柑橘溃疡病检疫与防治

细菌性溃疡病是严重危害世界柑橘产业的重大检疫性病害之一,柑橘溃疡病引起落叶、枯枝和落果,溃疡病斑导致果品质量降低,影响外贸出口。世界各国长期以来对病害采取严格苗木检疫、疫区病树铲除、零星病害药剂防控的综合治理措施;新近美国农业部推出"柑橘健康种植行动计划";2007年7月中国农业部正式启动"柑橘非疫区建设和维护"项目,总体目标在于防控柑橘溃疡病的发生和传播,确保柑橘产业的安全。     

危害美国小麦的3种检疫性病原真菌

本文介绍了我国进境检疫性有害生物名录中新增加的危害美国小麦的3种病原真菌(麦类条斑病菌、小麦基腐病菌、麦类壳多胞斑点病菌)的分类地位、分布、寄主、为害情况、生物学特性和防治措施,以供口岸人员检疫参考.     

柑橘溃疡病菌的普通LAMP及快速LAMP检测方法的建立

建立柑橘溃疡病菌的普通LAMP和快速LAMP检测方法,使其能应用于基层检验检疫部门对病害的快速检测.利用柑橘溃疡病菌基因组特有的保守区域设计LAMP引物,通过优化反应条件,建立柑橘溃疡病菌的普通LAMP检测体系;在普通LAMP引物的基础上设计一对环引物,建立柑橘溃疡病菌的快速LAMP检测体系,并以多种参比菌DNA以及健康柑橘叶片基因组DNA为模板对普通LAMP和快速LAMP检测体系的特异性进行了验证,利用柑橘溃疡病菌菌液和DNA溶液梯度稀释液对普通LAMP和快速LAMP检测体系的灵敏度进行了验证.普通LAMP检测体系菌体和DNA检测灵敏度分别达到了2.25×104 cfu和2.03×10-1 ng,快速LAMP检测体系菌体和DNA检测灵敏度分别达到了2.25 cfu和2.03×10-5ng.在特异性测试中,普通LAMP检测体系与快速LAMP检测体系均仅对柑橘溃疡病菌进行扩增,对非靶标菌和柑橘叶片基因组DNA不产生扩增,普通LAMP与快速LAMP检测体系特异性测试结果一致.快速LAMP检测体系在0.5h内就可以达到普通LAMP检测体系的扩增量,是普通LAMP检测体系反应时间的一半,大大提高了检测的效率;快速LAMP检测体系菌悬液和DNA检测灵敏度均比普通LAMP检测体系提高了10 000倍.成功地建立了柑橘溃疡病菌的普通LAMP及快速LAMP检测方法,为柑橘溃疡病菌的检测提供了一种新的简便、快速的检测手段.     

柑橘溃疡病菌EMA-PCR快速活体检测技术的建立

传统PCR方法不能诊断柑橘溃疡病菌(Xanthomonas citri subsp.citri Gabriel)的死活状态,往往导致假阳性检测结果.本研究将特异性核酸染料叠氮溴化乙锭(ethidium monoazide bromide,EMA)与PCR技术结合,旨在建立柑橘溃疡病活菌的快速检测技术.根据柑橘溃疡病菌独有的保守蛋白基因设计特异性引物扩增出278 bp的靶带,PCR反应的检测下限为25个细胞/25 μL或2.75 pg/25 μL.EMA-PCR结果表明:当卤钨灯曝光时间1 min,EMA终浓度为1.0 mg/L时,能有效抑制1.0×108 cfu/mL死菌的扩增;当EMA的浓度小于30 mg/L时,EMA对上述相同浓度活菌靶基因的扩增没有明显的抑制.EMA-PCR对死活混合菌的扩增表明,活菌数在6.875×101～6.875×105 cfu/PCR范围时,荧光强度与混合体系中活菌的对数值有线性关系.基于以上建立的EMA-PCR活体检测技术,对疑似带病柑橘材料进行检测,结果发现能降低柑橘溃疡病菌检测过程中的假阳性,有望为柑橘溃疡病的检疫检验提供更科学的技术手段.     

六月禾腥黑穗病菌的初步研究

狐草腥黑穗病是一种我国尚未分布、危害性较大的病害。本文首次报道狐草腥黑穗病菌在六月禾 Poa pratensis 寄生危害,对进口六月禾种子中截获的狐草腥黑穗菌的形态、孢子萌发生理以及孢子荧光反应进行了初步研究,与其他近似种和变种的比较进行了探讨。     

柑橘溃疡病菌免疫荧光和生物学检测技术研究

本研究通过对7个不同柑橘品种的离体叶片接种及致病性观察筛选出了柑橘溃疡病菌敏感寄主材料，并建立了柑橘溃疡病菌的生物学检测方法；还初次尝试建立了一种简便易行的柑橘溃疡病菌免疫荧光快速鉴定方法。柑橘离体叶片接种实验结果表明：福本、红肉脐橙、纽荷尔和枳壳对柑橘溃疡病菌表现出一定的感病性，而粗柠檬和邓肯葡萄柚未表现出明显感病迹象，反而出现了坏死性应激反应。免疫荧光试验结果显示：浓度为10^3cfu／mL的菌液在30℃下用BSA封闭2h，30℃下抗体结合1h，荧光抗体浓度为4μg,／mL，室温放置40min后镜检，就可以在荧光显微镜下清晰地看到绿色的柑橘溃疡病菌体，而用该方法检测不到水稻白叶枯病菌。用免疫荧光抗体检测柑橘溃疡病菌操作简便，仅需一台荧光显微镜，整个检测过程仅需要4h。     

进口小麦检疫疫情析议

连云港动植物检疫局于1978年承接进口小麦检疫任务,至1990年的13年中,共检疫进口小麦280船次,824万吨。主要产地为美国、法国、加拿大、澳大利来、阿根廷、希腊等国。13年检疫中,发现检疫对象有小麦矮腥病菌、毒麦和假高粱等。一般病菌10余种,发现一般仓虫4目、14科、20种。发现杂草籽近百种。     

检验向日葵霜霉病种子带菌的新技术

前言由 Plasmopara halsteelii 引起的向日葵霜霉病是一系统性、毁灭性病害,它可侵染向日葵植株的根、茎、叶、花和果实,并可通过种子携带病原菌进行远距离传播,使病菌在新区定植、蔓延,造成为害。     

湖南省柑橘溃疡病病菌生理生化特性初步研究

通过对湖南省境内分离的10个柑橘溃疡病菌株进行8项生化特性和17项生理检测,发现10个菌株在硝酸盐还原、H2S生成、淀粉酶、氧化酶、过氧化氩酶等生化特征上完全相同,但对醋酸盐、D-果糖、a-半乳糖、蔗糖、鼠李糖等的利用能力上有差异.通过对生理检测差异性进行聚类分析,发现湖南省不同柑橘产区的A菌系间存在一定的差异性.     

柑橘溃疡病菌检测方法及其在检疫中的优选

采用常规检测法、免疫斑点法、酶联免疫检测法和PCR检测法对柑橘溃疡病菌纯培养和柑橘叶片提取液进行平行测定。结果表明,对柑橘叶片提取液的检测,4种检测法检出的样品带菌率分别为11.12%、27.22%、18.69%、20.31%;对柑橘溃疡病菌纯培养的检测,4种方法检测结果一致。本实验同时比较了几种方法的灵敏度、特异性和稳定性,以及不同方法在各级检验检疫中的适应性。     

柑橘黄龙病菌在染病贡柑枝条和果实橘络内的分布规律

柑橘黄龙病是柑橘生产上最具毁灭性的病害之一,由目前还无法分离培养的候选韧皮部杆菌亚洲种("Candidatus Liberibacter asiaticus", CLas)引起的。早期研究表明CLas在染病柑橘植株内的分布并不均匀。为进一步探究CLas在染病枝条及果实内的空间分布规律,本研究以感染黄龙病的贡柑(带果实)枝条为材料,利用定量PCR(quantitative PCR, qPCR)分析同一枝条不同部位及果实橘络中的CLas浓度。结果表明,带果贡柑枝条不同部位的CLas分布不均匀且以果实橘络部位的CLas浓度最高(15 487.6 CLas cells/ng总DNA)。通过对同一橘络不同片段长度(每1.5 cm)中的CLas进行定量分析发现,同一橘络中的CLas同样呈不均匀分布(CLas个数范围:12 407～10 271 089)。此外,定量分析发现黄龙病引起的畸形果大小两侧橘络中的CLas浓度差异不显著。该结果可为探究CLas在柑橘枝条及果实中的转运规律提供参考。     

苹果斑点落叶病菌形态及侵染行为的超微结构研究

利用电子显微镜技术，对分离培养的苹果斑点落叶病病原菌及其在寄主细胞组织中的侵染行为进行了观察研究。结果表明，菌丝体在生长旺盛期，寄主细胞中含有丰富的细胞器，生长后期，细胞内出现质膜内陷及分泌小泡。分生孢子梗和分生孢子细胞中则储存了大量脂滴状物质，并且细胞壁加厚。其侵染机制是以病原菌产生的寄主特异性毒素为始动因子，使寄主细胞受到某种生理障碍后，菌丝直接由细胞壁侵入细胞内部和叶片中。     

防城港首次截获大豆疫病菌

大豆疫病是大豆生产中的毁灭性病害之一 ,自1 948年在美国首次报道该病以来 ,已先后在美洲、欧洲、日本和澳大利亚等 2 0多个国家发生。目前该病引起的根腐和茎腐病已成为美国大豆较为普遍的病害 ,其造成的损失也是巨大的 ,如 1 989～ 1 991年间仅在美国中北部 ,在使用抗病品种的情况下 ,平均每年造成的损失仍达 93万 t,价值 1 .87亿美元。　　 2 0 0 2年 3月 ,防城港某公司从美国 RESERVE港进口大豆 5 8443 .2 1 9t,经我局检验检疫人员抽样鉴定出一种我国禁止进境的危险性病菌——大豆疫病菌 Phytophthora sojae Kaufmann & Gerdemann,…     

进境柠檬样品上柑桔溃疡病菌的检测

从进境柠檬样品上分离到一株疑似柑桔溃疡病菌的分离物X206,对分离物进行了菌落形态学特征观察、16S r RNA序列测定、PCR检测、Biolog测定及致病性测试。试验结果表明分离物X206在NA培养基上形成黄色,有光泽,圆形,全缘,微隆起,粘稠状的菌落。特异引物Xac01/Xac02扩增分离物X206的DNA得到582bp的预期产物,产物序列与柑桔溃疡病菌序列的相似性为100%。其16S r RNA序列与柑桔溃疡病菌的序列完全一致。Biolog测定将分离物X206和柑桔溃疡病菌阳性菌株FZ01均鉴定为Xanthomonas campestris pv.dieffenbachiae。致病性测试显示分离物X206能导致柑桔叶片产生明显的溃疡病斑。根据试验结果将分离物X206鉴定为柑桔溃疡病菌(Xanthomonas axonopodis pv.citri)。     

不同杀菌剂对柑橘果实采后炭疽病菌室内毒力测定

[目的]为筛选出防治柑橘炭疽病的有效药剂.[方法]采用菌丝生长速率法测定了9种杀菌剂对柑橘炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)的毒力作用.[结果]25％吡唑醚菌酯、95％肟菌酯、96％戊唑醇、95％苯醚甲环唑、40％双胍三辛烷基、75％百菌清、75％肟菌酯戊唑醇、80％代森锰锌和70...     

柑橘黄龙病菌在染病贡柑枝条和果实橘络内的分布规律

 柑橘黄龙病是柑橘生产上最具毁灭性的病害之一,由目前还无法分离培养的候选韧皮部杆菌亚洲种(“Candidatus Liberibacter asiaticus”, CLas)引起的。早期研究表明CLas在染病柑橘植株内的分布并不均匀。为进一步探究CLas在染病枝条及果实内的空间分布规律,本研究以感染黄龙病的贡柑(带果实)枝条为材料,利用定量PCR(quantitative PCR, qPCR)分析同一枝条不同部位及果实橘络中的CLas浓度。结果表明,带果贡柑枝条不同部位的CLas分布不均匀且以果实橘络部位的CLas浓度最高(15 487.6 CLas cells/ng总DNA)。通过对同一橘络不同片段长度(每1.5 cm)中的CLas进行定量分析发现,同一橘络中的CLas同样呈不均匀分布(CLas个数范围:12 407~10 271 089)。此外,定量分析发现黄龙病引起的畸形果大小两侧橘络中的CLas浓度差异不显著。该结果可为探究CLas在柑橘枝条及果实中的转运规律提供参考。     

离体叶片检测种传植物病原细菌技术

寄主离体叶片和子叶用于检测棉花角斑病和大豆疫病,灵敏度分别达6×10~2cfu/ml和2.12×10~1cfu/ml;用于种子直接检测,三天内可得到结果。较之传统的分离方法优势显著,且方法简便适用。     

应用多重PCR技术同步检测柑橘4种重要嫁接传播病原

 柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV),柑橘碎叶病毒(Citrus tatter\|leaf virus,CTLV),柑橘裂皮病类病毒(Citrus exocortis viroid,CEVd)和柑橘黄龙病(Huanglongbing, HLB)亚洲种病原(Candidatus liberobacter asiaticus)是重要的柑橘嫁接传播病原。本文建立了同时检测HLB病菌、CTV、CEVd 和CTLV 4种柑橘嫁接病原的一步法、双温多重PCR检测技术体系,同时在体系中设置内参基因。应用该体系快速评价了4种嫁接传播病原在田间侵染情况,结果表明28个田间样品CTV、CEVd、CTLV和HLB感染率分别为89.3 %、17.9 %、10.7 %和28.6 %,接近半数样品为混合感染。并且将该方法应用于快速评价茎尖嫁接苗病毒的脱除情况。     

大豆茎溃疡病的研究进展及其检疫意义

本文介绍了大豆茎溃疡病的发生与分布,危害,病原菌特征,侵染循环与传播途径等,重点介绍了该病的检测方法;初步分析了该病害传入我国及在我国定殖与传播的可能性,认为该病害对我国的大豆生产具有重要的检疫意义.     

柑橘溃疡病的发生及其综合防控

柑橘溃疡病是一种为害全世界柑橘种植业最严重的细菌性病害[1],并列入国内外检疫性病害。该病主要分布于亚洲、非洲、美洲、大洋洲及马来群岛的一些国家和地区。在我