悬铃木叶片再生体系的建立

以悬铃木为试验材料 ,系统地研究了激素浓度、叶片生理状态、光照条件等诸多因素对叶片再生的影响 ,建立了悬铃木叶片外植体的不定芽高频再生体系。研究结果表明 ,以顶部充分伸展的 4 0d叶龄的无菌苗叶片为外植体 ,再生效果最好 ,将此类叶片放在含 1 5mg·L- 1 6 -BA ,0 5mg·L- 1 IBA和 0 5mg·L- 1 KT的MS分化培养基上 ,暗培养 7d后转到光下培养 ,15d后便可见到不定芽不经过或经过很少的愈伤组织阶段 ,直接从叶片上分化产生 ,出现的高峰期在接种后的 2 0～ 30d ,芽分化率高达 98%以上。待小芽长至 1～ 2cm ,将其从叶片上切下 ,转到芽伸长培养基 (MS 0 3mg·L- 1 6 -BA 0 0 5mg·L- 1 NAA 30mg·L- 1 Ad)上使小芽长大成苗 ,最后移到生根培养基(1 2MS 0 1mg·L - 1NAA)上 ,最终得到完整的植株。该再生体系可作为基因转化的受体系统。     

Establishment of an Efficient Regeneration System of Populus × euramericana cl.‘ Bofeng 1’

与白杨派树种相比,黑杨派树种一直因组培再生困难而限制了其在林木基因工程研究中的应用.本文以欧美杨优良新品种——渤丰1号为试验材料,以其再生培养基中的植物生长调节剂配比、铜离子浓度、光照强度、卡那霉素选择压等方面为切入点开展研究,建立了渤丰1号杨高效组培再生体系.使用该再生体系时,外植体的分化率和生根率均达100％,叶片的平均分化芽数多达20个以上,组培苗移植成活率可达98％,40 mg· L-1卡那霉素可以抑制渤丰1号杨叶片的诱导与分化,20 mg· L-1卡那霉素可以抑制渤丰1号杨不定芽的生根；同时发现铜(Cu)元素是渤丰1号杨外植体分化再生的一个关键因素,增加Cu2+浓度能显著促进不定芽的诱导和分化.     

利用山新杨萌生枝叶片建立无菌系的研究

以山新杨(24年生)优树的2年生萌生枝上的叶片为材料,进行了不同培养基及不同影响因子对山新杨叶片不定芽再生能力影响试验,结果表明:山新杨叶片再生的最适合培养基是1/2MS+BA0.5 mg.L-1+NAA0.1~0.2 mg.L-1,再生频率达100%,叶片培养的最佳取材部位是树枝茎尖展叶开始第1~3片叶;叶片正面向上或向下接种的培养基,对其形成不定芽无显著影响。     

银中杨叶片外植体再生体系的建立

以银中杨叶片为外植体,建立了高效的再生体系。经正交试验筛选出银中杨组织培养的最适基本培养基为MS培养基,最佳不定芽诱导培养基为MS BA1.0mg.L-1 NAA0.05 mg.L-1,最佳暗培养时间为4d,最佳不定芽生根培养基为1/2 MS NAA0.05 mg.L-1 IBA0.01mg.L-1。     

麻疯树叶盘法高效再生的研究

以温室中1年生麻疯树顶端幼嫩叶片为外植体,研究了在MS基本培养基中添加不同浓度的6-苄基腺嘌呤(6-BA)和吲哚丁酸(IBA)对不定芽再生的影响,并采用60天暗培养的方法筛选出愈伤组织诱导和不定芽诱导的最佳激素组合为MS+5 mg.L-16-BA+0.5 mg.L-1IBA,该组合的不定芽诱导率高达75.8%。将该组合诱导出的愈伤组织接种至MS+1.5 mg.L-16-BA+0.05 mg.L-1IBA的固体培养基中,研究了赤霉素对不定芽再生的影响,最佳赤霉素浓度为0.05 mg.L-1,麻疯树叶盘再生率达到90.9%,平均不定芽个数达到4.6个。     

欧美杨111号组织培养再生体系的建立

以欧美杨111号叶片为外植体,以MS和1/2MS为基本培养基,附加不同浓度的NAA、6-BA和IBA,观察不定芽诱导和生根情况,确定欧美杨111号植株再生体系。结果显示:欧美杨111号叶片最佳分化培养基为MS+6-BA 0.5 mg·L~(-1)+NAA 0.1 mg·L~(-1)+蔗糖25 g·L~(-1)+琼脂6 g·L~(-1),pH值6.5,不定芽分化率为96.67%;最佳生根培养基为1/2MS+IBA 0.3 mg·L~(-1)+蔗糖20 g·L~(-1)+琼脂6 g·L~(-1),pH值6.0,全部生根,平均根数13.2条。     

欧美杨108高效组培再生系统

欧美杨108生产性状优良,是基因工程转化的理想受体,高效的组培再生系统是转化工作的基础。以欧美杨108茎段、叶柄、叶片3种外植体为起始材料,确定了植株再生过程中诱导丛生芽、芽的茎伸长和生根培养的最优培养条件,建立了稳定高效的再生培养系统。结果表明:基本培养基MS优于WPM;最适从生芽诱导培养基为MS+TDZ 0.05 mg/L+6-BA 0.05 mg/L+NAA 0.05 mg/L+蔗糖30 g/L,茎段、叶柄、叶片3种外植体丛生芽诱导率分别达100%、100%和86%。丛生芽需要进行茎伸长诱导的环节,茎伸长诱导效率最高是MS+KT 0.5 mg/L+GA3 2 mg/L+果糖30 g/L培养基,茎段和叶柄丛生芽茎伸长诱导最好,诱导培养20 d,得到平均芽长3 cm的有效芽,增殖系数大于4。抽茎芽转入生根培养前,须经MS基本培养基壮化培养。在1/2 MS+IAA0.02 mg/L+IBA 0.02 mg/L+AC3 g/L+蔗糖30 g/L培养基上,试管苗生根率可达100%,苗体健壮。欧美杨108高效组培再生系统为其遗传转化奠定了基础。     

地被菊间接体细胞胚发生途径的转基因受体体系的研究

采用三步培养法建立了地被菊花品种‘玉人面'间接体细胞胚发生途径的转基因受体体系.试验以地被菊花品种‘玉人面'茎段(节间)为外植体,研究了生长调节剂、光照强度等因子对其间接体细胞胚诱导和分化的影响,同时进行了抗生素敏感性试验.结果表明:胚性愈伤组织诱导培养基为MS KT 2.0 mg·L-1 2,4-D 2.0 mg·L-1 NAA 0.5 mg·L-1,诱导15 d后,将获得的黄绿色致密颗粒状胚性愈伤组织转入胚性愈伤组织分化培养基MS KT 2.0 mg·L-1 2,4-D 1.0 mg·L-1 NAA 0.5 mg·L-1中,诱导15 d后再转入MS KT 2.0 mg·L-1 NAA 0.5 mg·L-1的分化培养基中培养20 d,光照强度为1 000～2 000 lx,胚性愈伤组织诱导率、分化率分别为95.3%、92.7%,平均每个外植体分化的芽数为17.8个,获得的再生芽的稳定性为99.5%.抗生素敏感性试验表明:地被菊花品种‘玉人面'间接体细胞胚发生途径的转基因受体体系中,卡那霉素选择压为20 mg·L-1;头孢霉素在胚性愈伤组织诱导时的选择压为300 mg·L-1,在胚性愈伤组织分化培养时选择压为100 mg·L-1.     

菊花叶片外植体再生体系的研究

以不同品种地被菊的无菌苗叶片为外植体,在附加不同浓度植物生长调节剂NAA和6-BA的MS基本培养基上诱导培养,通过器官直接发生途径获得再生植株。结果表明:不同地被菊品种的叶片外植体再生不定芽的能力差异极大。再生能力强的品种其培养基中生长调节剂配比的浓度也是不同的,‘铺地金’再生的最适宜培养基为MS 6-BA2mg.L-1 NAA1mg.L-1,再生率为96%;‘北林红’再生的最适宜培养基为MS 6-BA1mg.L-1 NAA0.5mg.L-1,再生率为96%。无菌苗继代培养时间对地被菊叶片外植体的形态发生能力有不同的影响,其中‘铺地金’品种高频再生能力保持的时间很长,适合做基因转化的受体系统。     

激素对复叶槭茎段和叶片愈伤组织诱导及再生的影响

以复叶槭的茎段、叶片为外植体,以MS为基本培养基,附加多种激素配比试验,结果表明:叶外植体在各种培养基上均形成愈伤组织,但没有出现芽的分化。茎段外植体在多种培养基上均产生愈伤组织,但仅在MS+0.000 5mg.L-1TDZ+0.01 mg.L-1NAA培养基上出现再生芽,芽的分化率为22.8%,在MS+0.1 mg.L-1NAA上生根率为83.3%,移植后成活率为86.2%。     

矮牵牛'Tidal Wave'品种受体再生体系的建立

文章对矮牵牛‘Tidal Wave’品种进行组织培养快速繁殖和再生的初步研究。以矮牵牛无菌苗叶片为外植体,在附加不同浓度激素的MS基本培养基上诱导培养,通过器官发生途径获得再生植株。在附加3.0mg.L-1BA,0.3mg.L-1NAA的培养基上获得90%以上芽的再生率。再生芽在附加0.02mg.L-1NAA,1.0mg.L-1KT,5.0mg.L-1GA3的培养基上发育良好;初期继代时适合的生根培养基为1/2MS附加0.1mg.L-1NAA,多次继代后适合的生根培养基为1/2MS。     

毛白杨叶片再生系统的建立

该文选用三倍体毛白杨的叶片作为外植体 ,MS作为基本培养基 ,采用不同组合的BA和NAA作为植物生长调节剂对毛白杨再生系统进行研究 .结果表明 ,在MS培养基中单独添加 1 5mg·L-1BA时 ,不定芽分化率为 90 % ,同时伴随一定程度的玻璃化现象 .单独添加 0 3mg·L-1NAA时 ,不定根产生率最高 (90 % ) ,但无不定芽生成 .采用 1 0mg·L-1BA + 0 3mg·L-1NAA组合搭配时 ,不定芽分化率最高 (95 % ) .在此基础上 ,采用M1(MS + 1 0mg·L-1BA + 0 3mg·L-1NAA)培养基 ,研究了不同着生位置的叶片、同一着生位置叶片的不同切段以及叶片在培养基上的放置方式对毛白杨叶片再生的影响 .结果表明带有叶柄的下切段比其余叶片切段不定芽再生率高 ,幼嫩叶片比老化叶片再生率高 ,叶片近轴端向下接触培养基比远轴端向下接触培养基再生率高 .叶片再生系统的建立为毛白杨的遗传转化奠定了基础     

五叶地锦离体培养及植株再生

以五叶地锦(Parthenocissus quinquefolia)子叶柄、下胚轴、叶片为外植体进行离体培养,以1/2 MS、B5和Heller为基本培养基,附加不同浓度的细胞分裂素(6-BA,KT, TDZ)及生长素(NAA)诱导下胚轴直接再生不定芽.实验结果表明,暗处理30 d,靠近下胚轴的子叶柄接种在1/2 MS 0.3 mg·L-16-BA培养基上,其不定芽分化率最高达64.67%;下胚轴接种在1/2 MS 2.0 mg·L-1KT 0.05 mg·L-1NAA和Heller 0.5 mg·L-1BA 0.1 mg·L-1NAA培养基上,其不定芽分化率接近,达到24%左右;无菌苗的叶片接种在B5 0.5 mg·L-1TDZ 0.05 mg·L-1NAA培养基上,其不定芽分化率达17.7%.芽增殖培养基为1/2 MS 0.5 mg·L-16-BA 0.1 mg·L-1NAA增殖系数为3～5, 1/2 MS 0.5 mg·L-1IBA 500 mg·L-1活性炭适于再生幼苗的生根,生根苗经移栽全部成活.     

银中杨茎段离体培养再生植株研究

以银中杨茎段为外植体,建立组织培养系统.试验结果表明,MS为最适基本培养基;各激素对诱导不定芽的作用大小为TDZ＞6-BA＞KT,诱导不定芽的最佳培养基为MS+0.1 mg·L-1TDZ+蔗糖20 g·L-1+琼脂0.7%;诱导不定芽再生的最佳光质为白光或黄光;生根培养基以1/2MS+0.5 mg·L-1IBA+蔗糖2...     

枣树叶片愈伤组织培养与再生植株的研究

为探讨枣树组织培养育种及快繁技术,以木枣、骏枣和狗头枣组培苗叶片为外植体,通过诱导愈伤组织形成再分化出不定芽,从而建立高效的再生系统。试验结果表明,不同基因型或同一基因型的不同部位的材料其培养效果间有差异;试管枣苗茎尖倒数1～3片叶是合适的外植体材料;6-BA与2,4-D在枣树叶片愈伤组织诱导中有极显著的交互作用,二者的配比浓度水平影响愈伤组织的诱导增殖和质量;枣树叶片愈伤组织诱导和继代增殖培养适宜的培养基是3/4MS+6-BA0.2 mg.L-1+2,4-D 2.0 mg.L-1+琼脂0.55%+蔗糖3%。6-BAI、BA与TDZ在枣树愈伤组织分化培养中有显著的协同作用,不定芽诱导的适宜培养基是CYI+6-BA 1.0 mg.L-1+IBA 0.2 mg.L-1+TDZ 0.015 mg.L-1。     

农杆菌介导的杜仲叶片愈伤组织遗传转化体系

【目的】优化杜仲叶片愈伤组织的再生体系,研究愈伤组织对抗生素和抑菌剂的敏感性,探索影响农杆菌介导杜仲愈伤组织遗传转化的最适转化因子水平,构建农杆菌介导的杜仲愈伤组织瞬时转化体系,使杜仲成年植株外植体为受体的遗传转化成为可能,为杜仲基因功能的研究与定向改良奠定基础。【方法】以杜仲成年植株叶片为材料诱导愈伤组织,通过添加不同浓度植物生长调节剂与大量元素的MS培养基进行不定芽的诱导与增殖,确定最适培养基。在此基础上,在培养基中添加不同浓度抗生素及抑菌剂,研究愈伤组织对其敏感性。以获得的叶片愈伤组织受体系统为基础,通过L_(16)(4~5)的正交试验,探索不同转化因子对农杆菌介导叶片愈伤组织遗传转化的瞬时转化效率的影响,建立最适瞬时转化体系。使用获得的瞬时转化体系对愈伤组织进行遗传转化操作,筛选抗性芽,对抗性芽进行GUS组织化学染色与PCR检验。【结果】再生体系优化的结果表明,3/4大量元素浓度的MS培养基能够促进杜仲愈伤组织不定芽的诱导及生长;愈伤组织诱导不定芽的最适培养基为3/4MS+0. 27μmol·L~(-1)NAA+4. 4μmol·L~(-1)6-BA,诱导率为83%±10. 0%;不定芽复壮的最适培养基为3/4MS+0. 054μmol·L~(-1)NAA+4. 4μmol·L~(-1)6-BA,平均伸长长度为(2. 47±1. 33) cm。抗生素与抑菌剂敏感性试验表明,遗传转化的选择培养基中,抑菌剂头孢霉素的最适浓度为200 mg·L~(-1),筛选用的抗生素卡那霉素最适浓度为70 mg·L~(-1)。转化因子的正交试验表明,最适的农杆菌介导杜仲叶片愈伤组织遗传转化的转化因子组合为:预培养5天、侵染10 min和共培养3天。使用最适瞬时转化体系对约200个愈伤组织进行遗传转化操作,共筛选获得3个抗卡那霉素的抗性芽; GUS组织化学染色显示GUS基因在抗性芽中得到了表达,PCR检测证明这些抗性芽中存在NPTⅡ基因。【结论】杜仲叶片愈伤组织诱导不定芽的最适培养基为3/4MS+0. 27μmol·L~(-1)NAA+4. 4μmol·L~(-1)6-BA,不定芽复壮的最适培养基为3/4MS+0. 054μmol·L~(-1)NAA+4. 4μmol·L~(-1)6-BA。农杆菌介导的杜仲叶片愈伤组织瞬时转化体系为:预培养5天、侵染10 min和共培养3天,筛选培养基为3/4MS+0. 054μmol·L~(-1)NAA+4. 4μmol·L~(-1)6-BA+200 mg·L~(-1)Cef+70 mg·L~(-1)Km。利用此体系共获得3个抗性芽,PCR分析和GUS组织化学染色都表明T-DNA已整合到抗性芽基因组中。     

杨树诱导芽分化中6-BA和NAA配比优化研究

以杨树无性系LH05-143的叶柄为外植体,利用二次回归正交试验设计对其再生诱导不定芽中的影响因素6-BA和NAA的浓度进行定量优化,实现对再生系统中芽诱导试验影响因子植物激素浓度的优化,同时扩充了再生系统的外植体资料,为再生体系增加了重要的内容。试验结果表明:诱导培养基中6-BA浓度为1.75mg/L、NAA浓度为0.30mg/L时,叶片分化不定芽数可以达2.68;而6-BA浓度为1.74~2.64mg/L,NAA浓度为0.06~0.73mg/L范围内时,有95%的可靠性产生不定芽的叶片分化不定芽数大于1.5。     

杨树新品种‘朝霞杨’

‘朝霞杨’是欧美杨107杨的芽变品种。该品种苗干通直,树冠窄。春季叶片为紫红色,生长旺盛期叶色转为紫色,秋季渐转为浅紫色。叶片较‘欧美杨107杨’略小;叶芽为褐色,较欧美杨107杨小;苗木停止生长时间和落叶期较欧美杨107杨晚5~7天。朝霞杨成年树主干红褐色。     

小油桐外植体分化及植株再生影响因素的初步研究

研究发现在MS培养基中添加6-BA 3 mg.L-1+IBA 0.5 mg.L-1的激素对小油桐苗质及外植体分化有明显促进作用。15 d苗龄的小油桐幼苗外植体有较高的分化率。正交实验研究最佳分化激素浓度,发现6-BA+IBA组合对小油桐外植体芽苗诱导效果明显优于6-BA+NAA组合。子叶再生芽诱导最佳培养基为MS+6-BA 3 mg.L-1+IBA 0.5 mg.L-1,最高诱导率为82.9%;下胚轴再生芽诱导最佳培养基为MS+6-BA 2 mg.L-1+IBA 0.2 mg.L-1诱导率为23.8%。在子叶和下胚轴再生培养基中添加1 mg.L-1的AgNO3能促进小油桐植株再生,并抑制褐化产生。小油桐再生苗最佳生根培养基为WPM培养基。     

木棉离体再生体系的建立

为给木棉的快速繁殖和转基因研究奠定基础,以木棉下胚轴为外植体,探讨基本培养基种类、植物生长调节剂组合和AgNO3等因素对木棉不定芽诱导和植株再生的影响,建立了下胚轴高效再生体系。结果表明:MS+6-BA 1.5 mg.L-1+NAA 0.1 mg.L-1+KT 0.5 mg.L-1+AgNO31.0 mg.L-1+蔗糖30 g.L-1培养基最适合不定芽的分化和增殖,不定芽分化率达72%,平均每外植体分化不定芽数达3.85个。较适生根培养基为MS+NAA0.5 mg.L-1,生根率达到90%。