脉冲场凝胶电泳在沙门氏菌流行病学中的应用

脉冲场凝胶电泳是20世纪80年代发展起来的一种可用于分离10 kb至10 Mb分子质量DNA的新型凝胶电泳技术,已广泛应用于细菌分子分型、种群特异性鉴定及遗传分析等方面。文章介绍了脉冲场凝胶电泳的技术、应用状况及目前沙门氏菌的分型现状,并阐述了该技术在沙门氏菌流行病学研究方面的应用及发展前景。     

脉冲场凝胶电泳技术的研究进展

脉冲场凝胶电泳(PFGE)是近年出现的用于分离大片段线状DNA的重要技术。文章介绍了该技术的基本原理、操作方法、影响条件、结果分析等,并概括了近年在应用及研究方面的进展情况。该技术具有重复性好、分辨力强、易标准化等优点,结果准确、稳定,不受表型性状干扰,被认为是进行分子分型的可信方法之一,为确定菌株之间的亲缘关系及疾病的溯源提供了可靠的技术支持。目前,脉冲场凝胶电泳在生物基因分型、分子流行病学研究、细胞凋亡、追踪传染源、兽医流行病诊断辅助、食品和公共健康及染色体DNA分离等研究中得到广泛应用。     

猪链球菌分子生物学分型方法研究进展

猪链球菌是猪重要的致病菌,其种类繁多,鉴定困难。传统分型方法包括兰氏分群法,荚膜抗原分型,溶血性分型及生化分型法等。分子生物学技术的发展给猪链球菌的分型带来新的思路。论文对猪链球菌分子生物学分型方法进行介绍,包括多位点序列分型技术、脉冲场凝胶电泳、扩增片段长度多态性、随机扩增的多态性DNA、限制性片段长度多态性、核糖体分型,PCR-限制性片段长度多态性和测序。     

致病性大肠埃希氏菌脉冲场凝胶电泳图谱的建立

建立了致病性大肠埃希氏菌脉冲场凝胶电泳图谱。采用脉冲场凝胶电泳技术分离细菌DNA,EB染色,Info Quest FP聚类分析软件分析,结果获得了《中国兽医菌种目录》中收录的127株致病性大肠埃希氏菌脉冲场凝胶电泳图谱,其中CVCC212与CVCC213等12对大肠埃希氏菌脉冲场凝胶电泳图谱相似率在85%以上。实验通过建立127株致病性大肠埃希氏菌脉冲场凝胶电泳图谱,丰富了致病性大肠埃希氏菌背景资料,为进一步分析基因分型与致病性之间的关系提供了实验数据。     

金黄色葡萄球菌分子分型方法

目前,分子分型方法已成为研究细菌耐药性发生及传播的重要手段,常用于金黄色葡萄球菌分子分型的方法有脉冲场凝胶电泳分型(PFGE)、表面蛋白A基因多态性分型(Spa)、随机扩增DNA多态性分型(RAPD)、多位点测序分型(MLST)等,本文总结了上述几种常用的金黄色葡萄球菌分子分型方法 。     

脉冲场凝胶电泳技术的应用及其发展趋势

<正>基因分型方法即分子分型方法,是用现代分子生物学技术分析菌株间基因组的相似程度,进而弥补表型分型在分型能力、重复性及分辨力上的欠缺〔1〕。脉冲场凝胶电泳(PFGE)是一种重要的分子分型技术,其工作原理是:大小不同的DNA分子在交替变换方向的电场中作出反应所需的时间不同,一般较小的分子重新定向较快,在凝胶中移动快,大的DNA分子比小的DNA分子定向慢,在凝胶中     

多杀性巴氏杆菌分型方法研究进展

多杀性巴氏杆菌是一种人兽共患病病原菌,可引起多种动物及人类疾病。目前临床上对多杀性巴氏杆菌的分型多采用基于免疫试验为基础的血清学分型和基于基因特征为依据的分子分型。血清学方法操作繁琐,对抗血清的特异性有很高的要求,不适宜临床大规模快速进行流行病学调查。分子分型具有分辨力高和重复性好等优点,因而在临床中得到了广泛应用。分子分型方法主要包括荚膜多重PCR分型、脂多糖多重PCR分型、多位点序列分型、脉冲场凝胶电泳、全基因组序列分析等。论文就每种分型方法的原理、优缺点和适用范围进行介绍,以期为临床上开展多杀性巴氏杆菌的流行病学调查,特别是分子流行病学调查提供参考。     

多杀性巴氏杆菌检测、鉴定和分型研究进展

多杀性巴氏杆菌(Pm)可以引起多种畜禽疾病,给养殖业造成巨大的经济损失。为了系统的了解Pm检测、鉴定和分型技术的发展,论文主要对Pm的分类地位、鉴定和分型的传统方法以及分子生物学方法,诸如种特异性PCR、荚膜分型PCR、产毒素Pm的PCR鉴定、16 S rRNA基因测序法、DNA杂交、大分子图谱、限制性酶切分析和核糖体分型、随机扩增DNA片段多态性、脉冲场凝胶电泳及其他各种基因分型技术等进行了综述。     

上海市猪源沙门氏菌耐药性及脉冲场凝胶电泳分型研究

为了解上海地区猪源沙门氏菌的耐药性及基因分型情况,本研究对2013年分离到的13株猪源沙门氏菌(10株为猪霍乱沙门氏菌,3株为鼠伤寒沙门氏菌)采用微量肉汤稀释法进行药物敏感性测定,应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行基因分型。药物敏感试验结果表明,分离到的13株沙门氏菌对磺胺异恶唑、多西环素、氟苯尼考和阿莫西林的耐药率较高,对阿莫西林/棒酸、头孢曲松、丁胺卡那霉素和头孢噻呋敏感。脉冲场凝胶电泳分型结果显示,10株猪霍乱沙门氏菌中有8株为流行病学相关,是本次研究中猪霍乱沙门氏菌的优势基因型。     

奶牛乳房炎分离大肠杆菌的耐药性及脉冲场凝胶电泳分型研究

为了解宁夏地区奶牛乳房炎分离大肠杆菌的耐药表型及同源性特征,本试验采用肉汤微量稀释法测定了16种抗菌药物对66株奶牛乳房炎分离大肠杆菌的最低抑菌浓度(MIC),同时进行了脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型研究.结果显示,66株大肠杆菌对氨苄西林、链霉素、四环素、多西环素、头孢菌素类抗生素和磺胺甲氧嘧啶的耐药率都比较高,而对阿米卡星、卡那霉素、多粘菌素、氟苯尼考及喹诺酮类药物则比较敏感.分离菌株最多耐受15种药,且主要以8耐、5耐和7耐为主.66株大肠杆菌中有54株能被PFGE分型,可分为A-a 27个型.分型结果显示,宁夏地区的奶牛场分离的菌株之间既存在垂直传播也存在水平传播,同一养殖场不同奶牛之间和不同养殖场的奶牛之间存在多重耐药大肠杆菌的克隆传播.     

4株猪链球菌的病原生物学特性分析

对4株新分离猪链球菌NJ25、SH29、SH40和RC4726进行病原学特性分析,以评估其对公共卫生的威胁性。利用中国疾病预防控制中心传染病所制定的猪链球菌2型鉴定方案,对4株新分离猪链球菌NJ25、SH29、SH40和RC4726进行毒力相关基因检测、细菌染色体酶切片段多态性分析(PFGE)、多位点序列分型(MLST),并用C57BL/6小鼠作致病性试验。结果显示,NJ25株为ST7序列型,SH29、SH40为ST1序列型,3株菌的基因型均为sly+mrp+ef+;RC4726的7个管家基因座位分别为aroA(18)、cpn60(34)、dpr(24)、gki(12)、mutS(1),recA(1)、thrA(4),是一个新的MLST型,基因型为sly+mrp-ef-。PFGE分析显示NJ25、SH29、SH40与SC84有60%的相似性,RC4726与SC84的相似性仅为20%。用108CFU攻击C57BL/6小鼠,除RC4726外,NJ25、SH29、SH40均能致小鼠发病、死亡。结果表明,NJ25、SH29、SH40可能是高致病性猪链球菌,RC4726是1株非致病性猪链球菌。     

猪链球菌荧光DNA扩增片段长度多态性检测方法的建立

利用荧光标记技术,采用2对引物初步建立检测猪链球菌荧光DNA扩增片段长度多态性方法,结果表明12株猪链球菌扩增的多态性位点数从51～98条不等,该方法能够检测猪链球菌的多态性,区分不同血清型以及同一血清型不同特性的菌株,可用于菌株鉴定及流行病学研究中细菌源的追踪。     

Genomic relatedness among reference strains of different Streptococcus suis serotypes.

Hybridization studies using genomic DNA and a rDNA probe revealed genetic relatedness among reference strains of different Streptococcus suis serotypes. Although most serotype 22 isolates are biochemically atypical, the reference strain of capsular type 22 is genetically related to other S. suis serotypes, but not to Streptococcus pneumoniae. Using DNA digested with BamHI and BglII for ribotyping, some S. suis reference strains had common patterns, but this analysis mainly revealed variations in patterns of S. suis strains of different serotypes.     

20味中草药与抗生素联用对猪源链球菌体外抑菌作用的分析

为观察中草药与抗生素联用对猪源链球菌的体外抑菌效果,采用试管二倍稀释法测定20味中草药水提物、醇提物的最低抑菌浓度（ MIC）,用常量棋盘稀释法测定20味中草药水提物、醇提物与抗生素联用对猪源链球菌的部分抑菌浓度（ FIC）。结果显示,所选20味中草药的水提物、醇提物对猪源链球菌均具有一定的抑菌作用,瓜蒌醇提物等对猪源链球菌的体外抑菌作用较强;败酱草水提物等对猪源链球菌的体外抑菌作用较弱。瓜蒌醇提物、乌梅醇提物、乌梅水提物与环丙沙星联合用药的抑菌作用表现为相加作用,板蓝根醇提物等与环丙沙星联合用药的抑菌作用表现为无关作用。     

四川脑膜炎病例猪链球菌2型溶血素抗原表位富集区的原核表达

对2005年四川资阳脑膜炎病例猪链球菌2型分离株ZYH33溶血素编码蛋白中包含多个抗原表位的第230～593氨基酸残基区域的基因片段进行扩增并克隆.基因片段经酶切处理后插入表达载体pQE-30的BamH Ⅰ和Sal Ⅰ位点之阃,构建融合表达质粒.转化宿主菌TG1经IPTG诱导后融合基因得到了表达,用猪链球菌2型菌体抗血清对表达的融合蛋白进行免疫印迹试验,分析融合蛋白的免疫反应性.试验结果提示该溶血素蛋白第230～593氨基酸残基区域可作为猪链球菌的诊断抗原,为基因工程疫苗的研制奠定基础.     

猪链球菌2型感染猪和人的现状及研究进展

猪链球菌2型可引起人和猪的感染,甚至死亡,是一种严重的人兽共患病病原,其引起的疫病在我国被列为二类疫病。它能引起仔猪脑膜炎、支气管肺炎、败血症、关节炎及人的化脓性关节炎、眼内炎和心内膜炎等。在世界上许多国家和地区广泛分布,已发现的致病因子有十多种,但致病机理尚未彻底阐明。由于该菌引起的疫病危害性大,所以对该菌的快速诊断检测和防治方法也在不断改进。论文对猪链球菌2型病的流行状况、致病性、检测方法、防治等研究现状进行综述。     

Prevalence of the suilysin gene in Streptococcus suis strains isolated from diseased and healthy carrier pigs

Knowledge of virulence factors of Streptococcus suis is limited. Several virulence factor candidates have been proposed, among them suilysin, which is responsible for a toxic effect on epithelial cells. The aim of this study was to detect the suilysin gene sequence in Streptococcus suis strains of various origin. In total 63 Streptococcus suis isolates were investigated. Forty four of them originated from tissues of streptococcosis affected animals. The remaining 19 strains were isolated from tonsils of healthy carrier pigs. Suilysin gene specific sequence was detected in 79% of the strains tested. In isolates obtained from pigs with signs of streptococcosis this gene sequence was recorded in 85% of cases. In Streptococcus suis strains isolated from healthy carrier pigs the suilysin gene was detected in 63% of the isolates. It seems that suilysin toxic activity is only one of the many steps involved in the pathogenesis of Streptococcus suis infection and that strain's virulence cannot be stated only on the basis of suilysin gene sequence presence.     

猪链球菌病流行病学及其疫苗研究现状

猪链球菌病流行无明显的季节性,一年四季均可发生,尤其是重症猪链球菌2型感染暴发时,致病性强,传播迅速,猪病死率高。该病同时可通过破损皮肤如伤口或擦伤传染给人,也可通过呼吸道感染人,严重感染时可引起人的死亡。控制猪链球菌病的感染,重在预防。不同类型的疫苗已研制成功或正在开发。近年来,基因工程疫苗如重组亚单位疫苗,细菌载体疫苗等新型疫苗的研究具有广泛应用前景。虽然猪链球菌病在猪群中的流行早有报道,但人类感染的报道较少,认识较局限。文章主要对该病的病原特性。流行病学及疫苗的研究做了系统的阐述,为该病的研究提供参考。     

南疆地区猪链球菌流行病学调查

为了解猪链球菌在新疆南疆地区正常猪群中的流行情况,对库尔勒地区、阿克苏地区、喀什地区无菌采集的286头份健康屠宰猪的扁桃体进行猪链球菌种的鉴定;采用猪链球菌谷氨酸脱氢酶（gdh）基因设计引物,建立PCR方法。结果表明,南疆地区猪链球菌的携带率达到了17．13％;对携带猪链球菌的扁桃体进行细菌的分离鉴定,荻得47株猪源性链球菌;采用多重PCR对分离的47株猪链球菌进行主要致病血清学的检测,未见主要致病血清型。     

临床健康猪群猪链球菌2型带菌率流行情况调查

为了解钦州市临床健康猪群中猪链球菌2型的流行情况,采用PCR方法对采集的病料进行检测分析。374份样品的PCR检测结果显示,链球菌、猪链球菌、猪链球菌2型的带菌率分别为81.8%、48.9%、2.9%,表明钦州市健康猪中猪链球菌带菌率高,但猪链球菌2型带菌率较低。