甘蓝型油菜-萝卜C染色体附加系与普通白菜杂交F1的SSR标记鉴定

根据21个已知萝卜染色体组成的标准材料及其基因组中萝卜染色体的组成信息,利用SSR分子标记技术,确定了萝卜C染色体的特异SSR标记RsSA078-170和RH148-190,并应用这2个标记对甘蓝型油菜-萝卜C染色体附加系CC与普通白菜559杂交获得的F1进行外源萝卜C染色体鉴定,结果表明全部F1单株都扩增出了萝卜C染...     

白菜与甘蓝型油菜—萝卜F染色体附加系回交BC1中萝卜F染色体的精准鉴定

参考萝卜染色体定位序列标记连锁图谱中F染色体连锁群的SSR分子标记,利用21个已知萝卜染色体组成的甘蓝型油菜—萝卜附加系材料,确定了萝卜F染色体特异的2个SSR标记RM-59-293和Rs1SSR3694-220,应用两个标记对白菜'559'与甘蓝型油菜—萝卜F染色体附加系FF回交的BC1进行鉴定,筛选出10个含有萝卜...     

甘蓝型油菜-萝卜附加系中萝卜染色体的（dp）RAPD标记

在已掌握甘蓝型油菜-萝卜附加系染色体构成,并构建萝卜分子连锁图谱的基础上,以甘蓝型油菜?萝卜附加系为材料,利用(dp)RAPD分子标记技术,筛选附加系中外源萝卜9条染色体(A～I)的分子标记,为进一步研究萝卜染色体与连锁群对应关系奠定基础。试验筛选了576个随机引物(组合),有413个能从附加系中扩增出萝卜染色体的(dp)RAPD标记,平均有效引物(组合)占71·7%,其中RAPD反应有效引物率67·7%,dpRAPD反应有效引物率73·2%。试验共得到899个萝卜染色体(dp)RAPD标记,包括354个RAPD标记和545个dpRAPD标记,覆盖萝卜整个基因组的全部9条染色体,不同染色体的标记数目变化范围在41～160,其中最多的是染色体C,最少的是染色体I。     

甘蓝型油菜―萝卜附加系中萝卜染色体的(dp)RAPD标记

在已掌握甘蓝型油菜―萝卜附加系染色体构成,并构建萝卜分子连锁图谱的基础上,以甘蓝型油菜―萝卜附加系为材料,利用(dp)RAPD分子标记技术,筛选附加系中外源萝卜9条染色体(A～I)的分子标记,为进一步研究萝卜染色体与连锁群对应关系奠定基础.试验筛选了576个随机引物(组合),有413个能从附加系中扩增出萝卜染色体的(dp)RAPD标记,平均有效引物(组合)占71.7%,其中RAPD反应有效引物率67.7%,dpRAPD反应有效引物率73.2%.试验共得到899个萝卜染色体(dp)RAPD标记,包括354个RAPD标记和545个dpRAPD标记,覆盖萝卜整个基因组的全部9条染色体,不同染色体的标记数目变化范围在41～160,其中最多的是染色体C,最少的是染色体I.     

大白菜-甘蓝型油菜单体异附加系的获得与鉴定

以甘蓝型油菜作为母本,大白菜作为轮回父本,杂交获得BC1 和BC2 群体。通过染色体核型分析法从BC2 群体中筛选出大白菜-甘蓝型油菜C 基因组6 号单体异附加系,利用甘蓝型油菜C 连锁群特异SSR 标记鉴定,确定该单体异附加系中的外源染色体与甘蓝型油菜C6 连锁群相对应。     

栗杂交F_1代SSR标记遗传多样性分析

为深入了解栗属植物种内、种间杂交F_1代群体遗传多样性和变异规律,以及不同亲本遗传效应和配置方式对杂交F_1代的影响,以锥栗种内、锥栗和板栗种间9个杂交组合235份F_1代单株及其亲本为材料,利用32对高多态性栗属SSR标记对其基因组DNA进行PCR扩增和毛细管电泳,统计数据并进行遗传参数、分子方差、UPGMA聚类和PCA分析。结果表明:32对SSR引物在235个子代中共扩增出278个多态性位点,平均观测等位基因数8.69个,Shannon’s多样性指数(I)、基因遗传多样性(H_s)和基因流(N_m)平均值分别为1.3707、0.6574和1.5951,遗传分化系数(F_(st))显示杂交F_1代85.18%的变异存在于组合内;不同组合Shannon’s多样性指数范围为0.8816～1.1317,显示其子代均存在丰富的遗传多样性,且子代遗传多样性水平受不同父、母本遗传效应以及亲本配置影响;分子方差分析表明栗杂交F_1代群体遗传变异主要来源于组合内(78.06%),与遗传分化系数结果较为一致;不同杂交组合遗传距离和UPGMA聚类显示,具有相同亲本的正反交组合C3和C5遗传距离最近,最先聚到一起,其次是具有相同母本或相同父本的组合,分别聚到一起;杂交子代PCA散点图进一步验证了杂交组合聚类分析结果,同一组合内或遗传距离较近的组合多数子代能聚到一起,同时,不同组合子代又存在交叉重叠现象,说明存在较为广泛的基因交流,且子代分离现象明显。     

SSR标记辅助芥蓝×甘蓝型油菜种间杂交后代的遗传背景筛选

为筛选芥蓝×甘蓝型油菜种间杂交后代的遗传背景,加速回交转育进程,采用蕾期授粉结合胚挽救手段进行远缘杂交,获得芥蓝和甘蓝型油菜的种间杂种F1和BC1群体。利用已有的220对SSR引物对双亲进行多态性筛选,获得多态性引物51对。挑选均匀分布在甘蓝9条染色体上、扩增稳定、条带清晰的33对多态性SSR引物,对3株F1单株和35株BC1单株进行遗传背景筛选。NTSYSpc2.11a分析结果表明:F1植株的遗传背景与亲本甘蓝型油菜更为接近,遗传相似系数为0.74;而BC1植株的遗传背景差异较大,与亲本芥蓝的遗传相似系数在0.26~0.65之间。在35株BC1植株中,单株14Y1与芥蓝的遗传背景最为相近,形态观察结果进一步验证了该单株的遗传背景与回交亲本芥蓝更相似,可用于下一步回交转育。     

菜薹与萝卜附加系回交后代外源萝卜染色体的FISH 检测

采用荧光原位杂交技术（fluorescence in situ hybridization，FISH），以萝卜基因组特异序列pURsN 作探针，分别与19 份菜薹与萝卜附加系回交后代BC4A3d 进行杂交，检测回交后代中外源萝卜染色体的存在情况。结果显示：只有1 份材料BC4A3d-45 没有杂交信号，其他18 份材料均得到1 个杂交信号，表明除了BC4A3d-45 没有附加外源萝卜染色体之外，其余18 份材料均含有1 条外源萝卜染色体；该结果与分子标记鉴定结果一致。     

二倍体月季F_1群体的SSR鉴定与遗传分析

以中国古老月季品种‘月月粉’(Rosa chinensis‘Old Blush’,用OB表示)为母本,‘无刺光叶蔷薇’(Rosa wichuriana‘Basye’s Thornless’,用W表示)为父本,构建F_1代共296个单株。从146对SSR标记中筛选出亲本间多态性好且条带清晰的23对SSR标记,对随机选择的94株F_1进行杂种鉴定和遗传分析。结果表明:筛选到3个纯合显性标记分别为Fv512、Fv609和305,可单独一次性鉴定全部杂种真实性;随机筛选的94株子代均为真杂种;20个SSR标记用于基因型分析,有9个标记出现了偏分离,并在统计上达到显著或极显著水平,偏分离率45%,说明该F_1群体基于SSR位点的基因型偏分离率较高,在进行高密度遗传图谱构建时应重视偏分离标记对作图的影响;UPGMA聚类分析显示,94株F_1的遗传变异大,且遗传多样性丰富,可划分为2个大类7个亚类。     

大白菜—结球甘蓝1号染色体二体异附加系自交后代InDel标记分析和染色体数鉴定

在进行异附加系鉴定和相应连锁群In Del标记筛选的基础上,利用In Del标记和细胞学方法对大白菜—结球甘蓝1号染色体二体异附加系自交后代46个单株进行了鉴定分析。结果表明:结球甘蓝C03连锁群相对于大白菜特异的67个In Del标记,均至少在1份后代单株中扩增出了甘蓝的特异条带;在46个后代单株中,3个单株为染色体数22条的二体异附加系,6个单株为染色体数21条的单体异附加系,1个单株为染色体数20条的大白菜二体代换系,28个单株为染色体数20条的附加了结球甘蓝染色体片段的大白菜易位系,还有3个单株染色体数为22条,2个单株染色体数为21条,推断其分别为易位了结球甘蓝染色体片段的大白菜非整倍体易位系,还有3个单株没有检测到甘蓝特异条带。本研究结果为这些材料的进一步研究和应用奠定了基础。     

白菜、甘蓝和甘蓝型油菜PAP1/2同源基因的鉴定及分析

PAP1/2转录因子是参与形成MBW复合体从而调控花青素合成的主要MYB转录因子。以拟南芥PAP1/2转录因子核酸和蛋白序列比对及Pfam验证,研究白菜、甘蓝和甘蓝型油菜等芸薹属植物中PAP1/2转录因子调控花青素代谢的确切同源拷贝数、进化关系及表达情况：在白菜、甘蓝及甘蓝型油菜中鉴定到的PAP1/2转录因子同源拷贝数分别为3、4和9个;通过进化分析和PAP1/2转录因子同源拷贝所在区段微共线性分析进一步明确了其不同拷贝间的进化关系,厘清了A7和C6染色体上PAP1/2转录因子不同拷贝的相互关系;结合白菜、甘蓝和甘蓝型油菜不同组织转录组测序数据进行表达情况分析,阐明了PAP1/2转录因子同源拷贝在不同组织中的表达情况。     

大白菜—结球甘蓝1号染色体二体异附加系的获得与鉴定

 以大白菜附加结球甘蓝1号和6号染色体的双单体异附加系为材料,从其自交后代38个植株中筛选出3株2n = 22的植株。通过核型分析及SSR鉴定确定这3个植株为大白菜—结球甘蓝1号染色体二体异附加系,其外观性状在营养生长时期与二倍体大白菜没有明显的差异,在生殖生长期具有部分结球甘蓝的特征,其减数分裂终变期染色体联会时,11个二价体的比率达90.10%,后期Ⅱ以11-11-11-11分离的比例为83.50%,从而证明了具有很高的遗传稳定性。     

杧果炭疽病抗性杂交群体的构建及SSR分子标记鉴定

以对炭疽病高抗的金煌品种为母本,高感的爱文品种为父本构建杧果炭疽病抗性杂交群体,共获得杂交果实219个,培育杂交实生种苗184株。按花朵统计结实率为2.18%。通过对184株杂交种苗进行SSR分子标记鉴定,结果表明,16对引物中15对能够有效扩增产物;12对具有丰富的多态性;8对在父母本之间具有多态性,184株杂交种苗可以确认是真实杂种,应用SSR分子标记技术可以对杧果杂种的真实性进行快速验证。     

平邑甜茶与二倍体苹果杂交F_1染色体数目分离及有关性状分析

无融合生殖型平邑甜茶(M.hupehensis. 2n=51)与融合型冬红果(M.pumila. 2n=34)和M9(M.varparadise, 2n=34)的杂交后代,经田间形态观察与鉴别,在301个实生后代中,发现有268个母本遗传型(即由母本珠心细胞发育形成的无性个体)和33个有性杂种植株。经镜检后者体细胞染色体数,其中有25个四倍体植株、7个三倍体植株和1个非整倍体植株。这些杂种植株表现了不同程度的无融合生殖能力。     

大花紫薇与紫薇杂交F_1群体表型评价及分子标记连锁分析

以大花紫薇(Lagerstroemia speciosa)为母本,紫薇(L. indica)品种‘Sacramento’为父本杂交构建的F_1群体为材料,对株高、冠幅、叶长、叶宽、花径、瓣爪长、花序长、花序宽、主枝GSA、生长习性、花芽形状、花芽缝合线、单色花颜色和复色花主副色共14个主要观赏性状进行了统计和分析,评价了F_1群体的遗传多样性,对主要观赏性状与SSR标记进行了连锁分析。结果表明:(1)株高等9个主要观赏性状的变异系数范围为14.58%～48.33%;生长习性以半直立和开展居多;花芽、花色表型无明显分离;主要观赏性状彼此之间呈现一定的相关性。(2)SSR标记多态信息含量(PIC值)的范围为0.20～0.59,平均值为0.43;Shannon’s信息指数分布范围为0.38～1.13,平均值为0.82;平均期望杂合度和观察杂合度分别为0.52和0.53:说明F_1群体遗传多样性程度中等。(3)8个SSR标记与8个性状共22个组合显著相关,解释率范围为3.46%～16.02%。     

基于中国樱桃转录组的SSR分子标记开发与鉴定

对中国樱桃(Prunus pseudocerasus Lindl.)休眠芽转录组数据进行了SSR位点搜索和分析,发现了7 197个SSR位点,总的发生频率为15.62%。SSR重复类型以二核苷酸发生频率最高(58.65%),三核苷酸次之(34.72%)。利用8对多态性引物在24份樱桃种质中进行了引物有效性验证和遗传多样性分析,结果表明有效等位基因数最大值为2.92(Pp SSR2),最小值为1.09(Pp SSR8),平均值为1.73;香农多样性指数变化范围是0.202~1.290,平均值为0.755。观察杂合度和期望杂合度的变化范围分别是0.083~0.917和0.082~0.671;平均值分别为0.391和0.384。香农多样性指数、观察杂合度和期望杂合度3个多样性指数最大值均出现在位点Pp SSR2,最小值出现在位点Pp SSR8。基于SSR标记的24份樱桃种质的聚类结果与经典的形态学分类不完全一致,但聚类结果清晰地划分出5个不同组别,说明浙江省的中国樱桃种质资源遗传多样性丰富。两个龙泉地方品种与其他的浙江樱桃种质资源明显不同,它们与山樱和浙闽樱有着更紧密的遗传关系,该地方品种可以作为樱桃新品种选育的优良材料,有利于拓宽现有樱桃栽培品种的遗传背景。     

普通白菜(香青菜)黑杂-1号的选育

黑杂-1号普通白菜(香青菜)是利用不结球白菜Ogura雄性不育源黑不育1和自交系太黑香青菜配制而成的一代杂种。黑不育1的不育率、不育度均为100%,苗期和低温条件下不黄化,蜜腺发育正常,自然状态下能正常结实。黑杂-1号植株半直立,株型松散,株高30~35 cm,开展度50 cm,叶片椭圆形、深绿色、有光泽、全缘,叶面起皱不平,叶脉明显,叶柄绿白色、扁平,单株质量500 g左右,炒食香味浓郁;对病毒病、霜霉病和菌核病的抗性强于黑叶香青菜;每667 m2成株产量2 000 kg左右,小菜产量1 000 kg左右,适合江苏、上海、浙江、河北、安徽、山东、辽宁、四川等地推广种植。     

无融合生殖苹果砧木F_1代实生苗的流式细胞术倍性分析及SSR鉴定

早期快速、准确地鉴定出无融合生殖苹果砧木F1代实生苗的有性杂种,可以减少土地使用面积,提高育种效率。SSR是鉴定果树杂种实生苗快速有效的分子标记技术之一。研究对青砧二号(A1)和宁8(N8)组合F1代杂种实生苗的22个单株进行了倍性分析及SSR鉴定,并对亲本和F1各单株的植物学特征进行了调查,倍性分析表明,有3株表现为四倍体;SSR分析表明,13株表现为母本带型,为母本的无融合生殖后代;9株表现为杂合带型或父本带型,为母本与父本的有性杂种。SSR鉴定结果和杂交实生苗的田间表现高度吻合。SSR标记技术可以准确地对无融合生殖亲本的有性杂种后代进行早期鉴别。     

甘蓝型油菜与白菜薹种间杂交制种的播期和行比

十字花科种间杂交一代具有极强的营养体生长优势 ,但因十字花科种间杂交的亲和性较差 ,所以无法进行大面积制种应用于生产。通过近几年的研究 ,已找到一种提高十字花科种间杂交亲和性的办法〔1〕,如利用油菜雄性不育系与其它十字花科蔬菜品种杂交 ,可大大提高种间杂交的亲和性 ;利用甘蓝型油菜雄性不育系与红菜薹、白菜薹、白菜型油菜进行种间杂交 ,一般结实率可达到 70 %～ 80 %,亲和指数可达 10以上。这样就可以通过杂交制种获得种间杂种F1种子 ,通过种植F1来利用杂种F1的营养体优势生产菜薹 ,且菜薹的主要营养成分与红菜薹和白菜相近。…     

白菜黑斑病菌拮抗细菌LBC-1菌株的分离与鉴定

从湖南、湖北、河北等地区菜地采集土样,采用抑菌圈法筛选对白菜黑斑病病原菌芸薹链格孢菌（Alternaria brassicae）具有拮抗作用的芽孢杆菌菌株。通过初筛得到具有拮抗作用的菌株20株,复筛出1株拮抗活性较高的菌株LBC-1。通过生理生化试验、形态特征观察及16S rDNA序列分析对其进行了种属鉴定。鉴定结果为菌株LBC-1属于解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）,是1株广谱拮抗芽孢细菌菌株。