菠萝果实不同部位总RNA提取方法比较

以不同发育时期和不同部位的菠萝果实为材料,比较了改良SDS法、改良CTAB法和Trizol试剂盒法提取RNA的效果。结果表明:3种方法提取的RNA差异明显,其中改良SDS法的效果最佳,其提取的RNA质量较好,无DNA污染,OD260/OD280和OD260/OD230接近2.0,产量达到464.3μg/g.FW以上,该方法提取的RNA能满足RT-PCR、Northern blot和cDNA文库建立等分子生物学研究的需要。     

萝卜DDRT-PCR技术体系的优化

【目的】探索快速高效的RNA提取方法,建立高效率的mRNA差异显示体系。【方法】以萝卜幼嫩薹叶及花蕾为材料,比较了酸性酚-异硫氰酸胍-氯仿提取法(异硫氰酸胍法)与BIOZOL试剂法提取RNA的效果,并对DDRT-PCR体系中Taq酶、Mg2+、dNTPs、引物及cDNA用量进行了优化。【结果】BIOZOL试剂提取的RNA量大质好,经纯化后,其OD260/OD280值为1.8~2.1,表明杂质少,质量浓度大于1μg/μL,符合mRNA差异显示的要求;确定的最佳DDRT-PCR反应体系(20μL)为:10×Buffer 2.5 mmol/L,Mg2+2.8 mmol/L,dNTPs 0.25 mmol/L,Taq酶1.5 U,锚定引物2.5μmol/L,随机引物1.25μmol/L,cDNA用量0.5μL。mRNA差异显示结果表明,高分辨率的片断为100~1 000 bp。经验证,该体系也适用于大白菜和油菜mRNA差异显示研究。【结论】通过两种RNA提取方法比较和DDRT-PCR体系优化,获得了萝卜最佳RNA提取方法及mRNA差异显示反应体系。     

和田黑鸡淋巴细胞的分离和总RNA提取

探讨和田黑鸡淋巴细胞最佳分离条件和淋巴细胞总RNA提取方法,为和田黑鸡淋巴细胞的免疫学研究提供最为有效的实验材料。采用离心法分离鸡外周血淋巴细胞并检测淋巴细胞活力。利用Trizol法提取和田黑鸡的外周血淋巴细胞总RNA,通过琼脂糖凝胶电泳对所提取的RNA进行检测,并用核酸测定仪测定总RNA。结果表明:使用1:1比例的无Ca2+、Mg2+-Hank’S稀释液稀释抗凝血后,在室温、2 000 rpm/min、35 min的条件下离心分离所得的淋巴细胞效果最好。琼脂糖凝胶电泳结果显示出28S、18S和5.8S三条带,使用核酸测定仪测定的总RNA的OD260/280值为1.996,浓度为283μg/ml,表明提取了高质量的总RNA,为开展后续的研究奠定了坚实的基础。     

复合澄清剂对柠檬汁澄清作用的影响

[目的]考察单一澄清剂和复合澄清剂对柠檬汁澄清作用的影响。[方法]以透光率为主要指标,比较壳聚糖澄清、皂土澄清、壳聚糖-皂土澄清3种方式对柠檬汁澄清效果的影响,并通过正交试验优化壳聚糖-皂土复合澄清条件。同时,以VC、可滴定酸、可溶性固形物含量、沉淀量为指标,比较经3种澄清方式处理后的柠檬汁冷热稳定性和贮藏稳定性。[结果]试验表明,壳聚糖-皂土澄清较壳聚糖澄清、皂土澄清更能提高柠檬汁透光率,其最优澄清参数为壳聚糖用量0.40 g/L,皂土用量1.20 g/L,温度45℃,时间45 min,此条件下的柠檬汁透光率高达95.6%。稳定性试验结果表明,经壳聚糖-皂土澄清处理后的柠檬汁总体风味和营养品质变化不大,且冷热稳定性和贮藏稳定性均优于壳聚糖澄清处理和皂土澄清处理。[结论]该研究可为澄清型柠檬汁加工提供参考。     

自制冰冻切片包埋剂在紫花地丁种子RNA提取中的应用

[目的]通过比较使用自制包埋剂和合成胶水包埋紫花地丁种子提取RNA的效果,证明提取紫花地丁种子RNA时,使用自制包埋剂能获得高质量的RNA。[方法]用自制包埋剂和合成胶水分别包埋紫花地丁种子,冰冻切片机切片破碎种子,提取RNA,通过RNA浓度、纯度及完整性的检测,比较2种方法提取RNA的效果。[结果]自制包埋剂组和合成胶水组提取的RNA浓度分别为3.42和1.04μg/μl;1.0%琼脂糖凝胶电泳显示2组RNA都可见2条明显的条带,28S rRNA与18S rRNA条带亮度之比大于1,但合成胶水组有较为明显的拖带。[结论]该试验结果显示,自制包埋剂包埋紫花地丁种子进行切片破碎,完全能满足提取RNA的需要,是一种成本低、效果好、操作简便、具有实用价值的方法。     

李果实高质量RNA提取方法的比较和优化

李果实富含酚类和多糖,成熟李果实的总酚和总糖含量分别可达140.28μg/g和80.75mg/g,因此常规方法不能有效提取其RNA以进行分子生物学研究。比较了改良的异硫氰酸胍法、改良的Trizol法、改良的CTAB法和高氯酸盐法提取李果实RNA的效果,结果表明高氯酸盐法效果较好。根据李果实材料的特点,进一步优化了高氯酸盐法,包括用0.1mol/LTris-硼酸缓冲液(pH7.4)取代0.3mol/LTris-HCl缓冲液(pH8.3);提取缓冲液中β-巯基乙醇的浓度由1%提高到2%,可溶性PVP的浓度由8.5%降低至1%;联合使用10%乙醇和醋酸钾以除去多糖;用12000×g离心替代使用填充有玻璃丝的Centriflo柱实现分离提取缓冲液中杂质的目的等。在230、260和280nm下测定所提取RNA的吸光值,并用提取的RNA反转录后扩增β-actin基因片段验证RNA的质量,结果表明:用优化了的高氯酸盐法提取李果实的RNA完整性好,杂质少,得率较高,适用于RT-PCR等后续实验,并且也适合提取其他富含酚类物质或多糖果实的RNA。     

不同栽培及发育期对大豆根系RNA提取效果的影响

[目的]探讨从不同栽培条件下大豆不同发育期根系中提取RNA的最佳效果以及水浸处理对提取效果的影响。[方法]以吉农18为材料,分别采用沙质和土质栽培大豆至不同发育时期,根系取样,并采用RNAiso Reagent试剂盒提取根系总RNA,用2%的变性琼脂糖凝胶电泳及紫外分光光度计检测RNA样品的完整性及纯度。[结果]不同栽培基质条件下大豆根部同一发育期在沙质栽培条件下提取总RNA的效果优于土质栽培,水浸处理后的样品优于处理前。[结论]水浸处理后所提取的大豆根系RNA质量较高,能满足基因克隆和基因表达分析的要求。     

改良热硼酸法提取青香蕉果肉总RNA的条件优化

针对青香蕉果肉组织富含多糖、多酚类物质的特点,采用改良热硼酸法提取青香蕉果肉组织中的总RNA,探讨提取缓冲液pH值、离子浓度、CaCl_2浓度、处理温度、处理时间、LiCl沉淀时间对总RNA提取质量的影响,并用异丙醇简化LiCl沉淀总RNA过程。结果表明,获得了1种快速提取青香蕉果肉组织中总RNA的方法,经逆转录PCR(RT-PCR)验证,该方法适用于黄香蕉果肉、黄香蕉果皮、香蕉花、青香蕉果肉、青香蕉果皮中总RNA的提取。     

蓖麻种子总RNA提取方法比较

以成熟蓖麻种子为材料,分别用TRIquick Reagent试剂提取法、TRIquick醋酸钠改进法、TRIquick高盐改进法提取总RNA,经琼脂糖凝胶电泳,采用紫外分光光度法测定总RNA纯度并进行RT-PCR检测.结果表明,采用高盐缓冲液改良法能提取出质量高、完整性好而且无胶状不溶物的RNA,该方法简便快速,是一种经济高效的蓖麻种子总RNA提取方法.     

从活性污泥中提取微生物总DNA的方法比较

[目的]探索适宜的畜禽废水中活性污泥微生物总DNA提取的方法。[方法]采用2种方法提取畜禽废水中活性污泥微生物总DNA,即"提取缓冲液+蛋白酶K+SDS"提取法以及"溶菌酶-SDS-蛋白酶"提取法。通过对这2种方法进行比较,以确定最佳试验方案。[结果]紫外分光光度法分析表明,"提取缓冲液+蛋白酶K+SDS"提取法所得的OD260/OD280大于1.81。电泳结果显示,"提取缓冲液+蛋白酶K+SDS"提取法提取DNA亮度高,有大片断DNA的存在且拖带较少,条带集中,能成功进行16S rDNA的PCR扩增;通过PCR扩增所得的DNA的纯度检测结果显示,扩增出了条带分子约为1 500 bp的特异性条带"。溶菌酶-SDS-蛋白酶"提取法所提取的DNA没有得到较好的效果,点样孔较亮则可能存在一定的蛋白质残留,或其他杂质等,通过PCR扩增没有扩出特异性条带。[结论]"提取缓冲液+蛋白酶K+SDS"提取法为畜禽废水中微生物群落在分子水平上的研究提供了1种简便、可靠的DNA提取方法,为分析畜禽废水中细菌多样性提供了条件。     

草莓不同组织RNA提取方法的改良研究

探讨一种适于草莓不同组织的RNA提取的改良方法。通过增加裂解液震荡强度、离心柱多次吸附、增加去蛋白液温育次数及漂洗次数等步骤对EASYspin RNA提取总RNA操作方法进行改进。结果表明,改良方法提取的草莓根、茎、叶、果实、花中的总RNA,电泳检测都出现清晰的28S和18S两条明显的条带,表明总RNA完整性较好;紫外分光计分析其OD260/OD280值在1.88至2.06之间,OD260/OD230值均大于2.0,RNA浓度含量为310~500μg/mL,表明提取的总RNA纯度好、含量高;基于RNA中mRNA反转录的RT-PCR扩增Actin基因分析结果表明,改良方法提取的草莓不同组织的总RNA质量高。总之,经过电泳、紫外、反转录分析结果证实,改良EASYspin适于草莓果实等不同组织总RNA的提取,是草莓类似果树种类总RNA提取的首选借鉴方法。     

杨树落叶对Cd（2＋）的吸附等温线和动力学研究

[目的]研究杨树落叶作为一种价廉、高效的重金属吸附剂的可行性。[方法]用杨树落叶吸附模拟废水中的Cd2＋,研究不同环境条件如重金属离子初始浓度、生物吸附剂的量、溶液温度和溶液pH对吸附效果的影响。[结果]Cd2＋的初始浓度从50 mg/L增大到500mg/L时,落叶对Cd2＋的最大吸附量从20.0 mg/g增长到201.2 mg/g。当溶液的pH从3增大到11时,落叶对Cd2＋的吸附量逐渐从30.9 mg/g增大到40.5 mg/g。分别用Langmuir和Freundlich 2种吸附等温线模型对Cd2＋的吸附过程进行拟合;用一级动力学模型、二级动力学模型和内扩散模型对Cd2＋的吸附过程进行动力学研究。结果显示,Langmuir吸附等温线模型和二级动力学模型适合描述树叶对Cd2＋的吸附过程。[结论]落叶对Cd2＋具有一定的吸附能力,是较为理想的重金属离子吸附剂。     

不同浸提条件对荷叶茶水理化品质的影响

[目的]对荷叶茶水浸提技术进行优化。[方法]以绿茶型荷叶茶为原料,利用单因素试验和正交试验分析了不同浸提条件对荷叶茶水理化品质的影响。[结果]荷叶茶水的最适浸提条件为浸提温度80℃、浸提水量80 ml/g、浸提时间20 min。[结论]该研究为荷叶茶饮料的规模化生产提供了参考。     

超声波提取羽衣甘蓝叶黄素的工艺研究

以羽衣甘蓝真空冻干叶粉为原料,探明超声波强化四氢呋喃提取叶黄素的工艺条件。确定适合提取料液比后采用正交试验研究超声波功率、提取温度、超声作用时间对提取量的影响。结果显示,较理想的提取条件为:超声波功率400 W、提取温度30℃、超声波作用时间20 min,在此条件下叶黄素提取量最高,达317.25 mg.kg-1。     

枇杷叶多酚超声波辅助提取工艺优化及其抗氧性分析

[目的]采用响应面法对超声波辅助提取枇杷叶多酚工艺条件进行优化,并评价其抗氧化性,为枇杷叶多酚的开发利用提供技术支持.[方法]以干燥枇杷叶为原料,在单因素试验基础上,依据Box-Behnken原理选择提取时间、提取温度、料液比和乙醇体积分数4个因素进行响应面试验,确定枇杷叶多酚超声波辅助提取的最佳工艺条件,并与传统溶剂浸提法的提取效率进行对比;以羟基自由基和DPPH自由基的清除率为评价指标,对枇杷叶多酚的抗氧化性进行研究.[结果]通过响应面设计分析得到超声波辅助提取枇杷叶多酚的最佳工艺条件为提取温度67℃、提取时间40 min、料液比1:25、乙醇体积分数60%,在此条件下得到枇杷叶多酚提取率为48.24 mg/g,与理论值48.79 mg/g相近;提取温度、提取温度与料液比及提取时间与料液比的交互作用对枇杷叶多酚提取效果影响显著(P<0.05).与传统溶剂浸提法比较发现,超声波辅助提取法得到的多酚提取率较高,且所需时间较短.枇杷叶多酚对羟基自由基和DPPH自由基的清除能力随枇杷叶多酚质量浓度的增大而不断增强,枇杷叶多酚质量浓度为20 μg/mL时,两种自由基的清除率分别为40%和56%.[结论]响应面法优化的超声波辅助提取枇杷叶多酚工艺条件合理可行,与传统溶剂浸提法相比,超声波辅助提取法可明显提高多酚提取率;枇杷叶多酚具有较强的抗氧化性.     

葡萄砧木“1202”离体再生体系的建立

以葡萄砧木"1202"为试材,研究了不同外植体类型、不同植物生长调节剂浓度及配比、不同外植体放置方式等对其不定芽再生频率的影响。结果表明:叶片的再生效果最好,不定芽率达68.78%;葡萄砧木"1202"叶片不定芽再生的最适培养基为MS+TDZ 1.0 mg/L+IBA 0.01 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂5.5 g/L,pH 5.8;叶片最佳放置方式为远轴面接触培养基。将再生不定芽置于3/4 MS+IBA 0.35 mg/L培养基上诱导生根,生根率达80%。再生植株培养35～50 d后移栽炼苗,成活率可达90%。     

烤烟烟叶腺毛分泌物提取方法初探

为探索烤烟烟叶腺毛分泌物提取效果最佳的方法,以烤烟品种K326、云烟85和红花大金元为材料,采用二氯甲烷作为溶剂,比较不同提取级数和不同提取时间前后叶片重量的变化。结果表明,在烟叶腺毛分泌物提取方法的不同提取级数的效果比较中,3个烤烟品种均以前3级提取的变化最明显,而之后增加提取级数,叶片重量变化不明显;不同提取时间对叶片的重量变化影响不大。这说明采用3级提取作为烤烟叶片腺毛分泌物的提取方法比较适宜。     

保水剂与外源物质复合配方对苗木蒸腾速率和叶水势的影响

为改善困难立地土壤的保水保肥能力,以核桃、山杏和紫穗槐幼苗为试材,采用正交试验法组合配方,将不同浓度保水剂（SAP）和外源物质复合,进行了盆栽试验,用极差分析和相关性分析筛选出最佳方案。结果表明：不同浓度SAP与外源物质处理下,核桃、山杏、紫穗槐的蒸腾速率日变化均呈现双峰型;在提高叶片蒸腾速率方面效果以处理⑤：山杏、SAP 10 g、吲哚乙酸（IAA）0.250 0%＋萘乙酸（NAA）0.500 0%、聚天门冬氨酸（PASP）10 g最显著。由于保水剂与外源物质的施入,改变了土壤的供水方式,使得苗木叶水势日变化曲线变幅较小;在提高叶片水势方面的效果以处理⑨：紫穗槐、SAP 15 g、IAA 0.250 0%＋NAA 0.500 0%、PASP 1 g最为显著。最后,从抗旱性的角度考虑,对处理⑤、⑨的蒸腾速率和叶片水势进行相关性分析,筛选出最优配方为处理⑨。将保水剂与外源物质复合一体化这一技术运用在林木培育上,对于干旱地区造林具有重要意义。     

HPLC测定不同部位烟叶中没食子酸的含量

建立了高效液相色谱(HPLC)测定烟叶中没食子酸含量的方法。以超纯水为萃取剂,样品经超声提取后,采用C18色谱柱分离/二极管阵列检测器测定。结果表明:没食子酸在0.5~50.0 mg/L范围内的线性相关系数为0.9999,检出限为1.07μg/g,加标回收率为92.7%~101.6%,RSD<5%(n=5)。9个烟叶样品没食子酸含量在107.0~242.8μg/g之间;不同部位烟叶没食子酸含量排序为:上部烟叶>中部烟叶>下部烟叶。     

白皮松总RNA三种提取方法的比较研究

[目的]对白皮松（Pinus bungeana）松针总RNA提取方法做比较,以得到完整的、高质量的白皮松总RNA。[方法]采用Trizol法、RNA提取试剂盒法和LiCl沉淀法3种方法提取白皮松总RNA,通过琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测总RNA的完整性和提取纯度。[结果]LiCl沉淀法提取的RNA收率高,完整性好,OD260/OD280均在1.80～2.00,28S、18S条带清晰。[结论]LiCl沉淀法能高效地从白皮松针叶组织中分离出纯度高、完整性好的RNA样品。