聚合酶链反应获得了Ｄ９７１毒株免原（Ｓ１）基因ｃＤＮＡ,经１％琼脂糖凝胶电泳可见１．７ｋｂ的特征性条带。用Ｄ９７１毒株接种ＳＰＦ鸡,能引起与自然病例相似的病理变化,并分离到病毒。用Ｄ９７１毒株可直接感染ＳＰＦ鸡胚成纤维细胞。结果证实从腺胃病变型ＩＢ鸡群中分离的Ｄ９７１毒株是冠状病毒科ＩＢＶ成员。     

鸡腺胃病变型传染性支气管炎病毒感染试验

本文采用腺胃病变型传染性支气管炎患病鸡的腺胃病料和H95株分离株尿囊液毒,对不同品种、不同日龄的易感鸡,采用不同的感染途径进行感染,对其增重、死亡等数据进行统计分析,结果表明:供试不同品种的鸡在不同的感染途径下,采用腺胃病料和鸡胚尿囊液毒分别感染,均可引起不同程度的感染发病,并出现和自然病例相同的症状和典型的病理变化。随日龄的增长,其易感率和死亡率呈下降趋势。从感染死亡鸡中可重新回收到相应的病毒,发病耐过的鸡可产生特异性抗体。     

腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒强毒株的培育

用腺胃病变形鸡传染性支气管炎病毒分离株IBV－D971株接种1日龄SPF鸡，连续传10年代，培育出了腺胃病变型鸡传染性支气管炎强毒株IBV－D971J株。IBV－D971J10对SPF鸡胚的致病力为10^-6.45ELD50/0.2mL,对1日龄SPF鸡的致病力为10^-1.5LD50/1mL，从死亡鸡的心，肝，脾，肺，肾，腺胃，肌胃，法氏囊等均能分离到IBV，IBV－D971J10不含鸡新城疫，禽流感，鸡马立克氏病，鸡传染性法氏囊炎，网状内皮组绢增殖病等外源病毒，对SPF鸡可引起典型的腺胃炎，肌胃炎，间质性肾炎等是变化。     

腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒分离株(IBV-D971)对SPF鸡的致病力试验

用腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒分离株 Ｉ Ｂ Ｖ Ｄ９７１ 毒株接种１ 日龄 Ｓ Ｐ Ｆ 鸡, 可引起６０ ％ 死亡。该毒在 Ｓ Ｐ Ｆ 鸡体传２ 代后, 接种１ 日龄 Ｓ Ｐ Ｆ 鸡, 可引起１００ ％ 死亡。对人工感染病例进行了系统的病理学观察, 主要的眼观病理变化为腺胃胃壁增厚、乳头消失或乳头扁平, 乳头顶部凹陷坏死, 肾肿大、尿酸盐沉积。主要的组织学变化为腺胃粘膜上皮坏死脱落、固有层水肿、有炎性细胞浸润、肌层有淋巴细胞浸润、肌细胞坏死、腺小叶腺细胞坏死、核浓缩。小肠粘膜绒毛上皮增生、呈复层结构、固有层水肿、有大量淋巴细胞浸润。肾间质水肿、细尿管和肾小球间质内有淋巴细胞浸润。肝、心等实质细胞变性, 以至局灶性坏死。脾、胸腺及法氏囊的淋巴组织萎缩等, 人工感染鸡病例和自然发病鸡的病理变化基本相同。     

腺胃型鸡传染性支气管炎病毒Hu98株的分离鉴定

１９９８年首次从哈尔滨市某鸡场鸡腺胃肿大为特征的病例中分离到ＩＢＶ－Ｈ９８毒株。将该病毒株接种ＳＰＦ鸡胚并传至５代（Ｆ５）,结果接种胚出现规律性死亡和典型胚胎病变特征,ＥＩＤ５０为１０＾－６．４０／０．２ｍＬ。ＩＢＶ－Ｈｕ９８Ｆ５感染ＳＰＦ鸡胚尿囊液经负染电镜观察,可见直径为８０￣１２０ｎｍ、有囊膜和纤突的冠状病毒粒子。用ＩＢＶ－Ｈｕ９８Ｆ５毒株人工感染１日龄ＳＰＦ鸡能引起与自然病例相似的病理组织     

腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒变异株的比较研究

腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）变异株Ｈ９５提纯样品经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ,证明Ｈ９５株单抗ＤＥ７和Ｍ４１株单抗６ＤＨ８均能识别Ｈ９５株５４０００蛋白多肽。采用单抗、多抗介导间接ＥＬＩＳＡ试验表明,Ｈ９５毒株能与抗ＩＢＶＭ４１Ｎ蛋白单抗６ＤＨ８和ＩＢＶＭ蛋白单抗ＭＣ发生反应,也能与抗Ｍ４１、Ｇｒａｙ、Ｈｏｌｔｅ、Ｔ、Ｈ５２、Ｎ１１５和分离株Ｃ９００１、ＤＬＺ９１１１的多抗血清反应,同时抗Ｈ９５株的４株单抗、多抗血清也能与上述毒株反应。卵磷脂酶Ｃ处理的Ｈ９５株的血凝活性能被相应的Ｈ９５株的单克隆抗体和高免血清所抑制,也能被Ｍ４１单抗和高免血清所抑制。通过ＲＴ－ＰＣＲ获得了Ｈ９５毒株的免疫原基因Ｓ１,经Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ和ＩＢＶ的Ｓ探针检测呈阳性。     

腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒（IBV—D971株）致弱的研究

将IBV-D971株病毒在SPF鸡胚上连续传至120代,培育出了一株毒力明显减弱,并且具有良好免疫原性的腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒弱毒株(IBV-D971株).IBV-D971 F105代毒力明显下降,以109.25EID50接种1日龄SPF鸡5/5无不良反应.IBV-D971 F105代毒连续通过1日龄SPF鸡体5代,未见毒力返强.以103EID50免疫1日龄SPF鸡,攻毒后5/5保护,对照5/5发病.     

腺胃病变型鸡传染病支气管炎病毒分离株（IBV—D971）对SPF？…

用腺胃病变型鸡传染性支气管炎病毒分离株ＩＢＶ－Ｄ９７１毒株接种１日龄ＳＰＦ鸡,可引起６０％死亡。该毒在ＳＰＦ鸡体传２代后,接种１日龄ＳＰＦ鸡,可引起１００％死亡。对人工感染病例进行了系统的病理学观察,主要的眼观病理变化为腺胃胃壁增厚,乳头消失或乳扁平,乳头顶部凹陷坏死,肾肿大,尿酸盐沉积。     

腺胃病变型IBV豫北株的分离鉴定及灭活苗的研制

1998年 9月豫北地区发生了以腺胃肿大为特征的传染病 ,采集腺胃组织进行病原分离 ,鸡胚传至 8代以上 ,鸡胚开始出现典型侏儒化和规律性死亡 ;鸡胚尿囊液 (YBXD)经磷钨酸负染后电镜下可以看到有囊膜和纤突、圆形、直径 90～ 1 60nm的病毒粒子 ;未经处理的YBXD毒株不能凝集鸡红细胞 ,经卵磷脂酶C处理后能凝集鸡红细胞 ,此凝集能特异地被抗YBXD高免血清所抑制。用所分离毒株制备油佐剂灭活苗预防传染性支气管炎取得良好效果     

鸡传染性支气管腺胃病变型毒株免疫原基因的分离鉴定

以腺胃病型变型鸡传染性支气管炎病毒分离株Ｈ９５提取的ＲＮＡ为模板,按ＩＢＶ Ｂｅａｕｄｅｔｔｅ株Ｓ１基因两侧对应序列,设计一对２７ｂｐ引物,引物间跨幅为１．７Ｋｂ。用反转录－聚梧酶链反应获得与预期大小一致的核酸片段。ＲＴ－ＰＣＲ产物凝胶电泳后,Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹,经Ｓ１探针检测呈阳性,表明获得分离株Ｈ９５Ｓ１基因。     

禽流感、新城疫、传染性支气管炎三联没乳剂灭活疫苗的研制

以禽流感病毒（AIV）H5N4株，新城疫病毒（NDV）LaSota株与传染性支气管炎病毒（IBV）M41株为抗原研制了AI－ND－IB三联油乳剂灭活疫苗，并对疫苗的物理性状，安全性，免疫效力，保存期及抗体消长规律进行了检测，结果表明，疫苗在免疫后3周后6个月内，对AIV－H5N4，NDV－北京株的攻击均获全部保护，在免疫后52周内，免疫鸡箅清中AIV－N5N4，MDV，IBV的HI抗体也保持较高的水平，疫苗在4℃保存15个月，其免疫力没有下降。     

鸡腺胃型传染性支气管炎的病理变化

对１９９５年以来在江苏一些县市养鸡场和养鸡专业户蛋鸡群发生的鸡腺胃型传染性支气管炎的自然病例和人工感染病例进行了系统的病理学观察。自然病例和人工感染病例的病理变化基本相同。其主要眼观病理变化为腺胃显著肿大,小肠充血、出血和炎症;主要组织学变化为腺胃粘膜充血、出血、炎性水肿和浅层坏死,小肠粘膜急性炎症变化,肝、心、肾等实质细胞变性以至局灶性坏死,脾、胸腺及法氏囊的淋巴组织萎缩。     

鸡腺胃型传染性支气管炎病毒的分离与初步鉴定

从陕西省周至县某肉鸡场发生疑似腺胃型传染性支气管炎的鸡群中采集病料,经鸡胚接种分离到1株病毒。电镜观察病毒粒子呈圆形或椭圆形,大小80nm~130nm,具有囊膜和纤突,呈典型冠状病毒形态;该病毒无直接血凝性,经10g/L胰酶处理后血凝价平均高达8log2以上;新城疫病毒干扰试验表明,分离毒能抑制NDV在鸡胚中增殖;人工感染3个品种的1日龄雏鸡35只,其中尼克红鸡很快出现临床症状并死亡,死亡率90%。结合流行病学调查、临床症状及病理变化初步鉴定该分离毒为腺胃型传染性支气管炎病毒。     

鸡传染性支气管炎病毒BJ0903株的分离鉴定

从北京某养鸡场疑似肾型传染性支气管炎病死鸡的肾脏和肺脏组织中分离到一株病毒,经SPF鸡胚连续传代、血凝试验、鸡胚矮小试验、干扰新城疫病毒复制试验、PCR鉴定和动物回归试验,初步确定该病毒为鸡传染性支气管炎病毒,命名为BJ0903株。     

一株肾型鸡传染性支气管炎病毒的初步分离鉴定

从哈尔滨市某肉鸡养殖场疑似传染性支气管炎的病死鸡中分离到1株肾型IBV,并对其进行鸡胚矮小化、血凝性、电镜下特征、新城疫干扰试验、致病性等生物学鉴定和N基因的RT-PCR鉴定。结果表明,该病毒分离株在鸡胚上传至第四代(F)4开始出现死亡或侏儒胚;病毒不凝集鸡红细胞;透射电镜下可见多呈球形、直径约80～120nm的病毒粒子,具有冠状病毒的典型形态特点;该病毒可干扰新城疫LaSota株在鸡胚中的增殖;将分离毒第4代尿囊液接种于6日龄雏鸡,7d后开始出现死亡,死亡率高达67%(6/9),病死鸡剖解后可见肾脏明显肿大、苍白,具有传染性支气管炎的典型病变;分离毒第5代尿囊液经N基因特异性RT-PCR获得大小约438bp的目的片断。初步确定所分离病毒为肾型IBV。     

陕西省鸡肾型传染性支气管炎病毒的分离鉴定

从临床表现呼吸道传染病的20个发病鸡群中先后分离出18株病毒,通过鸡胚感染、血清学试验、分子生物学试验、动物回归试验证明其中13株是冠状病毒科的鸡传染性支气管炎病毒,3株为新城疫病毒,2株为H9禽流感病毒。该13株中的BJ2、FF2、YL2、B01、G5、YX、WH、WG分离毒具有很强的嗜肾性和致病力,这8个陕西流行株的血清型与W118毒株相同,而与IBVGray株、W93株有一定的差异。结果表明,陕西地区主要流行鸡肾型传染性支气管炎,且流行株具有强致病力。     

间接法DOT—ELISA检测临床病料中的鸡传染性支气管炎病毒

将间接法ＤＯＴ－ＥＬＩＳＡ用于鸡传染性支气管炎感染的诊断，以病鸡肾１：１００的悬浮上清液进行了检测可以显示出阳性反应。     

鸡肾型IBV的分离及其N基因的克隆与测序

通过病毒形态学观察、血凝试验、病毒干扰实验、动物回归实验等分离鉴定了1株鸡肾型传染性支气管炎病毒.利用RT-PCR技术对分离毒株的N基因进行了扩增,经克隆、序列测定和分析,证实分离株为肾型IBV.