刺五加多糖对雏鸡脾脏中CD4+ 和CD8+T淋巴细胞定位分布的影响

为了研究刺五加多糖（ASPS）对雏鸡脾脏中CD4+和CD8+ T淋巴细胞定位分布的影响,从组织学角度评价ASPS对脾脏的免疫调节作用,试验将1日龄海兰褐公雏饲养至7日龄时选取150只,随机分为3组：空白对照组、ASPS低剂量组（ASPSL）和高剂量组（ASPSH）,每组50只,所有组每天注射1次,连续注射3天。免疫后的第7、14、21和28天分别取其脾脏制作冰冻切片,采用免疫组织化学方法检测CD4+和CD8+ T淋巴细胞的定位分布。结果显示,与空白对照组比较,免疫注射后21天和28天时ASPSL组和ASPSH组CD4+ T淋巴细胞的数量均显著增加（P<0.05）,而且ASPS能够促进红髓中CD4+ T淋巴细胞向动脉周围淋巴鞘迁移,从而使单个动脉周围淋巴鞘面积较对照组明显增加,而ASPS对脾脏中CD8+ T淋巴细胞的数量和分布无明显影响。由此可知,ASPS能够通过影响脾脏中CD4+ T淋巴细胞的定位分布发挥免疫调节作用,这对于进一步揭示ASPS的免疫调节机制具有重要意义。     

AA肉鸡血液CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞的变化规律

采用流式细胞仪检测1、3、5、7、14、21、28、35、42、49日龄AA肉鸡血液中的CD3、CD4、CD8阳性T细胞比例。研究结果表明:1～5日龄T细胞逐渐进入血液参与细胞免疫,7、21日龄注射疫苗起免疫应答作用,28日龄后基本形成稳固的细胞免疫水平。     

营养限制及补偿对羔羊体重及外周血液CD4+和CD8+T淋巴细胞的影响

本试验旨在研究羔羊营养限制期(第1～60天)和营养补偿期(第61～150天)体重和外周血液中CD4+和CD8+T淋巴细胞的变化规律.选用80只体况中等、平均体重为(14.72±1.10)kg的3月龄乌珠穆沁羔羊,随机分为对照组(CG)、限制组Ⅰ(RG Ⅰ)、限制组Ⅱ(RGⅡ)和限制组Ⅲ(RG Ⅲ)4个组.营养限制期4组饲粮能氮水平分别为代谢能(ME):10.88、10.88、9.41和8.62 MJ/kg;粗蛋白质(CP):15%、10%、10%和5.7%.营养补偿期各组饲喂同一能氮水平饲粮(ME:9.75 MJ/kg;CP:12%).在试验期每周称重并在第1天、第30天、第60天、第90天和第150天饲喂前从各组羊颈静脉采血,采用流式细胞仪检测羔羊血液中的CD4+和CD8+T淋巴细胞比例.结果表明:1)营养限制结束,RG Ⅰ组、RG Ⅱ组和RG Ⅲ组平均体重均显著低于CG组(P＜0.05).补偿期RGⅢ组平均日增重显著高于CG组(P＜0.05).2)营养限制前期(第1～30天)各组CD4+和CD8+T淋巴细胞浓度均呈上升趋势.补偿期结束时CD4+T淋巴细胞浓度RG Ⅰ组最低RGⅡ组最高,CD8+T淋巴浓度RGⅡ组最低RG Ⅰ组最高,差异均不显著(P＞0.05).结果提示,乌珠穆沁羔羊受不同能氮营养水平限制后体重和免疫机能有补偿效应,而且低能高氮比高能低氮限饲后得到的补偿效果较好,表明限饲蛋白质比限饲能量对补偿生长的负影响更大.蛋白质和能量同时限饲补偿生长最差.     

米糠多糖对免疫抑制鸡脾脏和法氏囊细胞周期和抗细胞凋亡作用

为探讨米糠多糖(RBS)对免疫抑制鸡免疫调节作用的机理,作者采用流式细胞术检测了健康雏鸡、环磷酰胺(CTX)和传染性法氏囊病毒(IBDV)诱导的免疫抑制雏鸡在给予RBS[剂量150 mg/(kg·d)]和不给予RBS情况下脾脏和法氏囊细胞的DNA含量、细胞周期及细胞凋亡率.结果显示:(1)CTX+RBS组雏鸡脾脏S期细胞比例和PI值显著高于CTX组(P<0.05),该2组鸡的法氏囊细胞周期没有显著差异(P>0.05).(2)IBDV+RBS组雏鸡脾脏S期、G2期细胞比例和PI值、法氏囊的S期细胞和PI值均高于IBDV组(P<0.05);(3)CTX+RBS组和IBDV+RBS组雏鸡脾脏和法氏囊细胞的凋亡率分别低于CTX组和IBDV组(P<0.05).结果表明:RBS能够促进CTX处理鸡脾脏细胞和IBDV感染鸡脾脏和法氏囊细胞DNA复制,对CTX和IBDV诱导鸡的脾脏和法氏囊细胞凋亡过程均有一定的拮抗作用.     

川楝素对妊娠小鼠子宫组织中CD4+/CD8+T细胞和F4/80+巨噬细胞的影响

为探讨CD4+、CD8+ T淋巴细胞和F4/80+巨噬细胞在流产发生机制中的意义,研究中药单体成分川楝素诱导小鼠流产的作用及机理,本试验给妊娠5 d小鼠连续3 d腹腔注射不同剂量的川楝素溶液,对照组以等量的蒸馏水代替,于妊娠9 d处死.在给药后发现随着注射川楝素剂量的增加,小鼠的流产率逐渐上升,CD4+、CD8+ T淋...     

米糠多糖对环磷酰胺诱导免疫抑制鸡外周血T淋巴细胞增殖活性及疫苗免疫效果的影响

为探讨米糠多糖（RBS）对鸡免疫抑制状态的调节作用,将100只7日龄健康蛋用公雏鸡随机分为对照组、环磷酰胺（CTX）组和CTX＋RBS低、中、高3个剂量组.从7日龄起,肌肉注射CTX,1日1次,连注3 d,从10日龄起,CTX＋RBS组灌服RBS,1日1次,连续5 d.14日龄时各组鸡进行新城疫疫苗免疫.在10,21,28,35日龄,测定外周血T淋巴细胞增殖反应活性和ND HI抗体效价.结果显示,CTX组鸡的外周血T淋巴细胞增殖活性和ND HI抗体效价均显著低于对照组（P＜0.01）;CTX＋RBS中、高剂量组鸡外周血T淋巴细胞的增殖活性均显著高于CTX组（P＜0.05或P＜0.01）,但低于对照组（P＜0.05或P＜0.01）;CTX＋RBS中、高剂量组鸡的血清ND抗体效价均显著高于CTX组（P＜0.05或P＜0.01）,且与对照组差异不显著（P＞0.05）.证实,肌肉注射CTX可使健康雏鸡外周血T淋巴细胞的增殖反应活性和NDHI抗体效价显著降低,导致受试鸡免疫抑制;雏鸡口服一定剂量的RBS对CTX引起的细胞免疫和体液免疫抑制具有一定的拮抗作用.     

增免散对鸡脾T淋巴细胞CD4^＋和CD8^＋亚群的影响

将300只1日龄雏鸡随机分为中药增免散组、环磷酰胺组、环磷酰胺＋左旋咪唑组、环磷酰胺＋增免散组和正常对照组，6日龄时用鸡新城疫LaSota疫苗点眼滴鼻免疫，14、21、28、35日龄时测定鸡血液NDV抗体效价，脾器官指数，脾组织中CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞浓度和脾细胞凋亡率，观察脾的组织结构变化。结果显示，14、21日龄增免散组抗体水平高于其他各组（P〈0．01）；14、21、28日龄增免散组脾指数高于其他各组，增免散组脾CD4^＋细胞浓度、CD4^＋／CD8^＋比例高于其他各组，差异极显著（P〈0．01）；14、21、28日龄增免散组脾细胞凋亡率低于其他各组，差异极显著（P〈0．01）；14、21日龄时，增免散组脾白髓和红髓内网状细胞和中淋巴细胞较多，脾小体比对照组略有增加。表明，中药增免散不仅能促进鸡脾的发育，增高脾组织中CD4^＋／CD8^＋比例，而且对环磷酰胺的免疫抑制有一定拮抗作用。     

传染性法氏囊病病毒超强毒感染SPF鸡免疫器官中CD4+和CD8+T淋巴细胞动态分布

利用免疫组织化学染色对传染性法氏囊病病毒（IBDV）超强毒LX株感染SPF鸡免疫器官中CD4^ 和CD8^ T淋巴细胞的动态分布进行了研究。超强毒LX株接种2周龄SPF雏鸡，在其法氏囊、脾脏、胸腺、盲肠扁桃体、骨髓和哈氏腺中均可检出IBDV抗原的存在和CD4^ 与CD8^ T淋巴细胞的数量改变。在法氏囊中，CD4^ 淋巴细胞主要存在于淋巴滤泡间隙和滤泡皮质，而CD8^ T淋巴细胞则丰在于整个淋巴滤泡和滤泡间隙，并且CD8^ T淋巴细胞数量明显多于CD4^ T淋巴细胞，在接种后14d仍未见CD4^ 和CD8^ T淋巴细胞数量减少。脾脏中CD4^ T淋巴细胞主要存在于外周小动脉淋巴鞘或散在，而CD8^ T淋巴细胞则多存在于外周小动脉淋巴鞘和红髓。接种后胸腺中CD4^ 和CD8^ T淋巴细胞在皮质中减少，但在髓质增多，尤其是CD8^ T淋巴细胞数明显多于CD4^＋T淋巴细胞。盲肠扁桃体中CD4^ 和CD8^ T淋巴细胞主要存在于发生中心，尤其是CD8^ T淋巴细胞数比CD4^ T淋巴细胞明显多。骨髓和哈氏腺中也可见CD4^ 和CD8^ T淋巴细胞，而且CD8^ T淋巴细胞更多。在这些淋巴器官中，病毒损伤部位出现CD4^ 和CD8^ T淋巴细胞的迁入聚集，表明T淋巴细胞可能参与IBDV超强毒的免疫致病过程。     

鸡外周血T淋巴细胞分群及免疫相关基因表达分析

为探索鸡抗病育种中简便实用的免疫功能测定指标,试验采用成像流式细胞术对四川山地乌骨鸡和大恒699肉鸡配套系的4周龄和10周龄外周血进行T淋巴细胞亚群分型,并检测外周血中白介素6(IL-6)、Toll样受体3(TLR3)和干扰素(IFN-γ)基因的表达水平。结果显示：10周龄时,CD₄⁺T淋巴细胞亚群在两鸡种间差异显著(P<0.05),4周龄和10周龄的两鸡种CD₈⁺T淋巴细胞亚群均有极显著差异(P<0.01);CD₄⁺/CD₈⁺比值在0.7～1.6之间呈正态分布,且随周龄增加而降低;大恒699肉鸡配套系的CD₄⁺/CD₈⁺比值比四川山地乌骨鸡高;IL-6和IFN-γ表达量随周龄增加而增加,但TLR3相反。细胞因子的增多和CD₄⁺/CD₈^+<...     

青蒿组方对球虫感染雏鸡血液中CD4^+和CD8^+T淋巴细胞的影响试验

为研究青蒿组方中药对鸡免疫力的影响,试验选取14日龄三黄鸡120只,平均分为4组:感染给药组(1组),感染不给药组(2组),不感染给药组(3组),不感染不给药组(4组).感染组人工接种柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊.接种后第4、7、10 d运用流式细胞仪测定各组鸡血液中CD4^+、CD8^+T淋巴细胞值及二者的比值.结果:1组CD4^+、CD8^+T淋巴细胞值及其比例在接种后第4、7、10 d均高于2组,差异显著(P<0.05);2组CD4^+、CD8^+T淋巴细胞平均比值低于其他3个组.结论:青蒿组方中药可促进鸡血液中CD4^+、CD8^+T淋巴细胞生成,进而增强机体的免疫功能.     

米糠多糖对雏鸡T细胞免疫功能的影响

为探讨米糠多糖（RBS）对不同免疫状态雏鸡免疫功能的影响,本试验采用流式细胞技术检测了健康雏鸡、环磷酰胺（CTX）处理雏鸡和人工感染IBDV雏鸡等三种免疫状态雏鸡在服用米糠多糖（剂量150mg／kg·d））和不服用米糠多糖情况下,外周血CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞亚群数量的动态变化。结果显示,口服米糠多糖能够提高健康雏鸡外周血中CD4^＋T淋巴细胞比率,对CD81淋巴细胞作用不明显;米糠多糖对CTX和IBDV引起试验雏鸡外周血中CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞亚群减少具有一定的抑制作用。     

流式分析外周血CD4和CD8淋巴细胞样本制备及其分离培养方法

CD是英文cluster of differentiation的缩写,中文意思是分化抗原,是表达在细胞表面的分子.这些分子将免疫细胞分成不同的细胞群.细胞表面的标记抗体(例如CD4,CD8)可以用来识别和定量不同细胞群,在免疫毒理研究中,利用流式细胞技术对动物脾脏或外周血中T细胞亚群CD4+T(辅助性T细胞)和CD...     

外周血中CD4+、CD8+T、CD4+CD25+Treg在绵羊接种布鲁氏菌M5-90弱毒疫苗后的动态变化

为研究绵羊接种布鲁氏菌弱毒M5-90株后外周血中CD4+、CD8+T、CD4+CD25+Treg细胞的动态变化规律,本研究选择11只健康绵羊,每10 d免疫一次,共免疫3次,分别在免疫前、免疫后10d、20 d、30 d利用流式细胞术检测外周血中CD4+、CD8+T、CD4+CD25+Treg淋巴细胞亚群.在免疫后的第20 d,CD4+T、CD8+T细胞百分含量达到最高水平(P＜0.05)后均缓慢下降;在第10d,CD4+CD25+Treg细胞缓慢升高,至20 d、30 d均显著升高(p＜0.05);在布鲁氏菌M5-90疫苗免疫应答过程中CD4+CD25+Treg细胞参与了机体的免疫反应调控,对CD4+T、CD8+T淋巴细胞的比例进行调节,并且维持CD4+/CD8+比值稳定,起到平衡Th1/Th2细胞间反应的作用.     

固始鸡免疫器官内T淋巴细胞亚群动态变化

应用流式细胞仪结合免疫荧光抗体技术对固始鸡和固始鸡胚胎免疫器官内T淋巴细胞亚群的动态变化和发育分化规律进行了研究.结果发现,(1)胚胎时期,胸腺内T淋巴细胞发育分化低,表现为成熟的T淋巴细胞(CD3~+)和不成熟的胸腺细胞均较少;出壳后,固始鸡胸腺内成熟T淋巴细胞增多,占胸腺细胞的30%左右,但大部分仍是未成熟的胸腺细胞.(2)脾脏内T淋巴细胞为成熟的T淋巴细胞(CD3~+),占淋巴细胞的60%左右.胚胎时期脾脏内CD3~+水平低,出壳后2周已达脾脏内正常水平(60%左右).(3)法氏囊内有少量的成熟T淋巴细胞(10%左右).结果表明,T淋巴细胞在固始鸡胸腺内增殖分化和成熟,脾脏和法氏囊内的成熟T淋巴细胞均来源于胸腺.     

增免散对鸡CD4+T淋巴细胞CD8+T淋巴细胞亚群浓度的影响

T-淋巴细胞来源于骨髓的多能干细胞,多能干细胞中的部分淋巴细胞进入胸腺后,在胸腺素的诱导下,经过10～30 d的分化、增殖,成为成熟的T-淋巴细胞.成熟的T-淋巴细胞经血流分布至外周免疫器官,并反复经血液-组织-淋巴-血液,再循环周游全身,以发挥淋巴细胞的免疫功能和免疫调节作用[1].一般认为,T-淋巴细胞的功能主要有以下几方面:产生细胞免疫作用或迟发型变态反应;使宿主对移植物或肿瘤产生排斥作用;溶解细胞和毒细胞的作用;增强或扩大免疫反应;帮助B-淋巴细胞产生抗体;抑制由于免疫作用增强而对机体产生的损伤等.因此,T-淋巴细胞数量的多少反映了机体免疫力的高低.     

鸡CD4和CD8分子研究进展

鸡CD4和CD8分子是T细胞表面重要的表面标志,绝大部分胸腺细胞表面都表达CD4和CD8分子,但大多数脾脏和外周血的T细胞表面只表达CD4或CD8分子,或两者都不表达。少数脾脏和外周血中存在的CD4 CD8 T 细胞具有重要的生物学功能。不同品种鸡的CD4 基因具有高度的保守性,而CD8αcDNA 在胞外区表现为多型性。鸡的CD4和CD8分子在组织分布、结构和功能等方面有着很大的相似性。针对鸡CD4 和CD8分子的单克隆抗体为研究这些免疫细胞的生理功能及细胞表面标志的生物学作用等创造了有利条件。     

中药"球康"对E.tenella感染鸡肠道CD4+和CD8+T细胞的影响

本试验采用免疫组化方法检测球虫感染鸡肠道组织中CD4^＋、CD8^＋T细胞数量,探讨中药“球康”抗球虫的作用机理。试验共设不感染不给药组、不感染给“球康”组（2％拌料）、感染给“球康”组和感染不给药组共4组。感染球虫后第2、4、5、7和9天,每组随机捕杀4只鸡,采取盲肠中段进行检测。结果,雏鸡感染球虫后,盲肠组织中CD4^＋、CD8^＋T细胞数量显著高于不感染组,感染给中药“球康”组鸡CD4＋T细胞数量在第2,4,5和9天均高于感染不给药组,在第4天和第5天差异显著（P＜0．05）;CD8＋T细胞数量在第2,5,7和9天高于感染不给药组,第5天差异显著（P＜0．05）,第7天达到最高峰。说明中药“球康”通过增加球虫感染鸡肠道黏膜CD4^＋、CD8^＋T细胞数量,提高细胞免疫水平,以增强机体对球虫的抑杀作用。     

CD8~+T细胞表位鉴定技术研究进展

CD8~+T细胞表位通过MHCⅠ分子呈递到细胞表面,激活CTL细胞从而介导并调节机体抗内源性抗原的免疫应答。MHC-peptide稳定性试验通过TAP缺陷的RMAS细胞转染克隆在细胞水平鉴定CD8~+T细胞表位与MHCⅠ分子的亲和力;酶联免疫斑点技术(ELISPOT)通过检测IFN-γ的分泌水平评估抗原免疫后机体的细胞免疫应答能力,具有较高的敏感性和高效性。四聚体技术通过流式细胞仪分析抗原特异性CD8~+T细胞的表型和功能特征。论文介绍了CD8~+T细胞表位的特征和上述3种表位鉴定方法的基本原理和研究进展,为CD8~+T细胞表位的鉴定和表位疫苗的研制提供参考。     

米糠多糖对健康雏鸡外周血T淋巴细胞转化和体液免疫的影响

为探讨米糠多糖对鸡免疫功能的影响,选用100只10日龄京白939蛋雏鸡,随机平均分为4组。Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组从10日龄起分别灌服低、中、高3个剂量米糠多糖(50、100和200mg/(kg.d)),每天一次性灌服规定剂量,连续5d;Ⅰ组同时灌服生理盐水作为对照,1mL/只。在灌服米糠多糖前1d和灌服后7、14和21d,分别测定雏鸡外周血T淋巴细胞转化能力和血清IgG、IgA和IgM含量。在雏鸡14日龄时,对照组和米糠多糖处理组均实施新城疫(ND)疫苗免疫,间隔1周后进行禽流感(AI)疫苗免疫。分别在ND疫苗和AI疫苗免疫前1d和免疫后7、14和21d测定ND抗体和AI抗体效价。结果显示:(1)雏鸡灌服3个不同剂量米糠多糖后的7、14和21d,外周血T淋巴细胞转化能力均显著高于对照组(P<0.05或P<0.01),且以100mg/(kg.d)剂量组效果最好。(2)雏鸡服用3个剂量组米糠多糖后7、14和21d,血清IgG含量均高于对照组(P<0.05或P<0.01);血清中IgA含量,在14d时,低剂量组与对照组无显著差异,中、高剂量组显著高于对照组(P<0.05或P<0.01);IgM含量在灌服米糠多糖后7d时,Ⅳ组高与对照组无差异(P>0.05);14d时,Ⅲ组与对照组无差异(P>0.05);米糠多糖其他剂量组在7和14d,血清IgM含量均高于对照组(P<0.05或P<0.01);21d时,米糠多糖处理组与对照组比较无显著差异。(3)雏鸡服用米糠多糖可以提高ND疫苗和AI疫苗免疫后的特异性抗体效价,且免疫效果与米糠多糖剂量呈正相关。试验结果表明,米糠多糖能够从促进蛋雏鸡外周血T淋巴细胞转化功能、提高血清免疫球蛋白含量以及提高疫苗免疫特异性抗体效价等方面调节健康雏鸡的免疫功能。     

猪圆环病毒2型感染小鼠脾脏内CD4~+CD25~+调节性T细胞的动态变化

为分析猪圆环病毒2型(PCV2)感染小鼠后脾细胞中CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)占CD4+T细胞比例的动态变化,探讨Tregs与PCV2感染的关系,本研究选择清洁级昆明小鼠60只,随机分成实验组和对照组,实验组腹腔接种PCV2,分别在接种后第0 d、5 d、10 d、20 d、30 d和60 d取脾脏制备单细胞悬液,用FITC-CD4和PE-CD25单克隆抗体标记Tregs,采用流式细胞仪检测Tregs占总CD4+T细胞百分比的动态变化。结果表明感染组小鼠脾细胞中Tregs百分比从第5 d开始逐步上升,第20 d达峰值后逐渐下降,感染组Tregs百分比第10 d、20 d、30 d时显著高于对照组(p0.05),但第60 d两组间差异不显著(p0.05)。试验结果证明PCV2感染昆明小鼠后,可在小鼠脾脏内诱导明显的Tregs增殖,这些增殖的细胞可能在PCV2感染中发挥免疫抑制作用。