新疆部分地区生乳中金黄色葡萄球菌的分离鉴定及耐药性分析

【目的】探明新疆部分地区生乳中金黄色葡萄球菌流行情况及耐药性,为该地区生乳中金黄色葡萄球菌的监测及保障生乳质量安全提供理论依据。【方法】试验随机从南北疆规模化奶牛场采集110份生乳样品。采用增菌培养、分离纯化、革兰氏染色、生化鉴定及PCR法对奶样中金黄色葡萄球菌进行分离鉴定,并利用微量肉汤稀释法及PCR方法对金黄色葡萄球菌进行16种抗菌药物的耐药表型及耐药基因分析。【结果】从110份奶样中分离出18株金黄色葡萄球菌,分离株呈浅黄色、光滑凸起的圆形菌落,革兰氏染色镜检呈紫色、短链状排列的革兰氏阳性菌,生化试验结果符合金黄色葡萄球菌生化特点,经16S rDNA及nuc基因PCR扩增鉴定为金黄色葡萄球菌,分离率为16.36%(18/110)。药敏试验结果显示,金黄色葡萄球菌分离株对氨苄西林、青霉素及磺胺异噁唑具有较高的耐药性,耐药率分别为100%、83.33%和77.78%,而对万古霉素、复方新诺明、苯唑西林、头孢噻吩、头孢噻呋、利福昔明及环丙沙星7种抗菌药物高度敏感,敏感率分别为100%、100%、94.44%、94.44%、94.44%、94.44%和94.44%。其中有14株金黄色葡萄球菌为多重耐药菌,多重耐药率为77.78%。耐药基因检测结果显示,大环内酯类耐药基因ermB检出率最高,为50.00%,其次为β-内酰胺类耐药基因mecA,检出率为27.28%,磺胺类耐药基因Sul1的检出率为22.22%。【结论】新疆奶牛场生乳中分离的金黄色葡萄球菌的流行及耐药情况仍较严重,且存在多重耐药现象,因此,对生乳中金黄色葡萄球菌耐药性的监测有重要意义。     

上海地区生乳中肺炎克雷伯氏菌毒力基因和耐药性分析

为了解上海市生乳中肺炎克雷伯氏菌污染水平,分析本市乳制品中肺炎克雷伯氏菌污染风险来源及耐药情况,本研究对上海市乳品加工厂的生乳样本和养殖场环境样本进行了肺炎克雷伯氏菌计数和细菌分离鉴定,并对分离菌株开展毒力基因检测和耐药性分析。结果显示,上海市健康奶牛中肺炎克雷伯氏菌分离率为11.25%,远低于患乳房炎奶牛样品检出率;环境溯源样品中肺炎克雷伯氏菌检出率为21.3%,多在垫料及土壤中检出;对80家奶牛场未患乳房炎奶牛样品和47批次环境溯源样品细菌分离结果均表明,夏季肺炎克雷伯氏菌检出率显著高于冬季;本市分离的肺炎克雷伯氏菌,对β-内酰胺类和氨基糖苷类药物存在普遍耐药,且多重耐药性十分严重,耐药菌株占比达98.5%;分离菌株中毒力基因mrkD、fimH、wabG的检出率分别为88.89%、66.67%、33.33%,rmp A未检出。以上结果表明,夏季为肺炎克雷伯氏菌高发季节,且主要的外部污染风险为垫料和土壤,毒力基因检测表明,菌株不具备高致病性,多为呼吸道和消化道常在菌。通过本研究,提示居民不宜直接饮用生乳,养殖场应加强养殖环境、挤奶及生产运输环节的卫生管理,不滥用抗生素。     

牛奶中金黄色葡萄球菌的耐药性及其肠毒素分型研究

为了解我国部分生鲜牛奶中金黄色葡萄球菌污染状况和耐药情况,为指导奶牛场安全合理用药和保障消费者食品安全提供依据.采集3个省共6个奶牛场及挤奶站的新鲜牛奶进行金黄色葡萄球菌的分离鉴定、药敏试验以及分离菌肠毒素PCR分型.结果从338份生鲜牛奶中共分离鉴定金黄色葡萄球菌共39株,分离率为11.54％;所有分离菌株都有不同程度的耐药,尤其对磺胺类药物和青霉素类的耐药性非常严重;92.3％的菌株含SEA SAJ基因肠毒素.     

新疆维吾尔自治区阿拉尔市某规模化养殖场猪乳源金黄色葡萄球菌的分离鉴定及其毒力、耐药性分析

[目的]分离鉴定新疆维吾尔自治区阿拉尔市猪乳源金黄色葡萄球菌,了解其致病性和耐药性。[方法]从阿拉尔市某规模化养殖场收集6份新鲜猪乳样本,采用甘露醇高盐琼脂（MSA）培养基分离乳样中的金黄色葡萄球菌,利用表型鉴定方法及细菌16S rDNA序列分析法对分离到的菌株进行鉴定,检测分离菌株的生物被膜形成能力,利用K-B纸片扩散法进行药物敏感性试验,利用PCR法检测毒力基因和耐药基因。[结果]经分离培养及分子生物学鉴定,从6份乳样中获得2株金黄色葡萄球菌,分离率为33.33%(2/6);2株金黄色葡萄球菌均具有强生物被膜形成能力（+++）;2株金黄色葡萄球菌均对利福平敏感,均对青霉素、头孢西丁、四环素、红霉素、替米考星、克林霉素和磺胺甲噁唑耐药;在检测的5种耐药基因中,2株金黄色葡萄球菌均携带ant(4)基因和mecA基因;在检测的20种毒力基因中,共检测到6种毒力基因,其中,2株金黄色葡萄球菌均携带seg、sei、hlb、fnbA、clfA基因,有1株携带hla基因。[结论]该养殖场猪乳源金黄色葡萄球菌生物被膜形成能力强,携带多种毒力基因和耐药基因,表现为多重耐药性。     

西宁市食品中金黄色葡萄球菌污染状况及其肠毒素基因型分布研究

为了掌握金黄色葡萄球菌在西宁地区食品中的分布规律,了解不同来源、不同种类食品中金黄色葡萄球菌的污染状况及其5种肠毒素基因型(A、B、C、D、E)的分布状况。在西宁市地区采集108份食品样品,按食品微生物学(GB 4789.10-2010)金黄色葡萄球菌检验方法结合Baird-Parker氏鉴别培养基筛选金黄色葡萄球菌,通过对金黄色葡萄球菌耐热核酸酶(nuc)基因的PCR扩增以及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(Matrix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)对疑似菌落进行鉴定;同时利用PCR技术对金黄色葡萄球菌的5种肠毒素基因型进行分型检测。经分离及生化鉴定,从108份样品中得到60株疑似金黄色葡萄球菌、PCR方法及MALDI-TOF MS结果,确认为金黄色葡萄球菌,检出率为55. 56%;同时60株金黄色葡萄球菌分别检出A型6株、B型34株和D型2株,共检测到42株,检出率为70%,C型和E型未被检测到。表明西宁市食品中金黄色葡萄球菌的污染处于一个相对较高水平,因食品来源与种类不同,金黄色葡萄球菌的污染情况和毒素基因的分布情况也各不相同,对西宁市食品质量安全控制具有参考意义。     

新疆南疆地区乳源金黄色葡萄球菌的分离鉴定及对氟苯尼考纳米凝胶的药物敏感性研究

为了研究氟苯尼考纳米凝胶对新疆南疆地区乳源金黄色葡萄球菌的抑菌效果,试验从新疆南疆地区某奶牛场的乳房炎患病奶牛乳样中分离纯化金黄色葡萄球菌,采用生化试验、PCR扩增及测序等方法进行细菌鉴定,并通过比较氟苯尼考原料药、氟苯尼考纳米凝胶和氟苯尼考注射液对金黄色葡萄球菌分离株的抑菌圈直径(DIZ)、最小抑菌浓度(MIC)和抑菌曲线分析氟苯尼考纳米凝胶对金黄色葡萄球菌分离株的抑菌效果。结果表明：从乳样中分离到一株细菌,该分离株革兰氏染色、镜检后呈蓝紫色并排列成葡萄串状,触酶、血浆凝固酶和甘露醇发酵试验结果均为阳性,其基因组DNA中能扩增出金黄色葡萄球菌耐热核酸酶(nuc)基因,16S rDNA基因序列与金黄色葡萄球菌的相似性为99.7%,判断该分离菌为金黄色葡萄球菌。氟苯尼考原料药、氟苯尼考纳米凝胶和氟苯尼考注射液对金黄色葡萄球菌分离株和金黄色葡萄球菌ATCC 29213株均产生抑菌作用,DIZ大小为氟苯尼考纳米凝胶>氟苯尼考注射液>氟苯尼考原料药,均表现为高度敏感,其中氟苯尼考纳米凝胶对金黄色葡萄球菌分离株和金黄色葡萄球菌ATCC 29213株的DIZ均显著高于氟苯尼考原料药和氟...     

新疆、内蒙古部分地区乳房炎奶样中金黄色葡萄球菌的流行性与耐药性分析

为确定患乳房炎奶牛乳中金黄色葡萄球菌的流行性和耐药性状况,试验自2018年4月至2018年5月采集了新疆地区70例和内蒙古地区50例患乳房炎奶牛生鲜乳样。通过对奶样中金黄色葡萄球菌进行增菌培养、分离纯化,KB纸片扩散法药敏试验及PCR耐药基因检测发现,新疆和内蒙古地区奶样中金黄色葡萄球菌分离率分别为28.6%和54.0%;新疆地区分离的金黄色葡萄球菌菌株对青霉素G的耐药性最高(75.0%),其次是磺胺异噁唑(60.0%)、林可霉素(55.0%);内蒙古地区的金黄色葡萄球菌菌株同样对青霉素G高度耐受,耐药率为70.4%,其次为林可霉素(63.0%)、克林霉素(51.9%);两地区所分离菌株中,88.9%以上携带多种耐药基因,呈现多重耐药性;两地区所检出的高频耐药基因分别是新疆地区的ermA(30.0%)、dfrS1(30.0%)基因和内蒙古地区的lnuA(46.2%)基因。     

新疆、内蒙古部分地区乳房炎奶样中金黄色葡萄球菌的流行性与耐药性分析

为确定患乳房炎奶牛乳中金黄色葡萄球菌的流行性和耐药性状况,试验自2018年4月至2018年5月采集了新疆地区70例和内蒙古地区50例患乳房炎奶牛生鲜乳样。通过对奶样中金黄色葡萄球菌进行增菌培养、分离纯化,KB纸片扩散法药敏试验及PCR耐药基因检测发现,新疆和内蒙古地区奶样中金黄色葡萄球菌分离率分别为28.6%和54.0%;新疆地区分离的金黄色葡萄球菌菌株对青霉素G的耐药性最高(75.0%),其次是磺胺异噁唑(60.0%)、林可霉素(55.0%);内蒙古地区的金黄色葡萄球菌菌株同样对青霉素G高度耐受,耐药率为70.4%,其次为林可霉素(63.0%)、克林霉素(51.9%);两地区所分离菌株中,88.9%以上携带多种耐药基因,呈现多重耐药性;两地区所检出的高频耐药基因分别是新疆地区的ermA(30.0%)、dfrS1(30.0%)基因和内蒙古地区的lnuA(46.2%)基因。     

鸡舍环境金黄色葡萄球菌气溶胶产生及其传播的REP-PCR鉴定

采用ANDERSEN-6级空气微生物样品收集器和RCS离心式采样器在山东泰安4个鸡场舍内空气、舍外环境上风向10、50m和下风向10、50、100、200、400m不同距离处收集金黄色葡萄球菌,计算每个采样点的金黄色葡萄球菌浓度;与此同时,收集鸡的粪便,分离金黄色葡萄球菌。利用金黄色葡萄球菌DNA基因外重复一致回文序列聚合酶链式反应（Repetitive extragenic palindromic elements PCR,REP—PCR）鉴定技术,扩增不同测量点和粪便分离的金黄色葡萄球菌的DNA图谱。通过每个采样点的金黄色葡萄球菌的浓度变化以及金黄色葡萄球菌遗传相似性分析确认动物舍微生物气溶胶向舍外环境的传播。结果显示：4个鸡场舍内空气中金黄色葡萄球菌的浓度远远高于舍外上风和下风向的金黄色葡萄球菌浓度（P〈0．05或P〈0．01）,但是舍外下风不同距离间的金黄色葡萄球菌浓度差异并不显著（P〉0．05）。REP-PCR结果表明,从鸡的粪便中分离的金黄色葡萄球菌与从舍内空气中分离的部分金黄色葡萄球菌（38．7％）相似性可达100％,从鸡场舍外下风方向分离到的多数金黄色葡萄球菌（55．9％）与舍内空气或粪便中分离的金黄色葡萄球菌相似性可达100％。可见,它们分别是由粪便中遗传基因完全相同的菌株繁殖而来。而从鸡舍上风分离到的金黄色葡萄球菌与舍内空气或粪便中分离的金黄色葡萄球菌相似性仅在60％～87％。结果显示,鸡粪便中的金黄色葡萄球菌能够形成气溶胶,进入气悬状态,不仅能在舍内传播,而且还能够借助舍内外气体交换,传播到舍外下风一定的距离。从而说明,来自动物体的金黄色葡萄球菌既能污染舍内空气,对本舍鸡群构成传染威胁,又能传播一定的距离,对周边社区环境空气造成生物污染。     

山羊金黄色葡萄球菌健康带菌情况的调查及耐药性分析

金黄色葡萄球菌是引起人和动物感染及食物中毒的重要病原体之一。为了解四川省山羊金黄色葡萄球菌的健康带菌情况及其耐药性,采集了省内4个养殖场共32只山羊的鼻腔棉拭子样本,进行金黄色葡萄球菌的分离、鉴定及药敏试验。共从11只羊的鼻腔棉拭子样本中分离出金黄色葡萄球菌,检出率为34.4％。对临床分离株进行了苯唑西林、头孢西丁、万古霉素等11种抗菌药物的药敏试验,结果表明,分离株对氨苄西林的耐药率为72.7％,对其它抗菌药物没有耐药性,未发现耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）。本研究结果表明,四川地区山羊的金黄色葡萄球菌的带菌情况较普遍,因此,应该规范屠宰过程的卫生操作,并进行严格监控,减少金黄色葡萄球菌的污染。     

内蒙古地区乳源金黄色葡萄球菌肠毒素基因的分布

为了了解内蒙古地区金黄色葡萄球菌肠毒素基因的分布状况,并为评估金黄色葡萄球菌肠毒素的污染风险和研制金黄色葡萄球菌疫苗提供基础资料,试验采用PCR方法,对2015年从内蒙古地区临床型奶牛乳房炎乳样中分离的121株金黄色葡萄球菌进行16种肠毒素基因的检测。结果表明:121株金黄色葡萄球菌全部携带肠毒素基因,其中携带比例较高的是sei、selm和selj基因,分别为121株(100%)、81株(66.94%)和64株(52.89%),未检测到see、selo和selp基因。携带传统肠毒素基因(sea-see)的有59株(48.76%),携带新型肠毒素基因(seg-selq)的有121株(100%)。同时携带2种及2种以上肠毒素毒基因的有118株(97.52%),组合也很复杂。说明内蒙古地区的奶牛场存在着很大的金黄色葡萄球菌安全隐患,防治较为困难。     

乌鲁木齐生牛乳中金黄色葡萄球菌的肠毒素检测及分离株同源性分析

探究乌鲁木齐生牛乳中金黄色葡萄球菌经典肠毒素携带情况及分离株同源性差异，为金黄色葡萄球菌的防控提供参考。对乌鲁木齐地区采集的131份生牛乳样品采用特异性选择培养基结合PCR方法分离鉴定金黄色葡萄球菌，并通过PCR方法检测金黄色葡萄球菌5种经典肠毒素(sea、seb、sec、sed、see)携带情况和根据测序结果对分离株进行同源性分析。结果显示，共分离鉴定到金黄色葡萄球菌13株，总分离率为9.92%(13/131);13株金黄色葡萄球菌经典肠毒素阳性菌株5株，阳性率为38.46%;13株金黄色葡萄球菌的同源性在93.7%～99.7%之间，遗传差异在0.3～6.6之间。研究表明，该地区生牛乳中存在一定金黄色葡萄球菌的污染，经典肠毒素阳性率较高，不同来源的分离株同源性高、差异性小。     

奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌超抗原的检测

用PCR方法对分离到的临床型乳腺炎金黄色葡萄球菌124株.隐性乳腺炎金黄色葡萄球菌213株,进行超抗原毒素sea,seb,sec,sed,see和tst基因的榆测.结果表明:奶牛临床型乳腺炎金黄色葡萄球菌肠毒素基因和tst基因的阳性率为27.42%,隐性乳腺炎金黄色匍萄球菌肠毒素基因的阳性率为1.41%,奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌产生毒素的类型以SEA,TSST-1和SEC为主,对于肠毒素基因和tst基因PCR阳件的金黄色葡萄球菌同时用ELISA和RPLA两种方法进行检测,3种检测方法结果基本一致.     

牛乳金黄色葡萄球菌分离株超抗原肠毒素基因分型研究

为研究牛乳金黄色葡萄球菌 SP-3分离株携带超抗原肠毒素的基因型，设计合成了金黄色葡萄球菌超抗原肠毒素基因 SEA-SEE 及 TSST-1特异性引物，并以其固有基因 femA 和 femB 为阳性对照，以分离菌株 DNA 为模板，经 PCR 扩增菌株携带的毒素基因。结果表明，SP-3分离株和阳性对照菌株均含有femA 和 femB 基因，且牛乳分离株携带 sea、sec、sed 和 tst-14种超抗原肠毒素基因，为开展动物源超抗原毒素基因系统分型及有效防控金黄色葡萄球菌奶牛乳腺炎奠定基础。     

云南省部分地区鸡蛋污染金黄色葡萄球菌的检测与耐药性分析

为研究云南省部分地区鸡蛋中金黄色葡萄球菌的污染情况及其分子分型、抗生素敏感性,从云南省鸡蛋主产区昆明市和曲靖市采集100份样品,参照《GB 478—2016食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》分离金黄色葡萄球菌,通过革兰氏染色镜检、血浆凝固酶试验和飞行时间质谱进行鉴定,对分离菌株采用微量肉汤稀释法分析抗生素敏感性。结果显示:100份鸡蛋样品中共分离6株金黄色葡萄球菌,分离率为6.00%,昆明市、曲靖市两个地区均分离出金黄色葡萄球菌;不同采样地点仅有农贸市场和鸡场样品分离出该菌,分离率分别为13.51%、2.94%;脉冲场凝胶电泳分子分型显示,6株金黄色葡萄球菌的相似系数在67.80%～94.40%之间,表明菌株间同源关系高、亲缘关系近;抗生素敏感性试验表明,6株金黄色葡萄球菌全部对四环素耐药,83.33%对红霉素、克林霉素、环丙沙星和庆大霉素耐药,66.67%对头孢西丁耐药,50.00%对苯唑西林、氯霉素和头孢他啶耐药;6株金黄色葡萄球菌对2种及以上的抗生素呈现出不同程度耐药,共有4个耐药谱。研究提示,云南省部分地区鸡蛋中存在一定程度的金黄色葡萄球菌污染,菌株间亲缘关系近、耐药情况严峻,建议加强防控以确保鸡蛋及相关食品的安全性。     

某蛋鸡场金黄色葡萄球菌和沙门菌的分离鉴定及药物敏感性分析

为了解某蛋鸡场金黄色葡萄球菌和沙门菌对抗菌药物的耐药情况,采集重庆市某蛋鸡场48份羽毛样品、123份肛拭子样品,将羽毛样品经MH高盐培养液增菌后划线接种于MH高盐平板,将肛拭子样品经沙门菌增菌液增菌后划线接种于S.S.平板。将疑似菌落接种LB液体培养基培养后提取基因组,PCR扩增金黄色葡萄球菌特异性nuc基因和沙门菌特异性invA基因片段。对分离鉴定的金黄色葡萄球菌和沙门菌进行药物敏感性试验。最终共分离鉴定出9株金黄色葡萄球菌、6株沙门菌。药敏试验结果表明,分离的金黄色葡萄球菌和沙门菌耐药严重,且存在多重耐药。本研究基本摸清了该蛋鸡场金黄色葡萄球菌和沙门菌对常见抗菌药物的敏感性,为该蛋鸡场的临床用药提供了参考。     

金黄色葡萄球菌现场快速检测方法的研究

为了适应基层检验检疫部门对金黄色葡萄球菌的现场快速筛查,降低金黄色葡萄球菌造成的食物中毒,保障食品安全,试验利用金黄色葡萄球菌nuc基因建立了可以快速检测食品中金黄色葡萄球菌污染的恒温环介导扩增(LAMP)方法,并通过添加钙黄绿素实现现场快速判定食品是否受金黄色葡萄球菌污染。结果表明:试验建立的方法具有良好的特异性和灵敏性,灵敏度可达7.26×10~(-3) ng/μL。说明建立的方法可用于金黄色葡萄球菌的现场检测。     

胸腺嘧啶依赖型金黄色葡萄球菌小菌落突变株的分离鉴定

本试验对由患慢性奶牛乳房炎奶样中分离出的1株疑似金黄色葡萄球菌小菌落突变株(SCVs)进行形态观察、金黄色葡萄球菌相关保守基因片段(nuc、nucA、16S rDNA) 多重PCR扩增鉴定、药敏试验、生理生化特性研究及补偿试验。结果显示分离出1株金黄色葡萄球菌SCVs,该菌含有金黄色葡萄球菌菌种特异性基因nuc和nucA;与金黄色葡萄球菌质控菌株ATCC 25923的抑菌圈大小明显不同;菌落形态主要表现为菌落细小、生长缓慢、溶血能力下降;凝固酶活性下降;耐盐能力降低;革兰氏染色为革兰氏阳性球菌,呈葡萄状排列;补偿试验鉴定该金黄色葡萄球菌SCVs为胸腺嘧啶依赖型。结果表明成功分离鉴定出1株胸腺嘧啶依赖型金黄色葡萄球菌SCVs,为由金黄色葡萄球菌SCVs引起的奶牛慢性乳房炎的预防和控制及其致病机制的研究奠定前期基础。     

生鲜牛奶中不同类型金黄色葡萄球菌污染差异性分析

[目的]了解我国部分地区生鲜牛奶中金黄色葡萄球菌肠毒素的污染状况,分析产不同类型肠毒素的金黄色葡萄球菌在不同地区的流行状况。[方法]采集三个省共6个奶牛场及挤奶站的新鲜牛奶进行金黄色葡萄球菌的分离鉴定,并对分离菌肠毒素分型。[结果]从360份生鲜牛奶中共分离到102株金黄色葡萄球菌,分离率为28.33%?;92.3%的菌株产SEA—SEJ;不同地区产各种类型肠毒素的菌株存在明显差异,湖南和内蒙分离到的产各型肠毒素菌株占比例较高。     

双重PCR检测奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌粘附素clfa A和Fnbp A基因

利用设计合成的特异性引物对金黄色葡萄球菌进行PCR扩增,将目的基因回收并连接到T载体,鉴定后进行测序验证,然后对本实验室所分离鉴定的临床分离株进行双重PCR检测。结果显示,PCR产物经过电泳成像显示,仅有金黄色葡萄球菌分别在293bp和642bp处出现特异性条带。通过对金黄色葡萄球菌临床分离株双重PCR检测发现,其中95%以上存在粘附素基因clfa A和Fnbp A。证明本试验建立的双重PCR检测金黄色葡萄球菌粘附素基因的方法具有良好的特异性和可靠性。