空气对X期鸡胚原壳发育的影响

通过抽蛋清、延长空气与胚胎接触时间的方法,就空气对X期鸡胚原壳发育的影响进行了研究.种蛋开孔0.5 cm,用蛋壳皿立即封口后进行孵化,X期鸡胚和3日龄鸡胚的孵化率呈现出极显著的差异(P＜0.01),X期鸡胚的孵化率为0,而3日龄鸡胚的孵化率高达80.0%.种蛋抽取1.0 mL蛋清后,X期鸡胚和3日龄鸡胚的孵化率也呈现出极显著的差异(P＜0.01),X期鸡胚的孵化率为31.3%,3日龄鸡胚的孵化率为81.3%.开孔后在空气中暴露2 h,然后封口孵化,结果孵化鸡胚的死亡明显加快(P＜0.01),7日龄鸡胚的存活率立即封口组为51.6%,2 h后封口组为25%.上述实验表明,开孔与空气接触、抽蛋清使蛋内进入空气或延长空气与X期鸡胚接触的时间都可使鸡胚在孵化过程中的死亡加快,从鸡胚死亡的幅度来看,空气可能是影响鸡胚体外培养的最重要因素.     

鸡胚大头开孔原壳体外培养方法的建立

通过原壳体外培养和抽蛋清的方法，研究了胚龄、蛋清抽取量对鸡胚发育的影响。结果表明：X期鸡胚抽取1mL、3mL和6mL蛋清后，其孵化率分别为38．6％、30．35％和8．6％。抽取蛋清1mL组（P〈0．01）和3mL组种蛋（P〈0．05）的孵化率明显优于抽取6mL组。对、3日龄鸡胚，抽取9mL蛋清后，鸡胚发育受到的影响最大，其孵化率仅为33．3％，明显低于3mL和6mL组（P〈0．01）；而抽取3mL和6mL蛋清对3日龄鸡胚的影响较小，其孵化率仍高达74．3％和76．5％。抽取6mL蛋清并在大头顶端开直径为110cm的圆孔进行鸡胚原壳体外培养获得成功，3日龄鸡胚的孵化率为18．5％。     

鸡胚体外培养影响因素的研究

以种鸡蛋为实验材料 ,分别在孵化 0、3和 6d后 ,抽取 1mL蛋清 ,用石蜡或自配封口胶封闭针孔 ,以探索抽蛋清和不同封口方法对不同日龄鸡胚发育的影响。实验结果表明 ,抽取蛋清对 3日龄鸡胚的发育和孵出的影响较小 (P <0 .0 1) ,孵化率达 76 .3% ,而对 0日龄、6日龄鸡胚发育和孵出的影响较大 ,孵化率只有 30 .6 %和 4 1.2 %。与石蜡封口相比 ,自配封口胶封口组的鸡胚孵化率明显提高 (P <0 .0 1) ,自配封口胶封口组的鸡胚孵化率为 76 .3% ,石蜡封口组的鸡胚孵化率只有 2 1.4 %。     

鸡胚胎体外培养的研究

鸡胚体外培养系统包括：将鸡胚从蛋壳中取出转入代用蛋壳I中补加蛋清至满,用保鲜膜封口固定,38℃、翻蛋角90。、RH4096孵化72h。然后转入代用蛋壳Ⅱ中用保鲜膜封口固定,38℃、翻蛋角40。、RHS0％孵化至i8d,之后转入恒温箱停止翻蛋在37．5℃、RH60％的条件下孵化至出雏。通过以上培养系统,在手工翻蛋(4次／d)的情况下分两组处理17只鸡胚,孵化率为11．8％(2／17),两只雏鸡中一只为弱雏;在自动翻蛋(1次／h)的情况下处理40只鸡胚,孵化率为22．5％(9／40)。孵出的小鸡经正常饲养能够长大并产卵。通过自动翻蛋体外培养系统可以获得满意的效果。实验过程中发现,两次转移对胚胎和卵黄造成的损伤、卵黄膜与代用蛋壳的粘连、培养过程中细菌的污染和翻蛋角度是影响孵化率的重要因素。     

X期鸡胚简易体外培养方法的探索

以原蛋壳为孵化蛋壳,利用塑料袋对鸡胚进行转壳,用保鲜膜或蛋壳皿和石蜡封口,分别对Ⅱ、Ⅱ两种简易方法的X期鸡胚体外培养进行了研究。实验结果表明,方法Ⅰ组鸡胚蚊虫珠期的发育率为72．7％(8／11);方法Ⅰ、Ⅱ组鸡胚8日龄存活率分别为0(0／11)和17．6％(3／17)。     

不同时期鸡胚体外培养及其影响因素的研究

采用代用蛋壳体外培养方法，对不同时期鸡胚胎换蛋壳培养进行了研究。结果表明：体外受精卵体外培养发育率为10％。X期胚胎体外培养的出雏率为1.2%；孵化1日龄胚胎体外培养的出雏率为7.9%；去1／4壳的鸡胚出雏率为3.7%；鸡胚胎换蛋壳以后，添加6－8mL稀蛋白对换壳鸡胚发育比较适宜。     

狼山鸡-AA肉鸡嵌合体的制作及其转基因鸡研究

试验Ⅰ:以狼山鸡为供体,AA肉鸡为受体,通过赤道开窗法制作了狼山鸡-AA肉鸡的嵌合体.共操作了108枚鸡蛋,孵化成活19只,孵化成活率17.6%.获得表型嵌合体鸡胚22枚,其中15只孵化成活,嵌合体率为13.9%.对2只嵌合体公鸡解剖发现,有1只的睾丸发育异常.PCR扩增禽类W染色体特异性的重复序列发现,2只嵌合体公鸡的性腺都嵌合了供体异性的细胞.结果表明所采用的嵌合体制作方法制备转基因鸡是可行的.试验Ⅱ:利用脂质体介导法,在体外将外源pEGFP质粒转入到鸡X期胚胎细胞中,培养8 h开始有外源基因的表达,体外培养12 h后获得了21.43%的转染效率.将转染后的鸡胚盘细胞移入到受体AA肉鸡的胚下腔,孵化6 d后在8个鸡胚中检测到有外源基因的存在,阳性率为40%(8/20).     

不同去壳部位对鸡种蛋孵化效果的影响

为探讨不同去壳部位对鸡种蛋孵化效果的影响,分别于种蛋钝端、赤道板和钝端侧面钻孔去壳,然后均以保鲜膜封口进行孵化。结果表明：于种蛋钝端、赤道板和钝端侧面钻孔去壳处理的最终孵化率分别为4．5％,8．8％和60．5％,且于种蛋钝端侧面钻孔去壳处理的孵化率明显高于另外2组处理（P〈O．05）;3组去壳处理的孵化率均与对照组（96．9％）存在明显差异（P〈0．05）;于种蛋钝端去壳的种蛋失重量明显高于其他处理,从孵化第12d以后,对照组及于赤道板、钝端侧面钻孔去壳处理的种蛋失重量基本一致。可见,于种蛋钝端侧面去壳可视为一种较理想的开窗方法。     

血清浓度对鸡胚盲肠上皮细胞原代培养的影响

为探讨细胞培养基中血清浓度对鸡盲肠上皮细胞体外培养的影响,分别用含0%、2.5%、5%和10%胎牛血清(FBS)的细胞培养液培养鸡胚盲肠上皮细胞,检测细胞活性;选择适宜的FBS浓度,并测定了该浓度条件下鸡盲肠上皮细胞的生长特性。结果表明:用含2.5%和5%FBS的培养基培养鸡胚盲肠上皮细胞,第4天细胞贴壁率达最高,分别为84%和80.33%,显著地高于无血清和10%FBS组(P<0.01/0.05),第7天仍均维持在76%以上,两者间除了第2天外,其余差异均不显著;用含2.5%FBS的细胞培养基进行鸡胚盲肠上皮细胞原代培养,第2~3天为适应阶段,第3~5天处于对数生长期,第5~9天细胞进入减速期,第10~11天再次进入对数生长期,第11天以后细胞进入衰退期,整个过程持续14 d左右。鸡胚盲肠上皮细胞培养的血清浓度以2.5%FBS为宜。     

狼山鸡-AA肉鸡嵌合体的制作及其转基因鸡研究

试验Ⅰ:以狼山鸡为供体,AA肉鸡为受体,通过赤道开窗法制作了狼山鸡-AA肉鸡的嵌合体.共操作了108枚鸡蛋,孵化成活19只,孵化成活率17.6%.获得表型嵌合体鸡胚22枚,其中15只孵化成活,嵌合体率为13.9%.对2只嵌合体公鸡解剖发现,有1只的睾丸发育异常.PCR扩增禽类W染色体特异性的重复序列发现,2只嵌合体公鸡的性腺都嵌合了供体异性的细胞.结果表明所采用的嵌合体制作方法制备转基因鸡是可行的.试验Ⅱ:利用脂质体介导法,在体外将外源pEGFP质粒转入到鸡X期胚胎细胞中,培养8 h开始有外源基因的表达,体外培养12 h后获得了21.43%的转染效率.将转染后的鸡胚盘细胞移入到受体AA肉鸡的胚下腔,孵化6 d后在8个鸡胚中检测到有外源基因的存在,阳性率为40%(8/20).     

鸭胚胎代用蛋壳培养的研究

采用两种方法进行了鸭胚胎代用蛋壳培养,旨在提高出雏率。方法Ⅰ将新鲜种蛋的胚胎转移至代用蛋壳Ⅰ内培养,72h后转移至代用蛋壳Ⅱ内培养至出雏。方法Ⅱ将正常孵化72h后的胚胎转移至代用蛋壳Ⅱ后培养至出雏。方法Ⅰ组出雏率为19.2%(10/52);方法Ⅱ组出雏率为40.4%(21/52)。从第6天到出雏同一日龄胚胎存活率方法Ⅰ组显著低于方法Ⅱ组和对照组(P<0.05或P<0.01)。第16天到出雏同一日龄胚胎存活率方法Ⅱ组显著低于对照组(P<0.01)。结果表明方法Ⅰ和方法Ⅱ两种方法均能获得雏鸭,方法Ⅱ优于方法Ⅰ。     

鸡胚胎代用蛋壳及异体胚盘移植孵化的研究

对鸡胚胎蛋壳培养的研究结果显示 :( 1 )在± 4 5°的转角下 ,不同体积的代用蛋壳的胚胎发育率 ,普通蛋代用蛋壳前 6d的胚胎发育率 ( 48.5% )显著高于双黄蛋代用蛋壳 (平均 2 2 .7% ) ,但是 ,双黄蛋代用蛋壳的孵化率 ( 8.3 % )显著高于普通蛋代用蛋壳。普通蛋代用壳无小鸡孵化 ,说明普通蛋壳对于移植等量鸡胚后期的发育空间不够。( 2 )双黄蛋作为代用壳时 ,可以不添加任何物质。( 3 )换蛋壳培养鸡胚胎 ,转蛋角度± 4 5°比± 3 0°的效果要好。异体胚盘移植结果显示 :同一动物间的同功物质具有通用性 ,异体胚盘移植鸡胚可以继续发育。     

鸡传染性法氏囊病胚胎免疫研究

用ＩＢＤＢＪ８３６免疫接种１８ｄ龄鸡胚，雏鸡在１，３，６周龄用ＩＢＤ强毒攻毒，获得显著保护，其保护率分别为６６．７％，８７．５％和１００％，且早期免疫保护率高于雏鸡免疫。ＩＢＤ胚胎免疫安全，不影响孵化率和健雏率，对新城疫苗的免疫应答没有抑制作用。     

胚胎移植方法和受体母猪因素对克隆猪生产效率的影响

【目的】建立高效的胚胎移植技术体系,以提高克隆猪的生产效率。【方法】比较不同移植方法和不同受体母猪状况的胚胎移植分娩率和克隆猪的出生效率,利用体外发育能力相似的不同品种和发育阶段的克隆胚胎混合移植确定最佳的受体母猪发情同期时间。【结果】克隆胚胎经由输卵管伞移植比输卵管打孔移植具有更高的移植分娩率和克隆猪效率（2.2% 和0.4%,P＜0.01）,而胚胎移植后辅助人工授精会降低克隆效率（0.6% 和 2.2%,P＜0.01）。利用经产母猪作为移植受体比青年猪受体具有更高的克隆效率（3.0%和0.8%,P＜0.01）和平均窝产仔数（（5.5±0.7）头和（2.7±0.3）头,P＜0.05）。受体母猪发情时间比胚胎激活时间晚12-36 h组的克隆效率分别为显著（P＜0.05）和极显著（P＜0.01）,高于晚0 h和早12-24 h 组的克隆效率（2.0%、0.5%和0%）。最佳的受体母猪发情时间为晚于克隆胚胎激活后24 h,克隆效率达3.0%。【结论】选择自然发情时间晚于克隆胚激活后24 h的经产母猪为受体,通过输卵管伞端移植胚胎,能够获得较高的克隆效率,是猪克隆胚胎移植的较理想方法。     

秦川牛胚胎冷冻保存效果

为探明秦川牛胚胎冷冻保存技术的可行性,将48头秦川牛母牛进行多次超数排卵处理、人工授精,并于授精后第7天非手术法获得胚胎,把获得的A级胚用不同浓度甘油(1.0~5.0 mol/L)和乙二醇(1.0~5.0mol/L)进行处理,并采用常规冷冻法和快速冷冻法进行冷冻,解冻后进行体外培养和不同发育阶段胚胎(桑椹胚、囊胚和扩张囊胚)移植,统计其存活率、孵化率和妊娠率等。结果表明:秦川牛7日龄胚胎能耐受甘油的浓度为2.0~4.0mol/L,乙二醇为1.0~3.0mol/L;常规冷冻法解冻后胚胎的存活率和孵化率显著(P0.05)高于快速冷冻法,胚胎移植妊娠率和产犊率差异不显著(P0.05);常规冷冻桑椹胚的冻后存活率、孵化率极显著(P0.01)低于囊胚和扩张囊胚,移植妊娠率和产犊率显著(P0.05)低于囊胚和扩张囊胚。     

小鼠胚胎切割取样后体外培养发育能力的研究

本文对小鼠胚胎切割取样细胞数量的多少，取样后胚胎在室温中停留时间以及透明带存留与否的体外发育情况进行了研究，目的在于为牛胚胎性别鉴定切割取样时供借鉴和探讨。实验中的胚胎依据切割取样的细胞数分１０个细胞以内和大于１０个细胞以上两个组。其体外培养发育率分别为９５．７％（６７／７０）和７６．２％（３２／４２），两者差异极显著（Ｐ＜０．０１）；其中晚期桑椹胚、早期羹胚、扩展囊胚的体外发育率分别为８７．７％（６４／７３）、８６．２％（２５／２９）、１００％（１０／１０），三者之间差异不显著（Ｐ＞０．０５）；培养前在室温下停留３～７ｈ和９ｈ的体外培养发育率分别为９４．８％（７３／７７）、５７．１％（２０／３５），两者差异极显著（Ｐ＜０．０１）；胚胎取样后透明带存留和脱失的体外培养发育率分别为８７．９％（５１／５８）和８３．３％（４５／５４），两者差异不显著（Ｐ＞０．０５）。     

影响绵羊、山羊超数排卵及胚胎移植效果因素分析

在生产条件下，对3个优良品种的127只绵羊（道塞特47只、萨福克49只、杜泊31只）和111只波尔山羊供体使用不同国别生产的促卵泡素（FSH）实施超数排卵处理，然后对1231只小尾寒羊和奶山羊受体实施不同方法的胚胎移植，旨在筛选出切合于生产实际成本低、效率高的超数排卵和胚胎移植方案。实验结果表明，使用新西兰产FSH对波尔山羊超数排卵后平均获得可用胚胎14枚／只，显著高于澳大利亚产FSH效果（平均7．59枚／只）（P〈0．05）．而中国科学院产FSH的超排效果（平均10．38枚／只）与新西兰产无显著性差异（P〉0．05）；进一步采用中国科学院产和新西兰产FSH分别对道塞特、萨福克和杜泊3个品种绵羊实施超数排卵结果，获得平均可用胚胎数均无显著性差异（P〉0．05）；使用腹腔内窥镜法和常规手术法胚胎移植结果表明，移植妊娠率分别为57．44％和60．20％．2种方法间无显著性差异（P〉0．05）。由于中国科学院产FSH价格便宜，而腹腔内窥镜法胚胎移植可大大缩短操作时间，两者结合可降低成本、提高效率，适宜羊胚胎移植产业化应用。