热滞蛋白在低温冷冻保存卵母细胞和胚胎中的作用

近来一些短期或长期保存卵母细胞和胚胎的研究结果表明,热滞蛋白(thermal hysteresis protein,THPs)或称抗冻蛋白(antifreeze proteins,AFPs),在低温(4C)和超低温(-130～-196℃)下,能与细胞膜相互作用,保护卵母细胞和胚胎。热滞蛋白的这种保护作用与其浓度和种类有关,在玻璃比快速冷冻中,所需THPs的最低浓度为40mg/ml,而在慢速冷冻或低温(4℃)短期保存(1～4天)胚胎中,其适宜浓度范围为0.1～1mg/ml,所需浓度取决于THPs的种类。THPs与玻璃化液相互作用,稳定玻璃化液;同时也与细胞膜相互作用,稳定细胞膜,而细胞膜正是玻璃化冷冻时首先受损伤的部位。THPs为冷冻保存人和动物配子提供了新的保护物质。     

哺乳动物卵母细胞的超低温冷冻保存

叙述了哺乳动物卵母细胞超低温冷冻保存的研究进展，分析了影响卵母细胞超低温冷冻保存后存活率的关键因素，推荐了较为成效的卵母细胞超低温冷冻保存方法，认为哺乳动物卵母细胞低温保存技术的应用潜力巨大。     

哺乳动物卵母细胞与胚胎冷冻保存的研究进展

1卵母细胞与胚胎冷冻保存的意义随着胚胎工程技术和低温生物学的不断进步,研究人员对哺乳动物的生殖细胞和组织的冷冻保存作了大量的研究。卵母细胞与胚胎的冷冻保存是胚胎生物技术的重要组成部分,它不仅可为体外受精、核移植、胚胎移植、转基因动物研究等胚胎工程技术提供具有     

卵母细胞冷冻保存研究进展

1977年Whittingham首次成功报道冷冻一解冻小鼠MⅡ期卵母细胞产仔,自此许多学者对多种动物及人卵母细胞冷冻保存进行了研究。目前小鼠、家兔、牛、马、山羊、绵羊及猪等动物卵母细胞的冷冻保存均有报道,而世界上已经有100多个冷冻卵母细胞的婴儿出生。卵母细胞的冷冻保存可为体外受精、核移植、转基因动物的研制提供更方便的材料来源;[第一段]     

家畜卵母细胞冷冻保存研究进展

自Whittingham(1977)首次成功的报道冷冻-解冻的小鼠卵母细胞活仔以来，国内外诸多学者对家畜及人的卵母细胞冷冻保存进行了研究。目前，已有小鼠、家兔、牛等动物以及人的卵母细胞冷冻成功，并得到了后代。在国内，山羊、绵羊、猪等家畜的卵母细胞冷冻保存也已有报道。随着胚胎工程技术的不断发展，卵母细胞的冷冻保存越来越受到重视，这将推动卵母细胞的冷冻保存取得更大进展。     

动物胚胎冷冻保存技术的研究及应用

综述了各种冷冻方法的操作过程以及所需的低温保护液，并对各种方法的优缺点进行了探讨，最后介绍了胚胎冷冻保存方法的应用前景。     

哺乳动物胚胎玻璃化冷冻保存概况及其常用方法

哺乳动物卵母细胞和胚胎的超低温冷冻保存技术,是胚胎移植、体外受精、转基因和克隆等生物技术不可缺少的部[1].Rall和Fahy于1985年首次报道了用玻璃化方法来冷冻保存小鼠胚胎,这种方法不仅大大简化了冷冻过程,而且减少了由于细胞冰晶形成所引起的一系列物理及化学损伤,提高了冷冻效率[2].     

热休克蛋白对胚胎早期发育的影响

热休克现象是1962年R itossa首先在果蝇幼虫动物试验中发现的。试验发现,果蝇唾液腺染色体在过热环境中会发生形态改变。此现象与细胞中一类特殊蛋白质———热休克蛋白(Heat shock protein,HSP)的合成有关,因其最先在热休克现象中发现而得以命名。热休克蛋白除了因热休克刺激产生以外,还有很多因素(如缺氧、低温、氧化反应、化学物质、各种重金属、放射线、某些线粒体呼吸链抑制剂及某些药物等)都可以诱导产生,因此热休克蛋白又称为应激蛋白质(stress protein)。HSP70和HSP90是分子质量分别在70,90 ku左右的热休克蛋白,是热休克蛋白家…     

水牛卵母细胞和体外受精早期胚胎端粒酶活性测定

为了解水牛卵母细胞和体外受精（IVF）胚胎早期发育过程中端粒酶的活性变化,本研究利用端粒重复序列扩增法（TRAP）进行了水牛未成熟卵母细胞,成熟卵母细胞和2～4细胞,8～16细胞,桑椹胚以及囊胚各阶段的早期胚胎端粒酶活性的测定。依据电泳条带在成像系统下的光密度值,计算端粒酶的相对活性（RTA）。结果发现,未成熟卵母细胞端粒酶活性比成熟卵母细胞高（P〈0.05）,受精后2～4和8～16细胞胚胎端粒酶活性相对较低,桑椹胚端粒酶活性明显升高（P〈0.05）,囊胚阶段达到最高水平。通过对水牛不同发育阶段胚胎细胞数计数及单细胞相对端粒酶活性的分析比较结果显示,卵母细胞的单细胞端粒酶活性最高,囊胚阶段的最低。单细胞端粒酶活性从未成熟卵母细胞到IVF囊胚阶段呈逐渐降低的趋势。这些结果表明,水牛卵母细胞及早期胚胎的端粒酶活性变化与其成熟、发育阻断及全能性的逐步降低有关。     

胚胎玻璃化冷冻保存技术及其在牛和猪应用的研究进展

1　前言胚胎冷冻保存是胚胎移植技术真正走向商业化应用的关键环节。自从英国学者Ｗｈｉｔ ｔｉｎｇｈａｍ等人在 1 972年首次报道利用慢速冷冻法保存小鼠胚胎获得成功以来 ,胚胎冷冻保存技术即受到人们的广泛关注 ,并投入了大量的人力和物力进行研究开发利用。随后 ,牛、兔、绵羊、大鼠、山羊、猪和人等的胚胎冷冻保存研究也相继获得成功。冷冻方法也在不断改进。1 977年 ,Ｗｉｌｌａｄｓｅｎ发明了快速冷冻方法 ,将原先需要大半天的冷冻过程缩短在 2ｈ以内 ;超快速冷冻技术的出现 ,又使冷冻过程缩短在 1ｈ之内。 1 985年Ｒａｌｌ玻璃化冷…     

猪精液、胚胎和体细胞冷冻保存及应用研究进展

对猪精液、胚胎和体细胞的冷冻保存应用研究情况进行了综述,讨论了每种细胞形态的关键性技术的发展,重点关注他们的保存、运输和减少病菌传播。同时还讨论了采用冷冻保存的精液、胚胎和体细胞结合其他猪辅助生育技术如体外受精(IVF)、精子卵质显微注射(ICSI)、体细胞核移植(SCNT)复育猪遗传资源和模型的方法。这些采用冻存细胞的辅助生育技术(ART)的应用将会极大提高猪的遗传/模型保护、交换、复育的效率和生物安全。     

家畜卵母细胞和胚胎去脂方法研究进展

卵母细胞和胚胎冷冻技术可与超数排卵和胚胎移植等繁殖技术相结合,打破生理、地区和时间对母畜繁殖潜力的限制,对国际种源流通、优良家畜扩繁和濒危动物种质资源保存具有重要意义。然而,卵母细胞和胚胎中丰富的脂质在降温过程中容易引起膜结构损伤、内质网和线粒体损伤、脂质过氧化,降低其解冻后发育能力,这极大地限制了冷冻卵母细胞和胚胎的应用。众多研究表明,在冷冻前降低卵母细胞和胚胎的脂质含量有利于提高其解冻后的存活率、囊胚率和妊娠率。目前,常用的降脂方法包括3种,即离心极化脂滴后通过显微操作去除脂滴、添加化学物质促进脂质代谢以及通过调控脂质代谢相关基因的表达降低脂质含量。作者简要阐述了过高的脂质含量引起卵母细胞和胚胎冷冻损伤的机制,总结了离心去脂法与化学去脂法的原理、应用效果以及局限性,并探讨了通过调控脂质代谢相关基因的表达从而去脂的可能性,以期为开发更稳定的卵母细胞和胚胎冷冻技术提供一定的参考。     

热休克蛋白的研究进展及其在胚胎发育中的作用

热休克蛋白 (HSP)存在于所有细胞内 ,在不良因素刺激下 ,细胞可改变基因表达方式 ,诱导HSP产生进而启动内源性保护机制。HSP与机体的热耐力有关。HSP介导其它蛋白质的跨膜转运和正确装配 ,起着分子伴侣的作用。HSP参与免疫反应 ,能够防止感染引起的细胞损害和促进受损细胞恢复。因此 ,将HSP用于细胞或胚胎的保存及疫苗的研究和新药的研制都将有深远的意义     

母源基因在猪卵母细胞成熟及胚胎发育中的作用

卵母细胞成熟和胚胎的早期发育是由多因素调控的复杂的生物过程,母源基因及合子基因的表达变化控制着个体的发生,决定着所有生命的进程。母源基因是指受精前卵子发育时母体细胞转录生成的RNA以及其蛋白产物,定位于成熟的卵母细胞胞质中,母源基因在卵母细胞成熟和胚胎的早期发育过程中起着相当重要的作用。对母源基因的研究将为我们解释胚胎发育过程中的生命现象及解决生殖发育方面的问题提供有力的理论依据。目前关于母源基因的研究多集中于传统的模式生物中,而对畜牧业生产中重要的经济动物却涉及很少。本文以母源基因在猪卵母细胞成熟和胚胎发育中的研究现状作一综述,希望为经济动物的繁殖及发育研究提供一定的参考依据。     

热激蛋白在动物应激中的应用

热应激蛋白(HSPs)存在于所有动物细胞中,是动物受到应激原刺激后诱导产生的一组应激蛋白,与机体的应激关系密切,在进化上高度保守.本文在对HSP发现、分类及功能简要介绍的基础上,对HSP70在动物应激中的作用及其调控机制进行了详细的综述,指出HSP将对阐明动物应激机理有重要的意义.     

猪卵母细胞和早期胚胎透明带杨氏模量变化

在39℃环境下,利用微管吸吮的方法,在倒置显微镜下,通过显微操作装置用显微玻璃管吸吮猪卵母细胞和早期胚胎来测定其透明带的杨氏模量。结果显示,从猪卵巢抽取的未经体外成熟培养的卵母细胞(GV期)一直到早期囊胚(未扩张囊胚)阶段,其透明带杨氏模量一直都无显著变化,均集中在20 kPa左右,但当发育到扩张囊胚期其透明带杨氏模量明显变大(P0.05),且扩张囊胚中化学激活的明显大于体外受精的(P0.05)。结果提示,在猪卵母细胞和早期胚胎发育进程中,其透明带的刚性在扩张囊胚期最大,这为通过某些理化方法来帮助扩张囊胚期的胚胎孵化,从而提高囊胚的孵化率并最终提高妊娠率提供了力学方面的理论参考。     

靓精对猪精子、卵母细胞和胚胎的影响

靓精是一个消毒剂的新产品,可用于精液常温保存过程的微生物污染的预防。为了确认靓精对精子、卵子以及早期胚胎的影响,本实验利用病原抑制实验筛选出的三个靓精浓度,0.5%(v/v)、0.75%和1%,并分别添加至精液稀释液、卵母细胞成熟培养液、胚胎的培养液中,观察靓精对猪卵母细胞的成熟、胚胎发育、精子活力以及受精能力等的影响。结果表明,三个处理浓度的靓精对卵母细胞的成熟质量、体外发育能力,精子的运动和受精能力均无显著影响。因此,靓精作为广谱消毒剂,可以在猪精液常温保存过程中添加,以改善精液保存品质。     

热激蛋白在动物应激中的应用

热应激蛋白(HSPs)存在于所有动物细胞中，是动物受到应激原刺激后诱导产生的一组应激蛋白，与机体的应激关系密切，在进化上高度保守。本文在对HSP发现、分类及功能简要介绍的基础上，对HSP70在动物应激中的作用及其调控机制进行了详细的综述，指出HSP将对阐明动物应激机理有重要的意义。     

小鼠卵母细胞和胚胎不同冷冻方法的比较研究

探讨程序化冷冻与玻璃化冷冻对小鼠GV期卵母细胞及二细胞期胚胎的复苏率及其发育潜能的影响。通过小鼠的卵母细胞与早期胚胎的不同冷冻方法的比较,为后续阿旺绵羊的胚胎冷冻保存提供参考。采用程序化冷冻与玻璃化冷冻技术,分别冷冻小鼠GV期卵母细胞及二细胞期胚胎,复苏后培养,比较不同冷冻处理后的复苏率、成熟率与囊胚率。小鼠GV期卵母细胞程序化冷冻复苏率(48.00%±5.29%)显著低于玻璃化冷冻复苏率(65.00%±5.00%),有统计学差异(P=0.0147<0.05);而程序化冷冻后复苏卵母细胞的发育成熟率略高于玻璃化冷冻组,但无统计学意义。小鼠二细胞期胚胎程序化冷冻组复苏率(76.00%±2.00%)显著高于玻璃化冷冻组复苏率(70.00%±2.00%),有统计学差异(P=0.0213<0.05);冷冻后复苏胚胎发育的囊胚率程序化冷冻略低于玻璃化冷冻及对照组,但无统计学意义。