共查询到19条相似文献,搜索用时 109 毫秒
1.
一种快速高效的DNA提取方法研究 总被引:3,自引:0,他引:3
DNA提取技术是分子实验的一个重要步骤,快速、高效的植物DNA提取方法是样品需要量大的分子实验的一个关键技术。本实验通过改进传统的DNA提取方法,使用96孔联体试管板,而不是单个离心试管,对叶片进行冷冻干燥后粉碎,无需使用液氮。在实验过程中,使用排枪操作,CTAB法提取DNA。以小麦为例,依据该方法提取幼苗叶片DNA,并选取6对引物对DNA样品进行PCR扩增,使用ABI PRISM 3730 DNA分析仪对扩增产物进行分析,以检测提取的DNA质量。结果表明,本实验的DNA提取方法所得到的PCR扩增条带均有较高的强度。在6对实验引物的扩增结果中,扩增条带强度最好的引物有98%的样品在6 935~16 786 RFU( Relative Fluorescence Unit)之间;扩增条带强度较低的引物有93% 的样品在532~1 111 RFU之间;在所有的PCR扩增反应中,最低PCR扩增条带强度为205 RFU,缺带样品数量平均只有0.8%。按照本实验的方法操作,每人每天可提取上千个样品的DNA。因此,该DNA提取方法是一种高效、快速、能获得高质量DNA的有效方法。 相似文献
2.
3.
一种快速高效提取花生叶片DNA的简化方法 总被引:1,自引:0,他引:1
为获得适用于高通量测序的高质量花生叶片DNA,本方法取第三对真叶为实验材料,设计烧制圆球状枪头和离心管装置代替研钵研磨,并在CTAB法的基础上在杂质沉淀前快速分离DNA等简化方法提取DNA。琼脂糖凝胶电泳检测结果表明DNA条带清晰、完整性高。经超微量分光光度计检测,DNA浓度范围在104~131ng/μL,OD260/OD280为1.7~2.0,OD260/OD230大于2.0,说明杂质少,可获得高纯度,高浓度的DNA。此方法与常用的植物基因组DNA提取方法相比,具有成本低、时间短、质量高的优点,可用于基因组重测序、分子生物学技术以及分子标记筛选等后续研究,可提高花生分子育种与筛选工作效率。 相似文献
4.
一种可用于PCR分析的水稻DNA简易提取法 总被引:12,自引:2,他引:12
以水稻黄化苗为材料,用NaOH溶液抽提DNA,对其用于基于PCR技术的DNA标记中的效果进行了分析。结果发现,用0.5 mol/L NaOH对黄化苗进行直接处理,并用等量1 mol/L Tris-HCl进行稀释、中和,离心所得的上清液即可直接用于各种PCR扩增和随后的DNA标记鉴别,包括转基因PCR片段检测、微卫星标记多态性分析(琼脂糖电泳法或毛细管电泳法),用这种方法提取的DNA可以在短期内保存,在PCR分析中其效果与用常规CTAB法提取的DNA相当。 相似文献
5.
比较了橡胶林土壤微生物CTAB-SDS提取法和SDS提取法的效果。结果表明,2种提取方法均获得约
23.1kb的DNA片段,2种提取方法在颜色、提取量和纯度上存在较大差异。CTAB-SDS提取法提取DNA的纯度较好,不需要纯化可以直接用于PCR扩增、酶切等后续操作;SDS提取法提取的纯度低,不能直接用于PCR扩增。2种方法都适合橡胶林土壤DNA的提取,如果要求获得纯度高的DNA,CTAB-SDS提取法是最佳选择。橡胶林土壤微生物DNA的提取,推荐使用CTAB-SDS提取法。 相似文献
6.
7.
8.
一种改良的大豆DNA提取方法 总被引:2,自引:0,他引:2
大豆组织中含有较多的蛋白质、糖类、酚类和脂类物质,要从中提取高质量的DNA比较困难。针对这一情况提出一种改良UREA大豆DNA提取方法(m UREA),该方法用异丙醇沉淀DNA,并配制washing buffer洗涤DNA沉淀。并以大豆叶片和种子为材料,将m UREA法与CTAB法和SDS法进行对比。结果表明,以大豆叶片为材料时,m UREA法提取的DNA产率最高,质量最好;以大豆种子为材料时,m UREA法提取的DNA产率略低于SDS法,但纯度最高。综合来看,m UREA法是一种高效的大豆基因组DNA提取法,从大豆种子和叶片中提取的DNA浓度和纯度都较高,能满足后续各种分子生物学的要求。 相似文献
9.
10.
11.
SUN Chuan # HE Ying-hong CHEN Gang RAO Yu-chun ZHANG Guang-heng GAO Zhen-yu LIU Jian JU Pei-na HU Jiang GUO Long-biao QIAN Qian ZENG Da-li 《水稻科学》2010,17(4):326-329
The extraction of DNA is often the most time consuming and laborious step in high-throughput molecular genetic analysis and marker assisted selection(MAS)programs.A simple method for preparation of rice genomic DNA was developed.A small amount(1-50 mg)of leaf tissue of rice seedling,500μL of extraction buffer,and one steel bead were put into a 2-mL microcentrifuge tube.After vigorously mashing for 2 min,5μL of supernatant was directly applied to PCR amplification.Otherwise,the supernatant was precipitated with two times volume of ethanol to obtain high quality genomic DNA.This method is simple,rapid,low cost,and reliable for PCR analysis.One person can manipulate as many as 96 samples for PCR in 10 min.It is especially suitable for genotyping of large number of samples. 相似文献
12.
13.
Qiu Fu-lin WANG He-he CHEN Jie ZHUANG Jie-yun Hei LEUNG CHENG Shi-hua Wu Jian-li 《水稻科学》2006,13(4):299-302
With the completion of whole genome sequence, focus on rice research has been apparently shifted from sequence analysis (genomics) to identifying and understanding the functions (functional genomics) of nearly 40 000 genes presented in rice genome [1-3]. Gene functional identification requires new materials and methods. Mutant is considered as one of the most important sources of starting materials. In mutant detection, a new reverse genetics strategy termed TILLING (Targeting Induced Loca… 相似文献
14.
15.
16.
17.
18.
以近200个巴西橡胶树种质材料(品种及无性系)幼嫩叶片为材料,采用改良的CTAB法对其基因组总DNA的提取进行了研究。结果表明,该方法提取的DNA溶液无色透明,OD260 /OD280 的比值均为1.8~2.0,1%琼脂糖凝胶电泳为清晰的一条带,无降解现象,RNA去除干净,能被限制性内切酶完全消化;其AFLP分析(引物EcoRI- TA/MseI- CTT)条带清晰,多态性好,说明此方法提取的巴西橡胶树幼嫩叶片基因组总DNA较适于AFLP分析。 相似文献
19.
水稻耐盐性数量性状位点的初步检测 总被引:37,自引:3,他引:37
用RFLP分析技术和分蘖株系法对由耐盐性品种Pokkali和盐敏感品种Peta配制的BC1(Peta/Pokkali∥Peta)群体分别检测水稻苗期和成熟期耐盐性数量性状位点(QTLs)。表型鉴定在含(处理)或不含(对照)60 mol/m3 NaCl的营养液中进行,苗期观测盐害级别、苗Na+含量和鲜重/干重比值3项指标,成熟期测定10种农艺性状处理与对照的相对值。从水稻12条染色体上筛选出43个多态性标记,对上述指标分别作点分析,共检出15个连锁标记。连锁标记的分布特点显示,在研究所涉及的基因组范围内存在4个影响苗期耐盐性的QTL,其增效等位基因均来自耐盐品种Pokkali;影响成熟期耐盐性的QTL分布于7条染色体的1或2个连锁区间上,其有利基因来自双亲;RG678和RZ400B~RZ792附近的2个QTL在全生育期都能表达较强耐盐性。 相似文献