利用显性选择标记基因转化稻瘟病菌（英文）

 利用抗药性标记基因(Hygromycin B, hygB)建立稻瘟病菌的转化系统。结果表明， Aspergillus的TrpC转录信号与细菌的hygB抗性结构基因重组的质粒pCSN43可取在稻瘟病菌中表达，该质粒与受体菌无同源顺序，因而有利于对转化菌株进行筛选和分析。 电激法和PEG/Ca^2＋ 法均适用于转化稻瘟病菌，但后者的转化效率比前者高。     

玉米叶肉原生质体瞬时表达系统建立与优化

以玉米B73黄化苗叶片为研究材料，采用酶解法分离并获得高活性的玉米叶肉原生质体细胞，优化PEG-Ca²⁺介导的玉米叶肉原生质体细胞转化条件，探索电击介导玉米叶肉原生质体细胞瞬时转化方法。同时，以荧光蛋白为报告分子融合细胞器定位信号，建立玉米叶肉原生质体亚细胞定位系统，进一步验证该瞬时表达系统具备可用于基因功能研究的可能性。结果表明，通过酶解法分离获得的玉米叶肉原生质体细胞经过FDA染色统计发现，95%的细胞结构完整且活力较高。在PEG-Ca²⁺介导瞬时转化方法中，当PEG浓度40%且质粒量增加至25 μg时转化效率达到最高，为51.28%。在电击介导瞬时转化方法中，当电压为350 V且电击时间为5 ms的条件下电击转化效率最高，为32.66%。通过将核定位信号NLS与eGFP基因融合转入玉米叶肉原生质体细胞，eGFP成功定位于细胞核。通过将叶绿体定位基因ZmMSH1与DsRed2基因融合并转入，DsRed2蛋白成功定位于叶绿体中。在玉米叶肉原生质体细胞中过表达ZmDHDPS基因，通过qRT-PCR和Western Blot等技术确定了ZmDHDPS高表达活性，并显著提高原生质体细胞内游离赖氨酸含量。     

稻瘟病菌一个假想几丁质酶的表达分析

为研究稻瘟病菌几丁质酶在稻瘟病菌形态建成和致病过程中的作用,对稻瘟病菌MGG_08054.6编码的一个假想几丁质酶进行生物信息学分析、基因表达及其融合蛋白分泌特性研究.结果显示:稻瘟病菌基因MGG_08054.6编码的蛋白MoChil与里氏木霉、桔绿木霉、烟曲霉、禾布氏白粉菌已知的18家族几丁质酶(EC 3.2.1.14)蛋白序列同源性大于40%,并具有几丁质酶催化区域的两个保守基序GGW和DG-D-DWE及部分几丁质结合区的活性位点,该蛋白序列经程序SignalP 3.0分析含有信号肽,在16T-17S和26Q-27S处有两个可能的剪切位点;将MGG 08054.6基因在稻瘟病菌Guy11进行过量表达,获得分泌蛋白,证明了该蛋白的分泌特性.半定量RT-PCR分析表明,该基因在不同生长发育阶段及侵染水稻阶段均有表达,其中菌丝阶段表达量最高.     

盐逆境下两个水稻品种根系Na+吸收及质膜ATP酶的作用

 以两个不同耐盐力水稻品种80-85 (耐盐) 和83-51(不耐盐)为材料进行研究。根系Na⁺总吸收随盐胁迫的加重而增高，耐盐品种始终具有较低的Na⁺总吸收和较高的整株K⁺／Na⁺比；在10 mmol／L NaCl浓度下显示出根系具有较低的Na⁺吸收速率和较强的对K⁺选择性，低盐浓度(0.2% NaCl) 对根质膜ATP酶活性略有提高；在高盐浓度(0.5% NaCl以上)下，质膜ATP酶活性受到明显抑制，而耐盐品种受抑程度更大．ATP酶活性的下降与根部Na⁺积累以及K⁺吸收的减少相伴随，推测根系K⁺、Na⁺吸收与质膜ATP酶有关     

稻瘟病菌假定几丁质酶家族基因的表达特点

在稻瘟病菌基因组数据库中检索到15个假定几丁质酶相关基因,借助生物信息学分析,发现这些几丁质酶均具有糖苷水解酶18家族结构域,有的还具有几丁质结合功能域;亚细胞定位分析表明,8个编码蛋白定位在细胞外,其余分别定位在细胞质和线粒体。通过与酵母几丁质酶CTS1与CTS2的聚类分析,发现这些假定几丁质酶可以分为2大类,其中11个假定几丁质酶与CTS2聚为一类,即CTS2同源蛋白;其余4个与CTS1聚为一类,即CTS1同源蛋白。在此基础上,本研究进一步通过Real-time PCR技术分析这些假定几丁质酶编码基因在稻瘟病菌菌丝生长、孢子形成、芽管萌发和附着孢形成阶段的表达模式。结果显示,除了MGG_01876.6,其他14个基因在稻瘟病菌不同生长发育阶段均有表达,说明几丁质酶家族蛋白可能参与稻瘟病菌的生长发育、形态建成和致病过程。     

播娘蒿与甘蓝型油菜的原生质体融合与植株再生

以播娘蒿叶片和甘蓝型油菜子叶为材料提取原生质体.采用PEG-高pH、高钙附加DMSO融合方法,液体浅层静置培养,研究影响播娘蒿与甘蓝型油菜原生质体融合的因素,获得了再生植株.结果表明:4%纤维素酶 0.5%离析酶 5mmol/L MES酶解10b可获得高产率播娘蒿原生质体,1%纤维素酶 0.2%离析酶 3mmol/LMES酶解14h可获得高产率油菜原生质体;30%PEG 0.3mol/L葡萄糖 50mmoL/L CaCl2·2H2O 15%DMSO可获得10%的融合率;改良B5培养基的原生质体培养效果最好;最佳分化培养基为MS 4.0mg/L 6-BA 0.3mg/LNAA 5.0mg/L AgNO3;最佳生根培养基为MS 0.1mg/LIBA 0.1mg/L NAA.     

稻瘟病菌EST酶谱分析技术

采用Ｓ．Ｋ．Ｙ培养液通过恒温摇床培养获得稻瘟病菌菌体，提取其酶蛋白；进行聚丙烯酰胺５～２７％梯度浓度凝胶电泳，染色显带固定后，再进行双波长凝胶扫描。     

拮抗性大豆根瘤菌原生质体制备研究

选用具有拮抗作用的根瘤菌L396,对影响该菌原生质体制备的几个重要因素进行了研究。结果表明:制备原生质体的最佳菌龄为对数生长中期,培养液中加入0.5%青霉素可以促进原生质体的形成,在溶菌酶浓度1.5 mg.mL-1、酶解温度为35℃的情况下可以较快较好的产生原生质体,同时显微观察了原生质体的释放过程。     

用于生物防治水稻纹拮病的抗细菌的筛选

 分别从健康的水稻植株、感染纹枯病植株、根际土壤、秧田水和菌核上分离出能拮抗水稻纹枯病的假单胞菌属(Pseudomonas spp.)和芽胞杆菌属(Bacillus spp.)的细菌菌株，大多数菌株在室内试验中对菌丝生长有抑制作用，有的菌株在温室试验中起抑制病害和对植株有保护作用， 有的(1／49) 具有促进秧苗生长的作用。纹枯病的病斑相对长度与病害发生率密切相关(r²=0.33，P=0.01)， 与抑菌圈大小(r²=0.3)和离体叶片病斑大小(r²=0.12) 无相关，植株干重与病斑相对长度和发病率均无显著相关(r²=0或0.1)。     

水稻抗稻瘟病菌防卫反应的细胞学分析与防卫基因表达

对水稻类病变坏死突变体 lmm1　(LmmKaty)与原亲本及双单倍体YT14和YT16接种稻瘟病菌24 h内的抗病反应、细胞学和分子作用机理进行了研究。人工接种实验表明,与原亲本相比,该突变体对稻瘟病菌具有更强的抗性。突变体接种20~24 h后,自动荧光检测到细胞死亡,而对照则未检测到。表明该突变体通过细胞程序性死亡阻止稻瘟病菌的蔓延,从而提高了抗病性。Northern blotting结果发现,抗病品系YT14中的防卫相关基因、苯丙氨酸解氨酶基因和β 葡聚糖酶基因在人工接种稻瘟病菌6 h后开始表达,16~24 h后上述基因表达量快速增加;而病程相关蛋白基因 PR 1和几丁质酶基因在人工接种稻瘟病菌24 h后才开始表达。与YT14相比,感病品系中上述基因的表达明显延迟。表明在人工接种稻瘟病菌24 h内水稻可启动抗病防卫反应,从而对稻瘟病菌产生抗性。     

Current Status of Conventional and Molecular Interventions for Blast Resistance in Rice

Pyricularia oryzae anamorph of Magnaporthe oryzae is one of the most notorious fungal pathogens causing severe economic loss in rice production worldwide. Various methods, viz. cultural, biological and molecular approaches, are utilized to counteract this pathogen. Moreover, some tolerant or resistant rice varieties have been developed with the help of breeding programmes. Isolation and molecular characterization of different blast resistance genes now open the gate for new possibilities to elucidate the actual allelic variants of these genes via various molecular breeding and transgenic approaches. However, the behavioral pattern of this fungus breakups the resistance barriers in the resistant or tolerant rice varieties. This host-pathogen barrier will be possibly countered in future research by comparative genomics data from available genome sequence data of rice and M. oryzae for durable resistance. Present review emphasized fascinating recent updates, new molecular breeding approaches, transgenic and genomics approaches(i.e. mi RNA and genome editing) for the management of blast disease in rice. The updated information will be helpful for the durable, resistance breeding programme in rice against blast pathogen.     

提高稻瘟病菌转化频率的研究

 为提高pAN7-1质粒导入稻瘟病菌建立的遗传转化体系的转化率，进行了对转化效率影响因子的研究。稻瘟病菌转化溶液中使用50 mmol/L CaCl₂浓度，PEG4000 40%或PEG80000 40%多聚物，添加30 μg鲱鱼精DNA，供体质粒DNA呈直线状都有利转化频率的提高。其中鲱鱼精DNA作用尤为显著，由于添加30 μg鲱鱼精DNA，转化频率高达71.6转化子/μg DNA。42℃热冲击对稻瘟病菌转化并非必需，转化溶液中添加受体菌2539w DNA后，反而引起转化频率的明显下降。     

稻瘟病菌在培养基上有性世代的形成（英文）

选用国际水稻研究所遗传室从水稻上分离的4个稻瘟病菌株,在室温下的燕麦培养基上培养5天,又在20℃连续光照下培养16天,在相对的两个交配型菌株的菌丝联结处产生黑色成熟的子囊壳。稻瘟病菌在培养基上有性世代的形成,为进一步理解梨孢菌属和水稻之间的遗传学以及选育稳定持久的抗病品种提出了新的见识。     

稻瘟病菌分生孢子和水稻蛋白质的相互吸附现象初报

寄主和病原菌间专化性相互作用存在亲和反应和非亲和反应两种方式。蛋白质分子互相作用的研究表明,专化性相互作用经历了病原菌和寄主之间的蛋白质对蛋白质的吸附,相互识别,信息传递等分子信息交流。据报道,寄主蛋白质和病原菌蛋白质彼此有物理的接触,蛋白质之间发生共聚,在感染作用中,病原菌释放一种蛋白质,由于它和寄主蛋白质发生共聚,导致寄主感病;相反,在抗性作用中,病原菌蛋白质与寄主蛋白质不进行共聚,它就促进寄主抗性反应,推测病原菌的蛋白质分子表面上至少包括两个区域:1)在感染性过程中成为共聚作用区。2)在未发生共聚作用时,它同底物键合以启动催化作用,而最终导致抗性。     

水稻与稻瘟病菌的蛋白质─细胞在体外的相互作用初步研究

在离体条件下，用蛋白质双向电泳技术分析水稻与稻瘟病菌在接触反应开始阶段的蛋白质变化情况，以寻找参与寄主与病原菌相互作用的蛋白质分子．结果表明有两个蛋白质与孢子或菌丝体混合后从电泳胶上消失，同时出现了另外两个蛋白质．还没确定两个消失的蛋白质是被菌体细胞所吸附，还是由于被修饰而导致电泳行为改变．上述蛋白质在抗病和感病水稻品种中都存在，是组成型的。推测它们可能参与寄主与病原菌的接触反应．另外还发现，当悬浮培养的水稻细胞与稻瘟菌的菌丝体蛋白质接触后会产生一些新的蛋白质分子，但孢子蛋白无此作用．由此推测水稻与猪瘟病菌的特异性识别反应可能发生在孢子萌发之后和菌丝体阶段．以上结果在亲和与非亲和体系中相同．文中对此现象提出了初步解释，还介绍了一个在离体条件下研究寄主与病原菌的蛋白质－细胞相互作用的简单方法．     

水稻与稻瘟病菌的蛋白质—细胞在体外的相互作用初步研究

在离体条件下,用蛋白质双向电泳技术分析水稻与稻瘟病菌在接触反应开始阶段的蛋白质变化情况,以寻找参与寄主与病原菌相互作用的蛋白质分子,结果表明在两个蛋白质与孢子或菌丝体混合后从电泳胶上消失,同时了出现了另外两个蛋白质,还没确定两个消失的蛋白质是被菌体细胞所吸附,还是由于被修饰而导致电泳行为改变。上述蛋白质在抗病和感病水稻品种中都存在,是组成型的,推测它们可能参与寄主与病原菌的接触反应,另外还发现,当悬浮培养的水稻细胞与稻瘟病菌的菌丝体蛋白质接触后会产生一些新的蛋白质分子,但孢子蛋白无此作用。由此推测水稻与稻瘟病菌的特异识别反应可能发生在孢子萌发之后和菌丝体阶段,以上结果在亲和与非亲和体系中相同。文中对此现象提出了初步解释,还介绍了一个在离体条件下研究寄主与病原菌的蛋白质-细胞相互作用的简单方法。     

几个籼稻品种对稻瘟病抗性的遗传分析

用感稻瘟病品种二九青与4个抗病品种杂交的 F₁、F₂、B₁F₁经4个不同菌系的稻瘟病菌孢子悬浮液分别进行人工接种,然后考查其抗性反应。结果表明红脚占、砦糖、Tetep 和74-5461BG 等籼稻品种对 ZB1、ZB15、ZC15、ZC3菌系的抗性均分别由显性抗性基因 Ipi-1、Ipi-2、Ipi-3和 Ipi-4控制,同时这4个抗性基因还存在着紧密的连锁关系。等位性测定也表明4个品种所具有的抗性基因都是各各等位的。     

稻瘟病菌类LxAR家族基因的预测及表达分析

在侵染水稻过程中,稻瘟病菌分泌一系列效应因子来抑制寄主免疫系统。无毒效应因子AVR Pii和AvrPiz-t的氨基酸序列含有类LxAR基序,基于此,本研究利用生物信息学技术,从稻瘟病菌基因组中筛选获得了99个含有类LxAR基序的假定效应因子(MoLLEs)。该家族蛋白都为小分子蛋白(70~300 aa),富含半胱氨酸氨基,绝大多数为未知功能的蛋白。24个蛋白含已知的功能域,可能涉及了多种生命过程,其中有9个蛋白编码植物细胞壁降解酶。通过表达模式分析发现,MoLLEs家族基因成员的表达受到饥饿胁迫、附着胞生长发育以及侵染水稻等过程的诱导,此外一部分基因受到附着胞发育关键基因PMK1调控。基因表达交叉分析表明,部分基因同时在附着胞发育和致病过程中上调表达。在与水稻的相互作用中,MoLLEs在稻瘟病菌侵染不同阶段均有上调表达,并且部分基因受亲和或非亲和反应特异性诱导。      

胶乳生物凝固中活性干菌种的凝固效果比较

比较不同条件下制得的活性干菌种对天然胶乳的凝固效果，结果表明：筛选出最佳载体B与湿菌体配比为2∶1，菌体培养时间为2～3 d，所制得干菌种对胶乳的凝固效果最好，所制成的活性干菌种和液体菌种一样能进行鲜胶乳的连续凝固。