白花除虫菊四倍体与二倍体株系抗氧化酶活性研究（摘要）

[目的]测定白花除虫菊四倍体株系与二倍体对照株系试管苗和田间叶片中SOD、POD及APX酶的活性,为选育抗性强的白花除虫菊优良四倍体品种提供理论依据。[方法]先加入预冷的提取缓冲液（pH=7.5,0.05 mol/L Tris-Hcl缓冲液）冷冻离心提取叶片中的各酶液。蛋白含量和SOD活性的测定按南京建成生物工程研究所试剂盒说明书操作。POD总活力测定：100μl酶液用Tris-HCl（pH=7.0）溶液稀释至1 ml,准确加入0.1%的愈创木酚1 ml,30℃水浴10 min后,立即测定溶液在470 nm处的吸光度,然后准确加入0.08%的H_2O_2 100μl,充分混匀,反应2 min时立即测定溶液在470 nm处的吸光度,求出反应前后的吸光度差值。酶的比活力用ΔOD_（470）/（mg·min）表示。APX活性测定：3 ml反应液中含50.0mmol/L PBS（pH=7.0）,0.1 mmol/L EDTA,0.1 mmol/LH2O2,0.5 mmol/LASA,最后加入100μl酶液。在室温下记录10 s,30 s时290 nm处吸光度的变化。酶活单位定义为每小时氧化1μmol ASA的酶量为一个酶活单位。[结果]四倍体株系与二倍体对照株系比较,其保护酶系统中各种抗氧化酶的活性都能得到普遍提高,并且各株系的田间样品与试管苗样品的各抗氧化酶活性呈正相关,因此可以应用组织培养技术在育种的初期试管苗阶段进行早期筛选,缩短选育时间,节约人力物力。[结论]试管苗期间各株系的抗氧化酶活性可以作为筛选抗病抗逆性强的白花除虫菊优良株系的参考指标。     

茎瘤芥超氧化物歧化酶活性的研究

[目的]揭示茎瘤芥超氧化物歧化酶（SOD）的活性以及pH、底物浓度、温度对SOD活性的影响。[方法]以茎瘤芥的瘤茎及叶片为试验材料,用邻苯三酚自氧化法分别测得它们中SOD的活性,以及pH、底物浓度、温度对其活性的影响,从而比较茎瘤芥瘤茎及叶片中SOD的含量,以及是否具有开发利用的价值。[结果]茎瘤芥瘤茎SOD的活性在200～300 U/g;茎瘤芥叶片SOD的活性在250～400U/g。说明茎瘤芥叶片SOD活性高于茎瘤芥瘤茎SOD活性。茎瘤芥SOD在pH为8.3～8.6有最大酶活性;最适温度为50℃;最适底物浓度为7 mmol/L左右。[结论]茎瘤芥叶片SOD活性高于茎瘤芥瘤茎SOD活性。研究结果为开发茎瘤芥资源提供了参考。     

含笑属RAPD反应条件优化及遗传多态性分析

[目的]确立含笑属植物RAPD反应的最优条件,确定7种含笑属植物的亲缘关系。[方法]采用改进的CTAB法提取木兰科含笑属7种植物叶总DNA,进行RAPD分析,分别研究了模板DNA、引物、dNTP、Mg;^2＋和Taq DNA聚合酶用量对RAPD反应的影响。[结果]RAPD最优反应体系为：反应体积20μl,内含125ng模板DNA,0．3μmol／L引物,0．5U Taq聚合酶,1．5mmol／L MgCl2,0．1mmol／L dNTP,2μl 10x buffer。应用Nei距离法计算各种间的相似系数,采用UPGMA法进行聚类分析,7种含笑种可分为3大类,[结论]筛选的最佳RAPD反应条件可为含笑属植物的分类和遗传多样性分析提供理论依据。     

油楠基因组DNA提取·ISSR反应体系优化及引物筛选

[目的]对油楠基因组DNA提取、ISSR反应体系优化及引物筛选进行探讨。[方法]运用改良CTAB法对油楠树皮进行基因组DNA提取,利用单因素试验,对油楠ISSR-PCR反应各因素水平进行优化。[结果]运用改良CTAB法对油楠树皮进行基因组DNA提取效果最佳;最优体系:20μl反应体系中,模板用量20 ng,引物浓度0.6μmol/L,d NTPs浓度0.2 mmol/L,Mg2+浓度2.0 mmol/L,Taq酶用量1.5 U,10倍反应缓冲液2μl,dd H2O补至20μl;以该体系为基础进行引物筛选,在100条ISSR随机引物中筛选出13条多态性较高、扩增条带清晰、重复性好的引物。[结论]该研究丰富了油楠遗传学基本资料,为油楠遗传多样性研究奠定基础。     

马铃薯SRAP-PCR反应体系的优化

[目的]建立马铃薯大西洋SRAP—PCR反应体系,为今后的研究奠定基础。[方法]以马铃著大西洋基因组DNA为模板,从Mg^2＋浓度、Taq酶浓度、dNTPs浓度、引物浓度和模板DNA浓度5个方面对大西洋SRAP-PCR反应体系进行优化。[结果]适合大西洋的SRAP-PCR反应体系为：模板DNA1．0μl（50ng／μl）,Vaq酶1．7μl（1U／μl）,引物对1．5μl（1μmol／L）×2,MgCl2 2．4μl（25mmol／L）,dNTPs0．6μl（10mmol／L）,10×Buffer3．0μl,ddH2O18．3μl,总体积30μl。[结论]建立的SRAP-PCR反应体系是稳定可靠的。     

油茶SSR-PCR反应体系的优化研究

[目的]优化油茶（Camellia oleifera）SSR-PCR反应体系。[方法]应用改良CTAB法提取油茶基因组DNA,采用L16（45）正交设计试验,对影响油茶SSR-PCR反应体系的5个因素（Taq聚合酶浓度、模板浓度、dNTPs浓度、引物浓度和Mg2＋浓度）在4水平上进行筛选。PCR结果经统计分析软件DPS分析,并对退火温度进行了摸索,确立了油茶SSR-PCR的优化体系。[结果]油茶SSR-PCR的优化体系总体积为20μl,包括Taq聚合酶量为1.0 U/20μl,模板浓度75 ng/20μl,dNTPs浓度为0.15 mmol/L,引物浓度为0.40μmol/L,Mg2＋浓度为1.50 mmol/L,退火温度为50℃。[结论]该研究确定的优化体系可以为油茶资源遗传多样性分析奠定技术基础。     

响应面法优化费菜SOD提取条件的研究

[目的]利用响应面法优化费菜SOD的提取条件。[方法]首先进行单因素优化试验,单因素分别为时间、p H、液料比。经过单因素优化试验,得出最优时间、最优p H、最优料液比。通过Design expert8.0.5软件设计出17种试验方案。通过试验,得出每种方案的蛋白得率,利用Design expert8.0.5软件进行了方差分析,各因素之间的交互作用分析,并得出了相应的数学模型。[结果]单因素试验中,最优时间为1 h,最优p H为7.8、最优料液比为1∶15 g/m L。各因素交互作用分析表明,提取费菜SOD的最佳方案为提取时间0.98 h、p H7.79、料液比1∶13.71 g/m L。利用邻苯三酚自氧法测得提取的SOD酶活为12 U/g。[结论]该研究结果可为费菜资源的进一步利用与研究提供参考。     

邻苯三酚自氧化法测定SOD活性中检测波长的优化

[目的]确定邻苯三酚自氧化法测定SOD活性的波长。[方法]采用双光束紫外可见分光光度计分别对不同时间点及时间段邻苯三酚自氧化中间产物吸光度进行测定。[结果]邻苯三酚自氧化初始中间产物的吸收度在320nm处线性好、灵敏度高。[结论]320nm可作为邻苯三酚自氧化法测定SOD活性的测定波长。     

东北红豆杉RAPD反应体系的优化

[目的]研究东北红豆杉RAPD反应体系的优化条件。[方法]以东北红豆杉叶片为材料,用改进CTAB法提取DNA,分别从模板DNA浓度、引物浓度、dNTP浓度,Taq DNA聚合酶量及镁离子浓度5个方面对东北红豆杉RAPD扩增效果的影响进行分析。[结果]通过各因子的比较分析,建立了东北红豆杉RAPD优化体系：20μl PCR反应总体积中含模板DNA 10 ng,Mg^2＋2.0 mmol/L,引物15pmolμ/l,dNTPs 0.2 mmol/L,Taq DNA聚合酶1.0 U,10×buffer缓冲液2μl,以双蒸水补充至20μl。[结论]为进一步探索与东北红豆杉性别鉴定相关的研究提供技术支持。     

送春与多花兰杂种ISSR-PCR反应体系的建立与优化

[目的]建立与优化送春与多花兰杂种ISSR-PCR的反应体系。[方法]用CTAB法提取送眷、多花兰和送春×多花兰杂种的基因组DNA,针对ISSR-PCR扩增的体系中的Taq酶浓度、Mg^2＋浓度、dNTP浓度和引物的用量4个因素,进行L9（4^3）正交试验,用引物UBC827扩增两亲本的混合DNA,所得PCR产物在琼脂糖凝胶上检测,同时针对去离子甲酰胺对反应的影响进行初步对照试验。[结果]根据PCR产物的琼脂糖凝胶检测结果,由试验得到的最佳反应体系为：1×buffer、2．5mmol／L Mg^2＋、0．6μmol／L引物、0．25mmol／L dNTP、1U Taq酶、0．4μl去离子甲酰胺、50ng;模板DNA,总体积为加μl。[结论]该反应体系的建立为利用ISSR技术进行兰花遗传连锁图谱构建、基因定位、种质资源鉴定与分类等提供参考。     

皱皮木瓜超氧化物歧化酶分离纯化研究

[目的]探讨皱皮木瓜超氧化物歧化酶（SOD）分离纯化工艺。[方法]以重庆綦江皱皮木瓜为试验材料,采用硫酸铵分级沉淀、Se-vage法除杂蛋白、丙酮再次沉淀脱色除杂和Sephadex G-100凝胶层析,分离纯化皱皮木瓜SOD。采用Folin-酚法测定蛋白质含量,用改良的邻苯三酚自氧化法测定酶活性。[结果]皱皮木瓜SOD在层析过程中得到较好的分离纯化。其纯化倍数是178.72倍,回收率是4.94%,比活力是303.82 U/mg蛋白。SDS-PAGE纯度鉴定结果表明,电泳图为一条谱带,表明分离纯化到达电泳纯的样品。[结论]采用该分离纯化工艺得到比活力较高,达到电泳纯的皱皮木瓜SOD样品。     

多酚氧化酶对邻苯三酚自氧化法测定SOD活性的干扰

测定了甘薯、小白菜叶和人红细胞三种生物材料对邻苯三酚自氧化速率的影响、它们的 SOD 活性和多酚氧化酶的活力;讨论了多酚氧化酶对邻苯三酚自氧化法测定 SOD活性的干扰。结果表明:在植物中,多酚氧化酶含量较多而 SOD 活性较低,而在动物材料中,多酚氧化酶含量低而 SOD 活性较高。因此,植物材料不宜采用邻苯三酚自氧化法测定 SOD 的活性.但可作为测定动物材料中 SOD 活性的一种简便、灵敏的方法。     

家蚕血液中超氧物岐化酶（SOD）的研究

用连苯三酚自氧化法测定家蚕血液中超氧物岐化酶活性的结果表明，家蚕血液中超氧物岐化酶活性不仅在品种间存在差异，而且在同一品种的雌雄体间亦存在明显差异，不同发育期其血液中超氧物岐化酶的活性和同功酶均有差异．幼虫期同一品种雄蚕血液中超氧物岐化酶活性高于同一生长期的雌蚕，五龄蚕超氧物岐化酶活性低于四龄蚕．幼虫期与蛹期超氧物岐化酶聚丙烯酰胺凝胶电泳显示出活性谱带亦不相同，幼虫期多为一条活性带，且活性带峰值是雄蚕高于雌蚕；而蛹期有的品种出现两条活性带，其峰值则显示出雌蚕高于雄蚕     

野生蛹虫草与培植蛹虫草SOD酶活力的对比研究

[目的]为蛹虫草的进一步开发和利用提供依据。[方法]采用改良的邻苯三酚自氧化法,测定比较野生蛹虫草菌丝体、子座与培植蛹虫草菌丝体、子座之间的SOD酶活力。[结果]野生蛹虫草菌丝体的SOD酶活力(64.3 U/ml)明显高于子座的SOD酶活力(47.1U/ml),培植蛹虫草菌丝体的SOD酶活力高于子座的SOD酶活力。野生蛹虫草不同部位的SOD酶活力均高于培植蛹虫草的相应部位,但差距不大,说明培植蛹虫草的栽培技术已日益成熟,培植蛹虫草发酵菌丝体是其发展的重点。[结论]在野生蛹虫草资源日益缺乏的今天,培植蛹虫草完全可以取代野生蛹虫草发挥其保健治疗作用。     

冰醋酸法提取猪血红素的研究

[目的]合理利用动物血液,优化冰醋酸提取猪血红素的方法.[方法]试验以新鲜猪血为原料,采用冰醋酸法提取新鲜猪血中的血红素,考察冰醋酸的添加量、反应温度、反应时间、氯化钠添加量等因素对血红素提取的影响.[结果]试验表明,冰醋酸法提取猪血红素的最佳工艺为：冰醋酸添加量为血球4倍,氯化钠添加量为血球的2.4％,反应时间30 min,反应温度为95℃,此条件下提取的血红素含量为40.2％.[结论]研究可为猪血资源的合理开发利用提供理论依据.     

奶中超氧化物歧化酶(SOD)活性的研究

采用邻苯三酚自氧化法，对五种有代表性的动物奶中ＳＯＤ活性进行了研究。结果表明：在种间是猪＞狗＞人＞奶山羊＞奶牛，在种内随个体略有变化，在泌乳期间是初乳＞末乳＞常乳，在泌乳期内随泌乳时间呈规律性变化。奶中所含的ＳＯＤ，既能提高饮奶人的免疫功能，又利于奶本身的保鲜。     

仙人掌超氧化物歧化酶提取与纯化研究

以仙人掌为试验材料,采用硫酸铵分级沉淀法得到超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase,SOD）粗酶液。然后用Sephadex（葡聚糖凝胶）G-75层析柱层析对粗酶液进行进一步纯化,最后用邻苯三酚法测定酶活力,并对酶活力主要影响因素（包括pH值、温度、抑制剂）进行了研究。结果显示仙人掌SOD酶比活力为751.56U.mg-1。pH值为7.5~8.5时酶活力最大,稳定性也好。温度维持在25~30℃时酶活力最高。由于过氧化氢和氰化钾均能使仙人掌SOD的酶活力显著下降,因而可以初步判断从仙人掌中提取到的SOD是Cu.Zn-SOD。     

利用几种生物原料提取SOD的比较研究

研究利用不同生物原料提取SOD(超氧化物歧化酶)的差异,采用有机溶剂处理,分离提取红酵母、啤酒酵母、香菇、平菇和毛霉菌体中的SOD,并以邻苯三酚自氧化法测定它们的活性.结果表明,利用啤酒厂的废酵母提取SOD,不仅成本很低,而且酶活力高,可作为SOD工业化生产的最佳原料.     

纳米蜂胶抗氧化活性的研究

[目的]为今后的纳米蜂胶研究提供理论依据。[方法]以纳米TiO2为主要原料,采用共混法,经过一系列的工艺,制得纳米蜂胶粉末。通过邻苯三酚自氧化法探讨纳米蜂胶对超氧阴离子(O2-)的清除效果,并将其效果与采用蜂胶醇提液和Vc的清除效果进行比较。[结果]邻苯三酚自氧化速率为ΔA1/Δt=37.78×10-4。先分别往试管中加入蜂胶醇提液、纳米蜂胶、Vc,再加入邻苯三酚,180 s内均能够清除O2-,其中纳米蜂胶的清除效果好于Vc,而Vc又好于蜂胶醇提取液。对于这3种样品液而言,加入0.1 ml就能够很好的清除O2-。[结论]纳米蜂胶比普通蜂胶能更好地清除体内过多的自由基,降低过氧化脂质的生成,是一种新型的抗氧化产品。