苦参素对D-氨基半乳糖苷诱导的肝细胞凋亡的干预研究

[目的]研究氧化苦参碱对肝细胞凋亡的影响。[方法]采用D-氨基半乳糖苷(D-GalN)诱导人源HL-7702肝细胞发生凋亡,探索最佳的凋亡诱导参数,建立肝细胞凋亡模型,并运用建立的体外肝细胞凋亡模型,探讨氧化苦参碱的抗凋亡作用。[结果]D-GalN在60mmol/L浓度下与HL-7702肝细胞孵育8 h为最优建模条件,在此处理条件下经凝胶电泳可见细胞凋亡特征性的DNA ladder;且与对照组相比,HL-7702细胞处理后其ALT、AST、SOD、MDA、Caspases-3水平均显著升高(P0.05)。[结论]D-GalN诱导的HL-7702肝细胞凋亡的发生机制可能与线粒体信号转导途径有关,而氧化苦参碱对D-GalN引起的肝细胞凋亡具有较强的干预作用,其抗凋亡机制可能与抑制Caspases-3、CytC、TNFα和TGF-β1等凋亡因子和诱导抗凋亡因子HO-1表达有关。     

纳米氧化锌对人正常肝细胞HL-7702的毒性作用研究

[目的]研究食品添加剂纳米氧化锌对人正常肝细胞HL-7702的毒性作用。[方法]采用不同浓度（5、10、25、50、100、250μg/ml）的纳米氧化锌对HL-7702细胞进行染毒;光学显微镜下观察细胞的形态学变化;采用MTT法检测纳米氧化锌对HL-7702细胞生长活性的影响;应用荧光探针活性氧检测技术检测细胞内活性氧（ROS）的生成情况。[结果]纳米氧化锌可引起HL-7702细胞形态变化;MTT检测显示,纳米氧化锌对HL-7702细胞的生长活性具有明显的抑制作用;荧光探针活性氧检测发现,染毒后HL-7702细胞内ROS的生成量增加。[结论]纳米氧化锌作为一种新型锌源,建议控制其添加量或使用量。     

槲皮素对BEL-7402细胞生长抑制作用的研究

[目的]探讨槲皮素对人肝癌细胞株BEL-7402的增殖抑制及凋亡诱导作用。[方法]体外培养BEL-7402细胞,以不同浓度槲皮素处理细胞后,采用酸性磷酸酶（APA）法检测细胞增殖抑制率;光镜观测BEL-7402细胞形态变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率。[结果]槲皮素对人肝癌BEL-7402细胞有明显的增殖抑制作用,其72h的IC50为4μg/ml。光学显微镜下可见细胞密度明显降低。经槲皮素作用6、12h后,流式细胞术检测到细胞凋亡率显著增加。[结论]槲皮素对人肝癌细胞的增殖抑制呈浓度相关性,可诱导肝癌细胞凋亡。     

西兰苔叶黄酮体外抗癌活性的研究

[目的]探讨西兰苔叶黄酮粗提物（EOF）的抗癌机制。[方法]通过四甲基偶氮唑盐（MTT）试验检测EOF对细胞生长的抑制率,并用流式细胞仪采用Annexi-V/PI双染法进行细胞凋亡检测,以探讨西兰苔叶EOF对癌细胞增殖的抑制作用及其诱导的癌细胞凋亡机制。[结果]西兰苔叶EOF对SW480、HepG2、Hela和A549这4种细胞的生长均表现出抑制作用,抑制率随药物浓度的增加而增大,呈明显的量效关系,其50%抑制浓度（IC50）值分别为88.14、99.65、104.43、79.77μg/ml,对SW480细胞的作用最为明显。通过Annexi-V/PI双染法流式细胞仪测得其浓度为30、60、80、120、160μg/ml时,诱导的SW480细胞的早期凋亡率分别为12.74%、16.41%、19.61%、28.28%和50.66%。[结论]西兰苔叶EOF是通过抑制增殖和诱导细胞凋亡来发挥对肿瘤的治疗作用的。     

九香虫含药血清对人结肠癌细胞SW480凋亡相关因子FADD·p53表达作用的研究

[目的]观察九香虫含药血清对人结肠癌细胞SW480增殖及凋亡相关因子FADD、p53表达的影响,初步探讨其诱导结肠癌细胞凋亡的作用机制。[方法]20只雄性SD大鼠按随机数字表法分为2组（生理盐水对照组和九香虫含药血清组）,每组10只。其中,九香虫含药血清组给予九香虫煎剂灌胃5 d后,制备九香虫含药血清,按不同浓度体外作用于SW480细胞72 h。CCK8细胞增殖试验检测其对SW480细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测其对SW480细胞凋亡的诱导作用,Western blot法、荧光定量PCR法检测细胞中FADD、p53蛋白及mRNA的表达。[结果]各浓度九香虫含药血清对SW480细胞生长均有抑制作用,且明显促进其凋亡,凋亡率明显高于对照组（P〈0.01）。Western bolt及荧光定量PCR结果表明,九香虫含药血清干预可使FADD表达明显增强,p53表达明显减弱。[结论]九香虫含药血清可诱导人结肠癌细胞凋亡,并影响凋亡相关因子p53、FADD的表达,从而达到抗肿瘤作用。     

高良姜挥发油对人HL-60细胞株增殖及凋亡的影响

目的 研究高良姜挥发油对人HL-60细胞株增殖及凋亡的影响.方法 采用CKK-8法检测不同浓度的高良姜挥发油对HL-60细胞增殖的抑制效果,流式细胞术检测其对细胞周期的影响,并用Hoechst 33342染色法观察细胞凋亡的形态学改变.结果 高良姜挥发油可呈不同程度地剂量依赖性抑制HL-60细胞株增殖,能浓度依赖性阻滞HL-60细胞于G0/G1期,且随其浓度增加诱导细胞凋亡的形态越明显.结论 高良姜挥发油能抑制白血病细胞株HL-60的增殖,并具有阻滞细胞周期进程和诱导细胞凋亡的能力.     

银杏叶多糖抑制人白血病细胞增殖的试验研究

[目的]明确银杏叶多糖(PGBL)对白血病的治疗价值。[方法]以干燥银杏叶为材料,提取PGBL;向100μl对数增长期的人急性早幼粒白血病HL-60细胞悬液中分别加入100μl含PGBL50、100、200μg/ml的RPMI-1640培养液,以加入100μlRPMI-1640纯培养液为对照,研究不同浓度(50、100、200μg/ml)PGBL对HL-60细胞增殖的抑制率。[结果]50、100、200μg/ml PGBL对人急性早幼粒白血病HL-60细胞增殖均有不同程度的抑制作用,且随着药物浓度和作用时间的增加,抑制作用增强,即PGBL对HL-60细胞增殖的抑制作用存在剂量-时间依赖性;方差分析结果表明,PGBL对HL-60细胞增殖的抑制率显著高于对照(P<0.01)。[结论]PGBL对HL-60细胞增殖具有较好的抑制作用,且该抑制作用具有浓度-时间依赖性。     

内毒素诱导的细胞凋亡和阳离子A的保护效应

为揭示内毒素（ET）诱导体内细胞凋亡的现象和阳离子A（CA）的保护效应,从家兔耳缘静脉注射400U／kgET建立内毒素休克模型,并设对照组和cA保护组,在第3、4、8和12h分别收集外周血淋巴细胞（PBL）和肝细胞,电子显微镜观察PBL发生凋亡的形态学特征;运用缺口末端标记技术（TUNEL）观察肝细胞凋亡的形态学变化并计算肝细胞凋亡指数;采用流式细胞术（FCM）检测肝细胞的凋亡率。结果显示,PBL发生凋亡的超微结构特征表现为核染色质浓缩呈“新月体”状、“八字形”状或“花瓣”状等,在休克晚期出现凋亡小体;与对照组相比,TUNEL法检测到的肝细胞凋亡指数先上升到70％,然后下降到59％,后又上升到最高值86％,肝细胞及肝脏组织的损害程度也与此类似;FCM检测到肝细胞的凋亡率随着注射ET后时间的延长而增加（从10％增加到20％）。CA保护组中PBL的细胞病变较轻微、肝细胞的凋亡指数和肝细胞的凋亡率均出现不同程度的降低（P〈0．01,P〈0．05）。试验提示,ET能够诱导PBL和肝细胞的凋亡及功能损害,导致了内毒素性休克;而cA可有效地中和血循环中的ET,减少PBL和肝细胞的凋亡,对内毒素休克有一定的保护作用。     

survivin与三苯氧胺诱导乳腺癌细胞凋亡及耐药的关系

目的：探讨survivin在三苯氧胺（TAM）诱导乳腺癌细胞凋亡及其细胞耐药中的作用。方法：用RT-PCR和Western-blot检测survivin mRNA和蛋白表达，四唑蓝（MTT）比色法测定细胞增殖活性．用流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：TAM浓度在1μg／ml时，发挥最大的促凋亡和抑增殖活性，且survivin mRNA及蛋白表达下降最明显．细胞生长抑制率随着TAM浓度的增加和作用时间的延长而增加。结论：TAM诱导乳腺癌细胞凋亡与survivin有关．survivin与肿瘤细胞的凋亡和增殖有关，并参与肿瘤细胞耐药．survivin可能是乳腺癌基因治疗的一个靶点。     

转基因马铃薯中人白介素-12体外诱导人肝癌细胞凋亡的研究

[目的]检测从人白介素-12（human interleukin12,hIL-12）转基因马铃薯中提取的hIL-12的抗肝癌效应。[方法]用MTT法检测转基因马铃薯中hIL-12对人肝癌细胞HepG22.2.15的体外杀伤作用;用AnnexinV/PI双染色法加激光共聚焦显微镜观察转基因马铃薯中hIL-12对HepG22.2.15细胞的诱导凋亡作用。[结果]转基因马铃薯中表达的hIL-12与重组人白介素-12（rhIL-12）在体外对HepG22.2.15具有杀伤作用,而野生对照组无杀伤作用;AnnexinV/PI双染色法加激光共聚焦显微镜观察结果表明,转基因马铃薯中表达hIL-12可诱导HepG22.2.15细胞凋亡。[结论]转基因马铃薯表达体系表达的人白介素-12具有抗肝癌细胞增殖、促进肝癌细胞凋亡的作用。     

Effects of Ligustrazine Combined with Cisdichlorodiamine Platinum on Anti-proliferation,Cell Cycle and Apoptosis of Human Gastric Carcinoma SGC-7901 Cell Lines

[Objective] This study aimed to investigate the combination effects of ligustrazine and cis-dichlorodiamine platinum(DDP) on anti-proliferation, cell cycle and apoptosis of SGC-7901 cell lines in vitro. [Method] SGC-7901 cells were treated with ligustrazine and DDP alone or combined for 48 h for morphology assay.Anti-proliferative effects with the same treatment for 24, 48 and 72 h were assayed by MTT method, respectively. Cell cycle distribution and apoptosis assay of treated cells were performed in flow cytometry. Zhengjun Jin's protocol was used to assay the effect of drug combination. [Result] Ligustrazine significantly increased the proliferation inhibition rate of DDP on SGC-7901 cells in combination with DDP, comparing with the effects of ligustrazine or DDP alone, and exhibited synergistic antitumor effect. The combination drug treatment induced cell cycle arrest occurred in S and G2 phase of the cell cycle and increased the apoptosis rate significantly.[Conclusion] Our results indicate that ligustrazine, as a low-toxic and natural herbal component, can significantly increase the anti-proliferative effect and apoptosis rate of antitumor drug DDP on human gastric carcinoma SGC-7901 cells.     

印楝素对小菜蛾胚胎细胞增殖和凋亡的影响

【目的】探讨印楝素对小菜蛾Plutella xyllostella胚胎细胞增殖和凋亡的影响及可能的机制。【方法】将体外培养的小菜蛾胚胎细胞分为印楝素处理组和未处理组,采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖的抑制率,激光共聚焦镜检PI染色后的细胞死亡和DAPI染色后的凋亡小体,通过Western-blotting检测各组细胞Caspase-3的表达情况以及通路蛋白Akt的磷酸化水平。【结果】印楝素对小菜蛾胚胎细胞有明显的增殖抑制作用,且呈现浓度依赖性,24 h的IC_(50)为4.4μg·mL~(-1)。印楝素处理后的细胞经PI染色后能明显观察到死亡细胞,DAPI染色后可见凋亡小体;Caspase-3蛋白发生剪切,并且抑制Akt的磷酸化水平。【结论】印楝素对小菜蛾胚胎细胞的增殖有明显的抑制作用,并通过抑制Akt信号通路的活化,诱导细胞产生依赖于Caspase-3的Ⅰ型凋亡。     

桦褐孔菌粗多糖对急性弓形虫感染雄性小鼠睾丸生精细胞凋亡的影响

[目的]探讨桦褐孔菌粗多糖对弓形虫感染小鼠睾丸生精细胞凋亡的影响。[方法]用3种剂量桦褐孔菌粗多糖治疗弓形虫感染所致的睾丸生精障碍小鼠,使用流式细胞仪检测生精细胞凋亡率,并设立空白对照组、阴性对照组和阳性对照组进行对比。[结果]与阴性对照组比较,桦褐孔菌粗多糖高剂量组的睾丸生精细胞凋亡率极显著降低（P〈0.01）中剂量组及阳性对照组的睾丸生精细胞凋亡率显著降低（P〈0.05）。[结论]桦褐孔菌粗多糖具有修复睾丸病理损伤并降低睾丸生精细胞凋亡率的作用。     

酵母多糖对小鼠免疫功能影响的体外实验研究

[目的]研究酵母多糖对小鼠免疫功能的影响,为酵母多糖相关产品的开发利用提供可靠的实验依据。[方法]分离提取小鼠的脾细胞,分为添加酵母多糖组和不加酵母多糖的对照组,检测小鼠脾细胞的增殖活性;留取细胞上清液,测定白细胞介素2（IL-2）、γ干扰素（IFN-γ）含量;用流式细胞术检测T淋巴细胞和B淋巴细胞的数量,观察酵母多糖对T、B细胞增殖的影响。[结果]酵母多糖组增殖活性明显高于对照组（P〈0．01）;在一定剂量范围内,该组IL-2、IFN-γ的含量与酵母多糖呈剂量依赖关系,另外酵母多糖对T、B细胞均有明显的增殖效果。[结论]酵母多糖可显著提高小鼠免疫系统的功能。     

单细胞凝胶电泳技术评价毛鸡骨草的遗传毒性

[目的]应用单细胞凝胶电泳技术评价毛鸡骨草的遗传毒性。[方法]试验分为5组:阳性对照组(环磷酰胺组)、阴性对照组(生理盐水组)、毛鸡骨草高(30 g/kg)、中(20 g/kg)、低(10 g/kg)剂量组,利用单细胞凝胶电泳技术分析小鼠肺、肾、肝、睾丸细胞的尾部DNA率(Tail DNA%)和尾矩(Tail Moment),以观察毛鸡骨草对小鼠DNA的影响。[结果]毛鸡骨草各剂量组对小鼠肺、肾、肝、睾丸细胞的Tail DNA%和Tail Moment影响明显低于阳性对照组,差异极显著(P0.01);毛鸡骨草高剂量组肝细胞Tail DNA%和Tail Moment与阴性对照组相比明显降低,差异极显著(P0.01);其他各剂量组小鼠细胞Tail DNA%和Tail Moment与阴性对照组比,无明显差异(P0.05)。[结论]毛鸡骨草在试验剂量范围内对小鼠肺、肾、肝、睾丸细胞DNA无损伤。     

齐墩果酸抗大鼠移植性肝癌作用的研究

[目的]研究齐墩果酸抗肿瘤作用以及对肿瘤血管内皮生长因子（VEGF）和微血管密度（MVD）的影响,探讨齐墩果酸抗肝癌作用机制。[方法]32只大鼠移植性肝癌模型随机分为齐墩果酸高剂量组（100mS／kg·d）、齐墩果酸低剂量组（50mg／kg·d）、氟尿嘧啶（5-Fu）组（5mg／kg·d）、生理盐水组,每组8只,前3组于造模成功后第8天腹腔注射给药,生理盐水组灌胃给药,连续用药14d后停药24h,取血处死大鼠,取出瘤块称重,常规瘤体组织形态学观察,分离血清检测肝功能指标谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）,用免疫组化法检测瘤块中VEGF和MVD的表达情况。[结果1齐墩果酸给药组瘤重明显低于生理盐水对照组,与生理盐水对照组比较差异显著（P〈0．01）;齐墩果酸给药组及5一FIJ组血管条数目密集程度较生理盐水组明显减少;齐墩果酸对血清中AsT、AIJT活性升高有明显的拮抗作用,并且AsT的含量与生理盐水对照组比较有显著性差异（P〈0．01）;造模各组VEGF及MVD的表达水平均明显高于空白组（P〈0．01）,两者的表达均以生理盐水组最高。l结论]齐墩果酸可显著抑制大鼠体内癌细胞的生长,对移植性肝癌所造成的肝功能损伤具有明显的保护作用,其作用机制可能与下调VEGF和MVD的表达水平有关。