北京地区荷斯坦牛BLAD遗传缺陷基因的分子筛查

牛白细胞黏附缺陷症(BLAD)是由常染色体上CD18基因单碱基突变(A→G)引起的隐性遗传疾病,隐性基因纯合时导致白细胞表面的β2整合素表达明显减少或缺乏而引起临床发病,患病牛的主要特征是机体免疫力降低、易患病,从而影响生产性能的表现,可严重影响奶牛场的经济效益。本研究利用PCR-SSCP方法对北京地区246头公牛样本和409头母牛样本进行了检测分析,研究结果表明,在所检测的样本中,荷斯坦种公牛(含后备公牛)和母牛BLAD携带率分别为0.81%和3.91%,BLAD基因频率分别为0.21%和1.95%,并通过系谱追踪发现,BLAD遗传缺陷可追溯到美国一头非常优秀的公牛Osborndale Ivanhoe(USA.1189870,BL),其后代在我国有一定的影响。通过剔除BLAD携带者公牛可以有效控制该遗传缺陷的传播,但是,我国部分BLAD携带者公牛冻精依然在商业化使用,所以,有效监控BLAD携带者在奶牛群中的状况对BLAD剔除计划是有益的。     

中国荷斯坦牛HH4遗传缺陷单倍型分子筛查

HH4(Holstein Haplotype 4)是在荷斯坦牛群中发现的一种隐性遗传缺陷单倍型,由1号染色体上GART基因g.1277227AC单碱基错义突变引起,隐性基因纯合时引起胚胎早期流产,严重威胁着奶牛养殖者的经济效益。本研究利用飞行时间质谱技术对北京地区332头荷斯坦公牛样品和1 151头母牛样品进行了检测分析,结果表明,在所检测的荷斯坦牛群体中,未发现HH4携带者个体,即均为正常个体。提示HH4单倍型对我国荷斯坦牛群影响较小,在奶牛场的选种选配中可以不予考虑,但在遗传物质引进的时候应重点关注,避免引入有害基因。     

青海省荷斯坦牛胚胎移植

青海省民和县种畜场2001年引进了48头秦川牛,于2001年4月～2002年6月进行了荷斯坦奶牛胚胎移植,结果12头秦川牛移植成功,所产荷斯坦牛犊生长发育良好。1材料与方法1．1供体胚胎荷斯坦奶牛7日龄冷冻胚胎,由新疆生物科技研究所提供。     

中国荷斯坦牛CXCR1基因第二外显子新SNPs与乳腺炎的关联分析

通过研究中国荷斯坦牛趋化因子受体1(Chemokine(C-X-C motif)receptor1,CXCR1)基因多态性与乳腺炎间的相关性,找到对乳腺炎性状有显著影响的基因型和单倍型组合,为从遗传角度上解决奶牛乳腺炎问题提供参考。采用巢氏PCR、DNA测序和CRS-PCR-RFLP方法,对中国荷斯坦牛的CXCR1外显子2进行遗传多态性研究,分别利用SHEsis软件和PHASE软件进行配对连锁不平衡分析和单倍型分析。结果表明,找到了4个新SNPs,分别为291(C/T)、333(C/T)、337(A/G)和365(C/T)。各SNPs与中国荷斯坦牛体细胞评分(SCS)和产奶量的关联分析表明:337(A/G)和365(C/T)位点的等位基因G、C均为低SCS、高产奶量的优秀等位基因;另外,H3 H7(CCCTGGCC)单倍型杂合个体为低SCS、高产奶量的优秀单倍型组合。CXCR1基因的单倍型H3 H7(CCCTGGCC)在SCS和产奶量方面是优良的单倍型,可作为选择抗乳腺炎的分子标记。     

加拿大荷斯坦牛与中国荷斯坦牛生产性能对比

黑龙江省八五二农场１９９０年底从加拿大引进１１０头荷斯坦育成母牛,平均１２月龄,现已全部投产。为了解加拿大荷斯坦牛在中国北方地区的适应性及其生长发育情况和生产性能,与当地中国荷斯坦母牛进行了对比饲养试验。１材料和方法１．１供试牛选择：试验组为加拿大荷...     

荷斯坦牛抗热应激分子标记S463的检测

本试验以S463为奶牛假定抗热应激的RAPD分子标记,在核心母牛场湖南省奶牛原种场测定不同世代的种母牛213头,在核心公牛场湖南省种公牛站,以及北京、上海、南京、安徽等地测定种公牛46头,共检测出具有S463分子标记的母牛26头,检出率为12.2%(26/213),公牛10头,检出率为21.7%(10/46).在湖南省奶牛原种场,有、无抗热应激分子标记的母牛在热应激期间的产奶量分别为1 724.53kg和1 531.62kg,产奶量下降率分别为3.47%和23.18%,产奶量差异不显著(P>0.05),但产奶量下降率差异显著(P<0.05),基本肯定了抗热应激分子标记在不同耐热牛群中的特异性.     

日本荷斯坦牛登记制度

日本荷斯坦牛登记制度天津市奶牛改良育种中心（３００２２２）史夏彬中芬乳品培训研究中心魏洁我们知道，正确登记是奶牛改良育种的第一步，只有准确而详细的登记，才能为奶牛改良提供科学而可靠的依据。因此，世界各国奶牛育种工作都是从准确的登记记录开始的。日本的荷...     

胚胎移植在加拿大荷斯坦牛中的应用

序 言 胚胎移植(ET)作为繁育牛的较新方法已被公认和接受。ET是一项过程,通过它在相对短的时间里,从1头母牛能够获得更多的小牛。例如,仅在1年里从1头母牛获得的小牛可能比它整个一生自然生下的小牛还要多。因而,对1头遗传上优秀的母牛使用ET其优越性是十分明显的。 简单地说,这个过程涉及到用激素处理母牛(供体),以便使它在给定的发情周期排出多个卵来(超数排卵)。紧跟这种处理,用供体跟理想公牛配种;大约7天之后,通过一种叫做冲卵的过程从供     

广州地区娟姗公牛与荷斯坦公牛精液品质的比较研究

本试验选择亚热带气候条件下广州地区的娟姗公牛和荷斯坦公牛各5头,比较两个品种公牛的精液品质(采精量、原精密度、原精活力、细管精液产量、冻后活力、低渗膨胀率及穿透率)。研究表明,荷斯坦公牛每次采精的采精量(16.14±0.06 mL)和细管精液产量(189.17±3.11支)都极显著地高于娟姗公牛(4.74±0.05 mL,158.46±2.64支)(P<0.01);娟姗公牛的原精密度(8.95±0.08亿/mL)极显著地高于荷斯坦公牛(8.32±0.07亿/mL;P<0.01);娟姗公牛原精活力(0.731±0.004)高于荷斯坦公牛(0.729±0.003),但两者差异不显著(P<0.05);娟姗公牛精液的冻后活力(0.355±0.003)极显著高于荷斯坦公牛(0.339±0.003;P<0.01);娟姗公牛冷冻精液的低渗膨胀率(34.50%±0.49%)显著高于荷斯坦公牛(31.21%±0.59%;P<0.01);娟姗公牛冷冻精液对去透明带仓鼠卵的穿透率(84.51%±13.83%)显著高于荷斯坦公牛(81.52%±6.13%;P<0.05)。     

SNPs在荷斯坦青年公牛选育中的应用研究

本试验以25头荷斯坦青年种公牛为研究对象,以8头验证种公牛的各8头女儿共计64头中国荷斯坦牛为参照群体,利用DNA测序方法检测κ-CN基因、leptin基因、DGAT1基因、DGAT2基因的SNP位点,结果共发现7个SNP位点,并利用7个SNP的标记效应对25头青年荷斯坦种公牛生产性能进行了基因组育种值估测。结果发现s1、s2、s3、s4、s5、s6、s7、s10、s11、s13、s16、s18、s19、s20、s21、s22、s23和s24青年公牛生产性能高,s8、s9、s12、s14、s15、s17、s25公牛生产性能低。     

中国荷斯坦公牛CN和DUMPS遗传缺陷检测及系谱分析

旨在研究中国荷斯坦牛中瓜氨酸血症(Citrullinemia,CN)和尿苷酸核酶缺乏症(Deficiency of uridinemonophosphate synthase,DUMPS)2种遗传缺陷的携带者比率及系谱来源,并构建更简便的检测方法。本研究通过PCR-RFLP方法对参加我国联合青年公牛后裔测定和良种补贴项目的591头荷斯坦公牛进行了大规模CN和DUMPS的遗传缺陷检测,并构建了奶牛CN隐性有害基因的AS-PCR检测技术。结果,共发现2头CN和1头DUMPS隐性有害基因携带者公牛,携带者比例分别为0.34%和0.17%。经过系谱追溯,2头CN携带者公牛均为澳大利亚公牛Linmack Kriss King-CN后代,DUMPS携带者公牛为美国公牛Skokie sensation Ned后代。基于此,我国有必要尽快建立荷斯坦牛隐性遗传缺陷监控体系并进行系谱标注,通过青年公牛预选和选种选配,避免携带者公牛进入后裔测定和良种补贴项目,以逐步降低我国奶牛群体中隐性有害等位基因频率。     

我国荷斯坦青年公牛基因组选择效果分析

本研究基于我国荷斯坦奶牛基因组遗传评估和生产性能测定（DHI）结果,旨在分析我国荷斯坦公牛基因组选择的效果。选择1 686头既有基因组遗传评估成绩又有后裔测定成绩的荷斯坦公牛,利用2019年12月基因组遗传评估结果及其女儿的产奶和体型性状数据,通过R软件与Excel计算公牛基因组评估结果与公牛女儿表型数据间的相关性,对我国荷斯坦青年公牛基因组选择效果进行分析。相关性分析结果表明,荷斯坦公牛的基因组性能指数（GCPI）与后裔测定性能指数（CPI）呈正相关（r_s>0.3）,其中产奶量和体细胞评分的基因组育种值（GEBV）与估计育种值（EBV）呈较强的正相关（0.4 < r_s < 0.8）。对公牛女儿表型数据分析结果表明,女儿产奶量、乳蛋白率、乳脂率与肢蹄评分的表型值与公牛GEBV分组趋势一致,且公牛不同产奶性状GEBV组间的女儿性状表型值大部分达到极显著差异（P<0.01）;北京及上海地区公牛产奶性状、体细胞评分和肢蹄评分的GEBV分组与女儿表型值趋势较其他省市（地区）更一致,且GEBV高组与低组之间差值均高于其他省市（地区）。基于1 686头荷斯坦公牛基因组选择及其女儿表型数据的分析结果表明,我国荷斯坦公牛的基因组遗传评估准确性较好,其中产奶量、乳蛋白率、体细胞评分和肢蹄评分的表型数据更好地反映了基因组选择的效果;北京及上海地区较其他省市（地区）更能反映我国荷斯坦公牛基因组选择的效果。     

利用BLUP法估计荷斯坦种公牛的抗热应激育种值

以公牛女儿数大于10头为限制因子,建立线性模型Y=xb＋za＋e,对带有抗热应激$441标记的荷斯坦种公牛育种值进行了估计。结果表明：带有抗热应激S441标记的荷斯坦种公牛的平均育种值大于没有标记的群体均值。$441可以作为一种荷斯坦种公牛抗热应激分子标记应用于品种选育和生产中。应用CNDHI软件评估了2007～2011年公牛的最佳线性无偏差预测值,并依据年度均值作出遗传趋势,为选种和遗传评估提供依据。     

天津地区荷斯坦公牛CVM、DUMPS和CN遗传缺陷检测

本文旨在研究天津地区中国荷斯坦公牛脊椎畸形综合征（Complex vertebral malformation,CVM）、尿苷酸合酶缺乏症（Deftciencv of uridine monophospham synchase,DUMPS）和瓜氨酸血症（Citrullinemia,CN）3种遗传缺陷的携带者比率及系谱来源。通过PIRA—PCR和PCR—RFLP方法分别对天津奶牛发展中心参加全国青年公牛联合后裔测定和国家良种补贴项目的110头荷斯坦公牛进行了CVM、DUMPS和CN三种遗传缺陷检测。共发现6头CVM隐性有害基因携带公牛,携带者比例为5．45％,隐性有害等位基因频率为2．72％。经过系谱分析,其中4头CVM携带者均为美国公牛Carlin—MIvanhoeBell的后代,另外2头因系谱不完整而无法查询。未检测到DuMPs和CN隐性有害基因携带者。基于此,我国有必要尽快建立荷斯坦牛隐性遗传缺陷监控体系并进行系谱标注,避免携带公牛进入后裔测定和良种补贴项目,以逐步降低我国奶牛群体中遗传缺陷隐性等位基因频率。     

不同锌水平对荷斯坦种公牛血液理化指标的影响

本文旨在研究不同水平的锌对荷斯坦种公牛血液理化指标的影响。试验选取30头荷斯坦种公牛,随机分为5组,单因子饲养试验设计,分别饲喂不同锌水平的日粮,A为对照组,饲喂基础日粮,B、C、D、E组锌的添加水平分别为50、80、110和200 mg/kg(按日粮干物质计),试验期为8个月。结果表明:(1)不同锌水平对荷斯坦种公牛血清中谷草转氨酶(GOT)和谷丙转氨酶(GPT)酶活性影响极显著(P<0.01),对碱性磷酸酶(AKP)和乳酸脱氢酶(LDH)活性无显著影响(P>0.05);(2)不同锌水平对荷斯坦种公牛血清中睾酮含量影响极显著(P<0.01),对血清锌影响不显著(P>0.0 5)。综合分析不同锌水平试验牛生理生化指标的变化得出,锌的适宜添加量为1 1 0 mg/kg日粮干物质。     

北京地区中国荷斯坦牛性情遗传评估

旨在探究中国荷斯坦牛性情的影响因素,估计方差组分和遗传参数并揭示其遗传趋势。本试验收集北京地区2015-2017年13个奶牛场共9 016头健康泌乳牛的性情评分,采用logistic回归模型分析性情影响因素,利用DMU软件使用动物模型估计性情评分、直肠温度、日产奶量和繁殖性状(产犊到首次配种间隔、重复输精次数)的遗传力及其之间的遗传相关,并根据估计育种值分析其遗传趋势。结果显示,北京地区中国荷斯坦牛性情评分1分、 2分和3分比例分别为75.00%、19.25%和5.75%;胎次和场-评定人效应对性情评分有显著影响(P<0.05);性情评分估计遗传力为0.03,属于低遗传力性状,与重复输精次数为中度遗传相关(r=0.56),与产犊到首次配种间隔和直肠温度为中度负遗传相关(r=-0.30,r=-0.17),而与日产奶量为低度遗传相关(r=0.07);2001-2017年,北京地区中国荷斯坦牛性情遗传趋势总体上无明显变化。本研究是国内首次对奶牛性情进行遗传分析,为了解奶牛行为特征、实现平衡育种提供理论基础。     

日粮补锌对荷斯坦种公牛精液品质的影响

试验选用６头荷斯坦种公牛,研究了锌对性反射时间、精液品质、精清酶活性及血、精清锌与睾酮浓度的影响。结果表明：添加锌能显著提高精液的鲜精活力、精子密度、冻后精子活力和顶体完整率（Ｐ＜０．０５）;性反射时间明显减少（Ｐ＜０．０１）;鲜精精清中ＡＫＰ和ＧＯＴ活性组间差异不显著,但ＬＤＨ活性２组显著高于１组（Ｐ＜０．０５）;冻后精清ＡＫＰ、ＧＯＴ和ＬＤＨ活性组间差异不显著（Ｐ＞０．０５）。添加锌能显著提高血清锌浓度（Ｐ＜０．０１）,但对精清锌含量的影响不明显（Ｐ＞０．０５）。血清睾酮浓度１组显著高于２组（Ｐ＜０．０５）,而精清睾酮浓度组间差异不显著（Ｐ＞０．０５）。     

利用Tild-CRISPR/Cas9定点编辑荷斯坦种公牛的无角Pc位点

试验旨在利用Tild-CRISPR/Cas9系统介导的同源重组技术制备纯合无角种公牛细胞系。针对控制无角性状的Pc靶位点设计sgRNA,T7E1酶切和测序检测突变效率;以pUC57为骨架连接Pc片段及其两侧约800 bp的同源序列左臂（L）和右臂（R）,双酶切获得同源重组片段后与sgRNA共同转染至荷斯坦种公牛耳缘成纤维细胞中,筛选获得单细胞克隆并鉴定。结果显示,试验成功构建了6个sgRNA_（1-6）,并筛选获得了突变效率最高的sgRNA₁,其突变效率为32.6%;成功获得了长度为1 901 bp基因序列完全正确的同源重组片段;共获得147个单细胞克隆,其中8个单细胞克隆发生正确的单等位Pc位点插入,1个单细胞克隆发生正确的双等位Pc位点插入。外源基因残留检测结果显示,单细胞克隆没有Cas9基因残留,可作为后续克隆生产优秀无角纯合胚胎的核供体细胞。本研究成功利用Tild-CRISPR/Cas9定点编辑的方法获得了Pc位点纯合插入的无外源Cas9基因残留的无角牛耳缘成纤维细胞系,为将来优秀无角体细胞克隆种公牛的培育以及主要功能基因研究提供了良好的材料储备和技术平台。