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介绍了链置换扩增技术、转录介导扩增技术、核酸序列依赖性扩增技术、环介导等温扩增技术、赖解旋酶恒温基因扩增技术、滚环扩增等六种恒温扩增核酸的技术的特点及其研究应用概况,并对恒温扩增技术的前景予以展望,以期为这些技术的应用提供参考。 相似文献
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环介导等温扩增技术(LAMP)是由Notomi等于2000年开发的新颖的恒温核酸扩增方法,在等温条件下可高效、快速、高特异、高灵敏地扩增靶序列。1技术特点环介导等温扩增技术特点是针对靶序列的6个特异性区域设计两对引物,利用具有链置换活性的DNA聚合酶在恒温条件下30~60分钟,不需要PCR仪即可实现核酸的大量扩增,并且伴有肉眼可见的副产物白色焦磷酸酶沉淀产生。LAMP的扩增效率是目前最高的一种, 相似文献
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核酸依赖性扩增技术(NASBA)是继PCR技术后发展起来的一门新型的体外核酸扩增技术。它的特点是:恒温、高效、特异、不需要特殊的仪器设备。本文就现阶段核酸依赖性扩增技术的特点及其在动物疫病检测中的应用情况和前景作一综述。 相似文献
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Isothermal amplification of rabies virus gene 总被引:1,自引:0,他引:1
Sugiyama M Ito N Minamoto N 《The Journal of veterinary medical science / the Japanese Society of Veterinary Science》2003,65(10):1063-1068
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环介导等温扩增技术及其在重大动物疫病诊断中的应用 总被引:1,自引:1,他引:0
环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种新型恒温扩增技术。LAMP技术不需要特殊的精密仪器设备,结果观察和判定直观,且具有成本低廉、操作简单、反应时间短、特异性强、灵敏度高等优点。因此特别适合现场快速检测及基层普及应用,具有很高的实用推广价值。作者就LAMP技术的原理、反应过程、操作过程及其在禽流感、口蹄疫、高致病性蓝耳病和猪瘟等重大动物疫病诊断中的应用等作一综述。 相似文献
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水霉病由水霉菌引起,能感染包括鱼类、两栖类在内的多种水生动物,严重损害水产养殖行业的经济利益。由于水霉菌具有多宿主、生命力顽强的特点,及时监测水体中水霉菌及其孢子的浓度成为预防水霉病的重要方面。本研究利用环介导等温扩增技术(LAMP)建立了水霉菌LAMP检测方法,并在实际生产中进行了临床应用。结果表明:在链置换聚合酶(Bst酶)的作用下,62℃扩增60 min,扩增结果可用琼脂糖凝胶电泳或荧光染料两种方式观察得到,最低可检出102个拷贝,具有较高的特异性。利用该方法对某林蛙养殖场的蝌蚪池水霉菌进行检测,结果为阳性,证明该养殖场的蝌蚪池中存在水霉病暴发和传播的风险。 相似文献
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Marek's disease (MD) remains a serious problem in the production of poultry. The disease is caused by Marek's disease virus (MDV), and despite the ubiquitous use of vaccination to control losses, MD still affects poultry farming worldwide. The aim of this study was to develop a loop-mediated isothermal amplification (LAMP) method for the simple and inexpensive detection of MDV in feather tips of chickens. Two pairs of specific primers complementary to the meq oncogene of MDV were designed, targeting the sequence of the very virulent MDV strain, RB1B. Bst polymerase was used for the isothermal amplification of viral DNA at 65 C for 90 min in a water bath. The fluorescence signal was identified in MDV-positive samples after the addition of SYBR Green and ultraviolet (UV) illumination. The sensitivity of LAMP was 2 log 10 plaque-forming units (PFU)/ml of HPRS16 and 10(3) copies/il of plasmid containing the target gene (meq) and was equal in sensitivity to PCR amplification. Due to the use of three sets of primers, LAMP was highly specific for MDV-1 DNA. The developed LAMP technique is a rapid and simple tool for the specific detection of MDV in samples of feathers taken from live chickens. Since the use of thermocyclers is not necessary for LAMP assay, it can be conducted by small laboratories and even field veterinarians. 相似文献