施氏假单胞菌NRCB010的高密度发酵条件优化

植物根际促生菌是最常用的微生物肥料的菌种来源。施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)因良好的促进作物生长、提高作物抗逆性及降解有机污染物等特性备受关注。以具有减少农田土壤氧化亚氮排放和良好促生特性的施氏假单胞菌NRCB010为研究对象,明确其菌落形态及生理生化特征;以生物量(以OD600值表示)为评价指标,通过单因素优选法确定发酵基础培养基和碳氮源及其浓度,通过正交试验设计和极差分析优化无机盐成分,通过响应面分析法优化发酵培养基配方。结果表明,NRCB010菌落呈圆形、皱褶状、黄色,革兰氏染色阴性,菌体短杆状、长度约2 μm、无芽孢;利用多种碳源、氨基酸和羧酸,具有还原力。改良的金氏B(King′s B)培养基为NRCB010发酵较好的基础培养基;以15 g/L糖蜜+葡萄糖(1∶1,W/W)为碳源、以25 g/L牛肉浸粉为氮源时NRCB010的生物量最高。最优无机盐组合为KH2PO4 1.5 g/L、 MgSO4·7H2O 1.5 g/L和NaCl 2.0 g/L。优化后的最优发酵培养基为糖蜜7.1 g/L、葡萄糖8.5 g/L、牛肉浸粉22.9 g/L、MgSO4·7H2O 1.3 g/L、NaCl 2.0 g/L和KH2PO4 1.0 g/L。使用此优化培养基发酵36 h,NRCB010发酵液的OD600值为11.09,有效活菌数为2.87×1010 cfu/mL。     

具有产表面活性剂功能石油降解茵的筛选及其发酵条件优化

从广州某炼油厂附近石油污染的土壤中筛选出一株可高效产表面活性剂的原油降解菌株MZ01,结合菌株形态观察、革兰氏染色和16SrDNA序列同源性进行分析鉴定其属于假单胞菌属（Pseudomonassp．MZ01）,该菌9d对原油的降解率达54．7％。通过正交实验优化其产表面活性剂的环境因子并进行发酵培养,结果表明,MZ01最佳发酵条件为：酵母膏（3g·L^-1）作为氮源,玉米油（2g·L^-1）作为碳源,温度为25℃,pH值为9．0和含盐量为5％。该条件下3d的发酵产物经提纯后得到表面活性剂产量为2．27g·L^-1,测得该产物CMC值为0．1g·L^-1,可将水的表面张力从初始的72mN·m^-1降至30mN·m^-1。     

一株高效解钾菌的筛选、鉴定及发酵条件的优化

为了寻求钾肥替代技术,从江西红壤中筛选到一株解钾效率为27.62%的高效解钾菌株G4,结合菌落形态特征、生理生化特性、16S rDNA序列分析,初步鉴定为类芽孢杆菌属(Paenibacillus sp.);通过单因素试验与正交试验对G4的发酵条件进行优化,结果表明G4的最佳发酵条件为:麦芽糖1%(w/v)、蛋白胨0.2%(w/v)、磷酸氢二钾0.05%(w/v)、培养温度25℃、初始pH7.5、装液量80 ml/250 ml(250 ml三角瓶装液量为80 ml)、培养时间48 h、接种量7%。G4有较强的解钾能力,有望用于微生物肥料的开发。     

乐果降解酶产生菌的筛选及酶条件的优化

采用室内培养室验方法,从农药长期污染的土样中分离到一株铜绿假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）Ｐ－１,该菌株可以利用乐果为唯一碳源和能源进行生长,生长的最适ｐＨ为７．０～７．５,最适温度为３０～３５℃。在组分为０．３％蛋白胨,,０．０５％牛肉膏,０．０５％乐果,０．５％ＮａＣＬ的培养基中摇床（３５℃,１５０ｔ／ｍｉｎ）培养２４ｈ,可产生最高乐果降酶活性,达到约８ｕ／ｍＬ。     

铜绿假单胞菌生物降解特性的研究进展

近年来在环境污染物的生物降解研究方面有了很大进展。铜绿假单胞菌（Pseudomon aslugtrlosa,PA）作为重要的降解菌株之一,具有较强的降解能力,可降解物质种类广泛,在环境污染物的生物降解中具有重要作用并占据重要地位。本文综述了PA的降解特性、代谢途径、遗传基础与酶系及促降解物质在生物降解方面的研究进展。     

产荧光假单胞菌分离鉴定及其质粒DNA复制区的克隆

从国内多个地区的65份土样中分离纯化了产荧光假单胞菌株146株,其中菌株DSC3和DKXC1含有质粒,细胞形态,菌落特征的观察和检测证明DKXC1菌株为恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida),以其为出发菌株,克隆了该菌质粒DNA复制子1.7kb片段,序列分析结果表明该DNA片段由3个ORF组成,分别编码311、130、115个氨基酸;它与已知的Pf-E.coli穿梭质粒pUCP19的复制区同源性只有49%,该复制子DNA序列已在GenBank登记,登记号为AF273219,这是国内分离克隆的第一个Pseudomonas质粒DNA复制子,以此复制子构建了4.7kb的E.coli-Pf穿梭载体pYQSPE,该质粒在荧光假单胞菌P303中能够稳定复制和遗传。     

假单胞菌的生物防治作用研究

假单胞菌能产生多种抗生素 ,改善植物营养 ,促进植物生长 ,且能降解土壤中有毒物质 ,对植物促生长防病作用显著。部分假单胞菌株具有杀虫功能 ,由假单胞菌可开发一系列生物防治产品     

一株具有多途径氮代谢功能的荧光假单胞菌

为研究全自养脱氮过程，采用斯凯尔曼亚硝化单胞杆菌培养基，从南京某城市污水处理厂序批式处理系统（SBR）中分离得到一株具有多途径氮代谢功能的荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens dN13。该菌株在有氧条件下，无有机碳源存在，能进行氧化NH3-N产能代谢生长；有有机碳源存在且NO2^- -N和NO3^- -N的浓度较高时，它能将NO2^- -N和NO3^- -N还原为NH3-N。在厌氧条件下，只有乙酸钠作碳源时，该菌株仍能进行硝酸亚硝酸还原（反硝化）作用。在这个具有多途径氮代谢功能的菌株细胞内，硝化反硝化过程耦合成为可能。     

假单胞菌的微生态调节作用

假单胞菌能够抑制植物病原微生物的生长 ,对改善植物营养、促进植物生长具有很好的作用 ,同时假单胞菌还能够对土壤中的有毒物质进行降解 ,可以作为一种理想的植物微生态制剂生产菌种进行开发     

高产嗜铁素恶臭假单胞菌A3菌株的鉴定及其对黄瓜的促生作用

从大棚蔬菜根际土中分离到一株嗜铁素高产菌株A3,铬天青（CAS）法定量检测其嗜铁素相对含量达93.40%,Shenkers实验确定为羧酸型嗜铁素。在不同底物诱导下,该菌株可不同程度地产生吲哚乙酸（IAA）及1-氨基环丙烷-1-羧酸（ACC）脱氨酶,并具有一定的溶磷能力。根据形态特征、生理生化、API系统及16S rRNA基因序列分析,将菌株A3鉴定为恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida）。在缺铁Hoagland营养液中添加难溶性铁及菌株A3嗜铁素发酵滤液的处理组,能够显著提高黄瓜幼苗的株高、根长、叶长、鲜重及叶绿素含量,表明菌株A3产生的嗜铁素在低铁条件下对黄瓜幼苗具有促生作用。     

产植酸酶菌株的筛选及其产酶条件研究

本研究筛选出1株稳定的产植酸酶菌株,初步鉴定为黑曲霉,命名为Aspergullus,niger FZ41。摸索了液体发酵产酶的最佳条件,获得其最适发酵培养基（w／w）：可溶性淀粉4％,NH4NO3 0．08％,KCl 0．05％,MgSO4·7H2O 0．05％,FeSO4·7H2O 0．003％,MnSO4·7H2O 0．003％,水1L。培养基起始pH值6．0,种龄为36h,接种量为5％,装液量为50／500mL,在30℃、220r·min^-1下培养84h,酶活可达219U·mL^-1。     

茎点菌属产松脂醇二葡萄糖苷的培养条件优化(简报)

用响应面分析法对一株杜仲内生茎点霉(Phoma sp.)生产松脂醇二葡萄糖苷(PDG)的培养条件进行了优化,获得了PDG产量与各培养条件的回归模型,根据模型确定出PDG的最佳生产条件为：初始pH值8.4,摇床转速193 r/min,装液量100 mL,最佳条件下的PDG产量可达30 mg/L。最佳条件下试验所得值与模型预测值间的偏差小于5%。     

节杆菌AD26的分离鉴定及其与假单胞菌ADP对阿特拉津的联合降解

用富集培养法,从农药厂的工业废水中分离到高效降解除草剂阿特拉津的AD26菌株,通过16SrRNA基因序列分析,该菌株被鉴定为节杆菌（Arthrobacter sp.）。降解基因的PCR分析表明,AD26含有阿特拉津降解基因trzN和atzBC,它能以阿特拉津为唯一氮源、蔗糖或柠檬酸钠为碳源生长,将阿特拉津降解成氰尿酸,降解速度快但降解不完全。假单胞菌（Pseudomonas sp.）ADP是Wackett实验室分离的阿特拉津降解菌株,含有阿特拉津降解基因atzABCDEF,能以阿特拉津为唯一氮源、柠檬酸钠为碳源（不能以蔗糖为碳源）生长,将阿特拉津降解成NH3和CO2,降解完全但降解速度慢。在阿特拉津浓度为200mg·L^-1的无机盐培养基中进行的AD26和ADP混合培养表明,它们对阿特拉津的降解发生了互补和增强作用,两个菌株能在以阿特拉津为唯一氮源、蔗糖为碳源的培养基中生长,而且生长和降解速率都好于单个菌株,培养72h后阿特拉津去除率达到99.9%,其中76.7%的阿特拉津被降解成NH3和CO2。这表明由节杆菌AD26和假单胞菌ADP组成的混合菌株在阿特拉津废水处理和污染土壤的生物修复中有很好的应用潜力。     

Limitations of colony morphology and antibiotic resistance in the identification of a Bradyrhizobium sp. (Lotus) strain in soil

Summary We investigated the reliability of antibiotic resistance and colony morphology of clones of a Bradyrhizobium sp. (Lotus) strain for strain identification in nodulation competitiveness experiments in soil. There was no difference in nodulation competitiveness between the wild type strain and each of five mutants resistant to streptomycin and spectinomycin at the time of their isolation from antibiotic-containing media. However, these mutants were significantly less competitive when tested 4 months later. The apparent instability of the newly isolated mutants and their subsequently decreased nodulation competitiveness show that mutants must be examined carefully after being allowed time to stabilize. Two clones of the Bradyrhizobium sp. (Lotus) strain that differed in colony morphology on yeast mannitol medium did not differ in antigenic properties, whole cell protein electrophoresis profiles, mean cell generation times in yeast mannitol medium, N₂-fixing ability, nodulation of Lotus pedunculatus in growth pouches, or in nodulation competitiveness. Both clones retained their colony morphology after numerous transfers on yeast mannitol agar over 3 years and after at least 6 months in soil. A limiting factor, which may restrict the use of colony morphology as a marker for strain identification in competition experiments, is the problem of detecting double-infected nodules when the small colony type comprises a relatively small portion of the total nodule population.     

高密度培养基因工程菌的条件优化

高密度发酵是发酵工业的发展趋势之一。然而，随着发酵规模的扩大，诸多因素影响着基因工程菌的表达和产物形成量的高低。本文分析和介绍了宿主、营养、PH、温度、溶氧、比生长速率等条件对重组蛋白产生的影响及有关的研究进展。     

越南伯克霍尔德氏菌B418培养条件的优化

以越南伯克霍尔德氏菌B418为研究对象,采用均匀设计实验、正交设计实验和单因子实验研究了各种因素对菌株生长的影响。确定了B418生长最佳培养基配方为(g·L-1):葡萄糖10,蛋白胨5,硫酸镁2,硫酸铵3,玉米粉30,黄豆粉10,磷酸二氢钾1,磷酸氢二钾1,初始pH值7.5。主要影响因子为硫酸镁,其次为硫酸铵。其它优化培养条件包括:接种量5%、培养温度28℃、培养时间28 h、转速180 r·min-1。利用优化条件上500 L发酵罐,通气量1~3 L·min-1,B418在16 h进入对数生长期,28 h进入稳定期,活菌数达210.5×108cfu·mL-1。     

施用木霉菌诱导黄瓜抗病性及对土壤酶活性的影响

为了对木霉菌诱导植物抗病性及施用后对土壤酶活性的影响进行研究,以黄瓜为材料进行田间试验,检测木霉菌施用后蔬菜不同生长时期与诱导植物抗病性密切相关的植株酶活性变化以及根系土壤酶活性的变化.结果表明,在诱导植物抗病性方面,施用木霉菌后在黄瓜生长初期诱导植株产生了抗病性,增强了植物的抗病能力.在对土壤酶活性的影响方面,施用木霉菌剂处理的土壤脲酶活性在苗期、果期和末期高于对照,而在花期低于对照.土壤酸性磷酸酶活性在整个生长时期内的变化趋势均为施用木霉菌剂处理低于对照.土壤过氧化氢酶的活性表现为在苗期施用木霉菌剂处理明显高于对照,并始终保持在较高水平.     

芽孢杆菌组合CL-8发酵条件优化及其防病效能研究（简报）

为了使生防菌Bacillus sp.组合CL-8发酵水平达到最佳效果,为其工业化发酵生产和田间应用提供参考,通过单因素实验和正交实验,确定了Bacillus sp.组合CL-8最佳发酵培养基和最佳发酵条件.最佳发酵培养基为:玉米粉10g/L、豆粕10g/L、蜂蜜5 g/L、氯化钠5g/L、碳酸钠2 g/L、磷酸氧二钾2 g/L、硫酸镁0.2 g/L、碳酸钙1 g/L、硫酸锰0.1 g/L、氯化铁0.1 g/L;最佳发酵条件为:二个单一拮抗菌株Bacillus sp.SL-13、SL-14和SL-44最佳接种比例为2:1:2,培养基初始pH值为7.0.组合CL-8发酵液对加工番茄种子浸种后可提高加工番茄的防病效果,达到55.53%,明显高于三株单一菌浸种后的效果.