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H5N1亚型AIV NS1基因在大肠杆菌中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
根据已测得的H5N1亚型禽流感病毒的NS基因序列,设计并合成一对特异性引物NS1U/NS1L,利用RT-PCR方法扩增出该毒株的NS1基因。将酶切处理后的基因片段定向克隆到原核表达载体pET-32a( )上,通过酶切分析及序列测定,鉴定出了NS1基因片段的阳性重组子。转化BL21大肠杆菌感受态细胞后,经IPTG诱导和SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,成功表达出大小约45.0kD的NS1融合蛋白,表达产物主要存在于包涵体中。用West-ern-Blotting证实重组融合蛋白可以特异性地被标准阳性血清所识别。 相似文献
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据中国农业大学动物医学院刘金华、史为民、吴清民、郭玉璞等研究,从1996年至2001年间分离鉴定了8株H_9N_2亚型禽流感病毒,非结构蛋白基因(NS_1)扩增和序列测定的结果:NS_1基因核苷酸和氨基酸同源性分别为96.5%~99.5%和94.59%~98.6%,说明NS_1基因在遗传进化上高度保守,稳定遗传。与中国香港、韩国、巴基斯坦及人源H_9N_2分离株相比较,发现中国大陆的鸡源H_9N_2分离株的NS_1基因在其羧 相似文献
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H5N1亚型禽流感病毒NS1基因的克隆与表达 总被引:1,自引:0,他引:1
根据GenBank中收录的H5N1亚型禽流感病毒NS1基因序列设计合成了一对引物AI-N1/AI-N2,利用RT-PCR方法扩增AIVNS1基因并克隆到pMD18-T载体上,对所得到的重组质粒进行酶切分析及序列测定,与GenBank中收录的其他分离株NS1基因进行序列比较分析,同源性达96%~99%,含有NS1基因的1个开放性阅读框(ORF)。将该基因克隆到pET-28a中构建NS1基因原核表达质粒pET/NS1,转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,在IPTG诱导下获得了预期的蛋白表达,所表达的蛋白质分子质量约为30kD。Western-blotting结果表明表达的NS1蛋白有良好的生物学活性,与H5N1 AIV感染鸡血清发生特异性反应,而与H5N1 AIV灭活疫苗免疫鸡血清无反应,为建立区分野毒AIV感染家禽与AIV灭活疫苗免疫家禽ELISA方法的建立提供了生物学材料。 相似文献
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H5N1亚型禽流感病毒NS1基因的克隆及表达 总被引:4,自引:0,他引:4
利用RT-PCR扩增了2株H5N1亚型禽流感病毒NS1基因,并将其克隆到pMD 18-T载体上,进行序列分析.结果显示,这2株禽流感病毒NS1基因核苷酸序列的同源性为70.2%,分别属于NS等位基因群A和等位基因群B.再将克隆的NS1基因插入到pET-28a质粒中构建原核表达载体,将其转化到DH5α大肠埃希氏菌感受态细胞中,经双酶切鉴定及序列分析,表明获得了重组质粒pET-52NS1和pET-174NS1.经SDS-PAGE分析,重组质粒转化BL21(DE3)(pLysS)感受态细胞后,经IPTG诱导,获得了分子质量约为30 ku的NS1融合蛋白.用AIV多克隆血清做Western-blotting分析,发现来自2个等位基因群的NS1蛋白都具有较好的抗原活性. 相似文献
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2007-2008年从吉林省某猪场采集疑似流感发病猪的鼻咽拭子,经病毒分离鉴定获得3株H3N2亚型流感病毒,分别命名为A/swine/Jilin/5/2007(Sw/Jilin/5/07)、A/swine/Jilin/19/2007(Sw/Jilin/19/07)、A/swine/Jilin/37/2008(Sw/Jilin/37/08)。HA进化树分析结果表明:3株H3N2亚型流感病毒属于近代人源病毒谱系;但是在NA进化树中,Sw/Jilin/37/08株与早期人源和近代人源关系密切,暗示它可能是早期人源和近代人源H3N2亚型猪流感病毒之间的过渡毒株,进一步证实猪在流感病毒种间传播过程中充当"中间宿主"作用。 相似文献
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鸭源H9N2亚型流感病毒NS基因的克隆及表达 总被引:7,自引:2,他引:7
根据GenBank中收录的H9N2亚型流感病毒的NS基因序列设计合成了1对引物NSU/NSL,利用RT—PCR扩增出了H9N2株NS基因;将该基因片段克隆到pMD18-T载体上,并对所得到的重组质粒进行酶切分析及序列测定。结果,获得了NS基因片段的阳性重组子,扩增的NS基因包含NS1基因完整的阅读框架和部分NS2基因,其序列与GenBank中收录的其他分离株NS基因比较,同源性达96%~99%。再将克隆的NS基因插入到原核表达载体pET-28a后,转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,在IPTG诱导下获得了预期的蛋白表达,所表达蛋白质的分子质量约为30ku。 相似文献
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为进一步了解福建省H9N2亚型禽流感病毒的基因遗传进化关系,本研究将福建省2011年分离的毒株FZ-04、FZ-11与GenBank上登录的2000~2011年福建省分离的H9N2毒株及国内外典型代表株进行HA、NA基因的序列比对和遗传进化分析。结果表明,分离株FZ-04和FZ-11的HA基因与CK/FJ/G9/09株核苷酸同源性最高,属于国内常见的CK/BJ/1/94亚系。HA裂解位点处的氨基酸序列为-PSRSSR/GL-,符合低致病性禽流感病毒的分子特征。NA基因在遗传进化关系上呈现独立的分支,与CK/FJ/10954/05毒株核苷酸序列同源性最高,属于CK/HK/G9/97亚系,且NA基因推导的469个氨基酸序列中没有缺失。同时,从HA和NA基因的遗传进化树上可知,2000~2011年福建省H9N2禽流感病毒进化相对比较稳定,可能有一个共同的起源。 相似文献
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H5N1亚型禽流感病毒新疆株NS基因的克隆和序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
根据已发表的H5N1禽流感病毒NS基因全序列设计了1对引物,对4株禽流感病毒新疆株的NS基因进行了RT—PCR扩增,并将其克隆到pMD18-T载体上,分别获得了全长为817、851、854、854bp的全基因序列。序列分析结果表明,新疆毒株间的核苷酸同源性为97.8%~98.9%,氨基酸同源性为96.5%~98.7%,与广东、香港和东南亚等不同地区的11个毒株比较,同源性为90.0%~99.4%;与来自野禽、猪等不同种类的11个流感毒株比较,同源性为81.4%~99.3%。系统进化树分析表明,新疆株独立分支。 相似文献
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利用RT-PCR技术扩增了一株H5N1亚型禽流感病毒(AIV)的NS1基因,克隆到pGEM T-easy载体上,经序列测定和分析正确后,将该基因插入到pET-32a载体中构建原核表达载体pET-NS1,阳性重组质粒转化BL21感受态细胞,用1mmol/L的IPTG诱导和SDS-PAGE电泳后获得了分子质量约为51ku的NS1融合蛋白。通过Western-blotting发现NS1蛋白可与H5N1亚型AIV单因子血清反应。为建立H5N1亚型AIV野毒株和疫苗株的特异性鉴别方法奠定了基础。 相似文献
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2003年底,东南亚多个国家开始暴发H5N1亚型高致病性禽流感( HPAI),我国自2004年1月26日第一起疫情出现以来,相同疫情时有发生,我国青海湖于2005年5月暴发了流感史上第一起野鸟H5N1亚型HPAI,此后,随着野鸟的迁徙,该病由亚洲逐渐传播到欧洲、非洲等地.目前,全世界多个国家遭受H5N1亚型高致病力禽流感病毒(HPAIV)的侵害,不仅养禽业损失惨重,人或其它哺乳动物也有感染及死亡病例的发生,2011年8月19日,WHO报道全世界已有565人感染,331例死亡,中国有40人感染,26人不幸死亡. 相似文献
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利用RT-PCR技术对3株H5N1亚型高致病性禽流感病毒新疆株的NA基因进行了扩增,分别得到了3个毒株的NA基因,序列分析表明,3个毒株NA的全长核苷酸序列均为1 380 bp.同源性分析表明,3个分离株之间的核苷酸同源性在95.1%~97.9%之间;与来自青海、浙江、广东、东南亚等不同地区水禽禽流感病毒毒株的同源性为90.3%~98.8%;与分离自香港、浙江、越南等地区的流感病毒同源性为86.7%~97.9%. 相似文献
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根据Gen Bank上已发表的H3N2亚型的猪流感病毒NS基因序列,设计合成一对引物,对四个猪流感病毒广东株提取RNA,运用RT-PCR方法获得了4株H 3N2亚型猪源流感病毒广东分离株A/Swine/Guangdong/01/04(H 3N2)、A/Swine/Guangdong/02/04(H 3N2)、A/Swine/Guangdong/03/04(H 3N 2)、A/Swine/Guangdong/04/04(H3N2)的NS基因序列,并对所得序列进行比较分析.序列分析表明,四个毒株NS基因的核苷酸序列与参考毒株的NS基因相似性高迭90%以上,说明近年来广东的H 3N2亚型猪流感病毒NS基因变异较小.遗传进化关系表明本实验四个毒株的NS基因和香港2000-2002年间的猪流感病毒的NS基因与1998-2002年间美洲流行的人流感病毒的NS基因在遗传进化树中位于同一个分支,这说明它们可能有着相近的亲缘关系. 相似文献