原生质体诱变技术选育糙皮侧耳秸秆分解菌株

[目的]为了更有效地开发利用可再生资源秸秆。[方法]以糙皮侧耳为出发菌株,采用酶解法制备原生质体,进行紫外线诱变处理,经初筛、复筛选育高效分解秸秆的菌株。[结果]随着照射时间延长,原生质体再生率下降。原生质体半致死照射剂量约为25 s。原生质体紫外诱变处理后,获得菌株08P217,其各种木质素酶酶活和纤维素酶酶活都远远高于出发菌株,木质素降解率与漆酶酶活呈明显的正相关,与木素过氧化物酶酶活和锰过氧化物酶酶活无相关性。菌株08P217的木质素和纤维素的降解率分别为出发菌株的1.75、1.71倍。[结论]菌株08P217的木质素酶酶活和纤维素酶酶活高于出发菌株,木质素和纤维素的降解能力优于出发菌株,可以作为秸秆开发利用的潜在应用菌株。     

基于BSA-seq技术挖掘糙皮侧耳抗螨候选基因

根据前期不同糙皮侧耳菌株抗螨性差异调查结果,构建了糙皮侧耳孢子单核体群体,群体内479个菌株抗螨性呈正态分布。利用BSA-seq技术对高抗和高感混池进行SNP和InDel位点的欧氏距离关联分析,将抗螨性候选基因定位到一条染色体上,2个相邻候选区域总长度为1.75 Mb,内有基因605个,其中非同义突变基因353个,移码突变基因89个。经功能注释以及GO和KEGG通路富集等分析,发现26个候选基因参与了信号传导、防御过程和次级代谢相关通路,推测这些候选基因可能与糙皮侧耳抗螨性相关。     

银杏叶对糙皮侧耳菌丝体生长的影响

银杏因含黄酮类、内酯类、酚类等多种活性成分而具有重要的药用价值.本研究在PDA培养基中分别加入各个月份不同质量分数的银杏叶粉末,制成不同月份不同浓度的斜面培养基,进行糙皮侧耳菌丝体培养试验,观测银杏叶对糙皮侧耳菌丝体生长的影响.对测试结果进行方差分析表明:培养基中加入银杏叶粉末后都对糙皮侧耳菌丝体生长有一定的促进作用.其中10月份采集的含量为5 g/L的银杏叶粉末对糙皮侧耳菌丝体促生作用最强且为最佳浓度.     

糙皮侧耳降解玉米秸秆木质素的研究

试验研究了影响糙皮侧耳对玉米秸秆中木质素降解的因子。采用单因素试验设计,由正交试验优化组合各个因素,确定氮素的添加量,最后确立发酵时间。结果表明,料液比为1：2．5,pH为5．5,培养温度为28℃时,在原有发酵料的基础上添加尿素1％,接种培养糙皮侧耳10d后,玉米秸秆的处理效果最佳,此时ADL降解率和DM损失率分别为38.64%和14.78%.     

糙皮侧耳对培养料中木质纤维素的降解研究

对糙皮侧耳生长期间菌丝胞外酶的活性以及培养料中木质纤维素含量、单糖组成和分子量的变化进行了研究.结果表明:在糙皮侧耳生长过程中,培养料中的木质素、半纤维素和纤维素含量和分子量显著下降;漆酶和锰过氧化物酶的活性呈先增加后降低的趋势,峰值(分别为3.38和1.62 U/mL)出现在发菌末期;木聚糖酶和羧甲基纤维素酶的活性随...     

糙皮侧耳P5漆酶酶学性质的初步研究

对糙皮侧耳P5漆酶的酶学性质进行了研究.结果表明,该酶的最适反应温度为63℃,最适反应pH为6.0;该酶的酸碱稳定性和温度稳定性较好,在pH5.0～6.5条件下处理24h可保留97％以上的酶活,4～20℃处理1h酶活保持不变,60℃处理1h可保留80％以上的酶活;金属离子对漆酶酶活有明显的影响,Cu2+、Mn2+、Zn2+对酶的活性有促进作用,Ca2+、Fe2+、Fe3+和Pb2+对酶的活性有抑制作用.该结果可为耐高温漆酶的开发利用提供参考.     

侧耳菌原生质体融合子的子实体发育及遗传重组

通过原生质体融合技术得到侧耳菌亲和与非亲和菌种的融合产物,亲和菌种间体细胞杂交得到异核体,而非亲和菌种杂交得到保留有双亲基因的结合体（核）。结合核子实体发育受光照、温度、营养及培养基的物理状态等因素影响。结合体不能形成初始融合菌落,但大多数成熟的子实体中存在锁状联合,与异核体相比,结合体具生长速率缓慢,有丝分裂阶段形成锁状联合及子实体发育不同步等特点。体细胞杂交后代可以分离到四种遗传型菌落：原养型、一种亲本营养缺陷型、另一亲本营养缺陷型及重组子营养缺陷型。一些结合体具备异常等位基因,说明在受体细胞染色体重排中有大片段随机整合位点。     

低温诱导糙皮侧耳菌丝成熟的机制研究

为探究低温诱导糙皮侧耳菌丝成熟的机制,为糙皮侧耳在实际栽培与生产中提供理论依据与技术支撑,以糙皮侧耳菌株“双抗黑平”为试验材料,测定不同温度诱导处理后糙皮侧耳的出菇情况及菌丝生理指标的变化。设置3种不同温度处理,分别为对照组(25℃)、低温处理组(17℃)、高温处理组(33℃)。结果表明,经低温17℃诱导处理糙皮侧耳后可正常出菇,而25、33℃诱导处理后均无原基形成,无法形成子实体。经不同温度诱导处理后,DAB染色显示处理组中菌丝的染色程度较深。经不同温度诱导处理后,处理组中可溶性糖、可溶性蛋白和游离脯氨酸的含量显著高于对照组(P<0.05),并且33℃高温处理组中各个物质的含量最高;丙二醛和相对电导率的变化趋势基本一致,均是处理组显著高于对照组(P<0.05);菌丝中CAT活性的大小依次为33℃处理组>17℃处理组>25℃处理组;高温处理组菌丝POD活性最高,达到115.63 U/(g·min),但17℃处理组与对照组无明显差别(P>0.05);不同温度诱导处理7 d,对照组中SOD活性最高,然而经12 h和24 h处理后,处理组显著高于对照组。     

香菇种间原生质体融合

以爪哇香菇（Ｌｅｎｔｉｎｕｓｊａｖａｎｉｃｕｓ）和香菇（Ｌｅｎｔｉｕｎｓｅｄｖｌｕｅｓ）为亲本进行种间原生质融合。以营养缺陷型和单亲原质体灭活为融合子筛选标记，ＰＥＧ－Ｃａ＾２＋系统促融合，在ＩＲＭＭ培养基上检出融合子，经荧光核杂色，拮抗试验，同工酶谱分析等检验融合子，通过固体栽培试验选出可以结实的融合子Ｆ０４菌株，试验结果显示，Ｆ０４具有生长快，易结实的特性。     

醋糟料平菇蛋白质营养价值定量分析与评价

本文按照蛋白质的质量标准，运用数学计算公式，分别计算出醋糟平菇（试验）和棉籽壳平菇（对照）的蛋白质营养价值的三项指标值．通过定量分析，结果表明：虽然醋糟料平菇的蛋白质含量低于棉籽壳平菇，但其蛋白质质量却高于棉籽壳平菇，这说明醋糟料并不会降低平菇的质量，从而为进一步推广使用醋糟料栽培平菇提供了依据．     

香菇金针菇远缘亲本原生质体融合及融合子检测

采用１５ｇ／Ｌ溶壁酶处理获得了香菇单核体Ｌ３８－Ｓ０３，Ｌ５２－＾ａｄｅ和金针菇单核体Ｆｖ１１－Ｓ２３的原子质体。１ｇ／Ｌ焦磷酸二乙酯灭知的Ｌ３８－Ｓ０３和腺嘌呤缺陷型Ｌ５２－＾ａｄｃ的原生质分别与８ｇ／Ｌ碘代乙酰胺灭知的Ｆｖ１１－Ｓ２３的原生质体进行ＰＥＧ－Ｃａ＾２＋促融合，在ＲＣＭ，ＩＲＭＭ培养基上再生，得到１４２个融合子，其中１７个菌株能结实出菇。筛选出Ｆ０１，Ｆ０２和Ｆ０３的３个融合子菌株     

黄瓜和南瓜原生质体融合研究

黄瓜子叶原生质体经１０μｇ／ｍｌ诺丹明６Ｇ（Ｒ６Ｇ）处理１５ｍｉｎ,南瓜和黑籽南瓜子叶原生质体分别经１．０ｍｍｏｌ／Ｌ和１．３ｍｍｏｌ／Ｌ碘乙酸（ＩＯＡ）处理１０ｍｉｎ,均发生生理性失活。采用聚乙二醇和高钙高ｐＨ法融合后,双亲融合体恢复分裂能力。同工酶鉴定表明,黄瓜和南瓜,黄瓜和黑籽南瓜均获得了体细胞杂种愈伤组织。     

香菇原生质体融合的研究

把经过纯化的香菇单核营养缺陷型(?)原生质体,与碘代乙酰胺灭活的野牛菇 L_(81-39)_4,原生质体用PEG 进行融合,在双层再生培养基上培养,挑得融合子5株:F_4,F_6,F_(11),F_(17),F_(18)。用荧光染色法,对亲本及融合子菌丝的单核和双核进行详细观察和鉴定.融合子 F_4,F_6,F_(18) 出菇表明,菇形偏近 L_(81-39),但菌柄较短,菌盖较大且略厚;F_(17)的菇色,肉质程度偏向于 L_(52);F_(11)出菇多,但个体小,色淡,菌盖薄。酯酶同工酶测定结果表明:F_(11),F_(17)都有双亲所具有的9条谱带中的7条,R_f值为:0.683,0.792,0.833,0.850,0.875,0.892,0.917.F_4缺少 F_(11)和 F_(17)所具有的 R_r=0.683的谱,F_6缺少 R_f=0.683和R_f=0.850的谱带.融合子都没有表现出 L_(81-39)的 R_f=0.733,L_(52)的 R_f=0.667这二条谱带。此外,融合了都有一条双亲没有的 R_f=0.808的谱带。     

用原生质体融合法获得稻恶苗菌异核体

用紫外线照射稻恶苗菌(Glbberella fujikuroi)野生型分生孢子9～12 min,存活率为0.6%～23%,得到单标记营养缺陷型突变菌株5株。选出1144(ade~-)、1184(arg~-)和1175(try~-)3株,用亚硝基胍诱变处理,得到双重标记的营养缺陷型突变菌8株。将11442(ade~-,pba~-)和11844(arg~-,try~-)两菌株用原生质体融合技术使它们形成异核体。用2%蜗牛酶加2%纤维素酶以0.6mol/L NaCl 液作渗透压稳定剂制成混合酶液,裂解幼嫩菌丝1.5～3 h,获得2×10'个/g 菌丝的原生质体。经35%PEG 融合剂将等量原生质体融合,获得异核菌落230个。经过进行排除营养互养的实验;对4株异核体菌株进行子代分离的遗传学分析;发现其两种核型的比例在1:1.4～1:8.5之间;对4株异核体还进行酯酶同功酶的测定。证明这4株菌株是异核体。     

灭活黑曲霉与中期啤酒酵母原生质体融合的研究

用ＰＥＧ促融剂使经硫酸二乙酯灭活的黑曲霉ＡＭＳ－１１的原生质体与细胞分裂中期折啤酒酵母ＲａｓｓｅⅫ原生质体融合，在选择性培养基上获得了能利用羧甲纤维素作唯一碳源的杂种酵母菌株ＦＡＳＳ１及ＦＡＳＣ１，经测定其ＤＮＡ量，蛋白质电泳谱带，生长曲线和碳源同化等项目，它们将具有双亲菌株的特征性状。     

蛋白酶对曲霉原生质体稳定性再生及融合的影响

４种蛋白酶对黑曲霉，米曲霉原生质体稳定性，再生有主融合的研究结果表明，蛋白酶用于原生质体灭活前或后保温均显著降低原生体数量，同时提高原生质体再生率及灭活性原生质体融合指数。蛋白酶安全，无毒可以替代常规促融合剂聚乙二醇。