中国沿海5个自然西施舌群体等位酶的遗传变异研究

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳技术,研究了中国沿海的山东胶南(JN)、江苏南通(NT)、浙江台州(TZ)、福建福州(FZ)、广西北海(BH)西施舌(Coelomactra antiquata)自然群体的等位基因酶遗传变异,对其斧足、外套膜和肝脏组织进行了13种同工酶的比较实验,最后选择肝脏作为西施舌的等位酶研究组织。选取谱带清晰的8种等位酶进行检测,共检测到17个位点。JN、NT、TZ、FZ、BH群体的多态位点比例分别为58.82%、70.59%、50.00%、56.25%、41.17%,平均有效等位基因数(Ae)分别为1.550、1.555、1.434、1.602、1.828,平均杂合度观察值(Ho)分别为0.240、0.270、0.239、0.243、0.288。结果表明,群体的遗传变异水平BH>NT>FZ>JN>TZ,中国沿海西施舌遗传变异水平较高、种质资源较好;同时发现除浙江台州(TZ)群体外,普遍存在杂合子缺失现象;并根据等位酶资料对5个群体进行了UPGMA聚类分析。     

北方沿海西施舌苗种的人工培育试验

在辽宁省沿海首次对西施舌室内人工育苗进行了研究。试验结果表明,对西施舌种贝促熟62d,用流水刺激的方法诱导亲贝排放精,卵,亲贝个体排放比例达到60％以上,个体排卵量约为380～420万粒,其受精率为82．0％,孵化率为46．0％。在盐度为25．6～31．0,水温为23．8～25．9℃的条件下,浮游幼虫9～14d进入附着变态期,变态率为12．4％,壳长生长速度为13．9μm／d。变态后的36d内,壳长平均生长速度为76．3μm／d,成活率为80.4％。沙盘单位面积附苗量为波纹板的48．5倍。本次试验利用12m^3水体育出2．5mm的稚贝21．4万枚,单位水体出苗量为1．78万枚／m^3。     

长乐沿海西施舌资源的初步调查

2012年10月在长乐沿海布设31个站位开展西施舌资源调查,仅在4个站位采集到西施舌,占全部站位的12.9%。调查共采集西施舌9个,总重量376.5 g;样品壳长27.11～113.55 mm,平均61.29mm;个体重2.0～162.0 g,平均41.8 g。栖息密度和生物量最高值分别为144.30个/hm2和4.98 kg/hm2。调查结果表明长乐沿海西施舌资源已经明显衰退。     

日照沿海西施舌人工繁育技术

上世纪80年代,西施舌Coelomactra antiquata( Spengler,1802)人工繁育在日照沿海试验成功.近年来,经过日照市水产研究所的科研攻关,突破了稚贝中间培育的关键技术,2011年共获受精卵约3亿粒,孵化D型幼虫2.3亿余粒,孵化率近77％.育成壳长3～9 mm以上西施舌苗900余万粒,圆满完成了日照近海海区西施舌的省级增殖放流任务.     

梭鱼养殖群体与自然群体等位基因酶的遗传变异

采用水平淀粉凝胶电泳技术研究了梭鱼 (L iza haematochelia)自然群体 (2 9尾 )与养殖群体(31尾 ) 10种酶 2 2个位点的等位基因酶遗传变异情况。自然群体和养殖群体的多态位点比例 (P95)分别为 0 .2 6 2和 0 .131。在养殖群体中的 G3PD- 3和 PGM位点观察到相当多的杂合子 ,导致这两个位点杂合度远大于自然群体 ,进而造成养殖群体平均杂合度 0 .0 92± 0 .0 5 1高于自然群体的平均杂合度0 .0 6 4± 0 .0 36。而养殖群体的平均杂合子缺失指数 - 0 .36 4± 0 .10 4和平均有效等位基因数 1.132±0 .0 5 9高于自然群体的相应各值 :- 0 .0 6 77± 0 .0 76和 1.10 1± 0 .0 36。对两个群体各位点等位基因分布以及杂合度进行相关性检验 ,其相关系数分别为 0 .9838和 0 .816 3,相关程度较高。与其他位点相比 ,G3PD- 3和 PGM位点属于多变异位点 ,养殖群体在这两个位点杂合度较高的原因 ,可能与养殖过程中环境因素造成的蛋白质表达的个体差异有关。两个群体的 Nei遗传距离很近 ,为 0 .0 0 9;遗传相似程度很高 ,遗传相似性系数达 0 .991     

广东沿海西施舌资源保护对策

本论述了广东沿海西施舌的分布、分布区的环境特征和资源变动情况，并对其资源衰退的成因进行了分析，提出了资源及生态环境保护对策。     

西施舌人工育苗试验

浙江西施舌的人工育苗以4月下旬至6月中下旬为宜,重视亲贝促熟技术,实行阴干和流水刺激排放精卵,变态期以沙底质上附着为宜。     

福建与江苏西施舌群体形态差异研究

对栖息在中国福建与江苏沿海的2个野生西施舌（Coelomactra antiquata）群体进行了形态特征比较,以相同壳长、相同年龄及其壳长、壳高、壳宽、壳质量、檐面长度与宽度等5个数量性状的观测数据为依据,应用4种数理统计方法,对不同群体西施舌进行形态差异的多元分析。结果表明,栖息于福建长乐与江苏如东沿海的西施舌5个可量性状均表现出显著与极显著差异。均数差异系数（C、D）检验值超过1．28,差异达到亚种水平。     

西施舌Cyt b基因核苷酸差异分析

从线粒体DNA水平对我国沿海西施舌进行了遗传差异和系统发育研究,为其保护和可持续利用提供理论依据.对4个不同地理群体西施舌Cyt b基因片段进行了扩增、测序,利用MEGA4.1进行序列比对分析,以文蛤和中华文蛤为外类群,构建系统进化树.结果获得394 bp的Cyt b基因片段,其T、C、A、G含量分别为38.4%、16.9%、23.6%、21.1%,A+T含量明显高于G+C含量.在394 bp比对位点中,有318个保守碱基,76个变异位点.其中,70个简约信息位点.长乐与其他3个群体之间的遗传距离为0.194～0.209.氨基酸序列比对结果显示长乐群体与3个非长乐群体有7个位点的氨基酸差异,遗传距离为0.053.由此可见长乐群体是一个具有明显分子遗传特征的独立群体.     

基于CO Ⅰ的中国西施舌DNA条形码

以我国大连(DL)、日照(RZ)、启东(QD)、长乐(CL)、漳州(ZZ)和北海(BH)6个野生群体西施舌为研究对象,用引物LCO1490和HCO2198扩增线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因片段序列,PCR产物双向测序,用ClustalX进行DNA序列比对,用MEGA4.1和PhyML软件构建NJ树和ML树,...     

西施舌同工酶的组织特异性与多态性初步研究

采用垂直聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对西施舌（Coelomactra antiquata）闭壳肌、鳃、外套膜、消化腺和足肌5种组织的18种同工酶进行组织特异性分析,并对其中11种同工酶进行了多态性的筛选。结果表明,西施舌同工酶的表达具有明显的组织特异性。消化腺与肌肉组织中的11种酶（ADH、AK、DIA、EST、GPI、IDH、MDH、PGM、SDH、SOD和XDH）可以得到稳定而清晰的酶谱。在11种酶的17个基因位点中有6个位点（aDH、EST-1、MDH-1、PGM,SOD．J和XDI-1）为多态位点,多态位点比例为35．3％。平均观测杂合度（风）和预期杂合度（见）分别为0．360和0．519,平均等位基因数目（M）为4．40。     

华南沿海长鳍篮子鱼不同地理群体的遗传多样性分析

对南海北部沿岸及东海南部9个不同地理群体的长鳍篮子鱼(Siganus canaliculatus)进行遗传多样性及遗传结构分析。484条DNA D-loop 序列分析结果显示：序列长度约 828bp,包含57个变异位点,92个单倍型；所有群体总的单倍型多样性指数(Hd)和核苷酸多样性指数(π)分别为0.80798和0.00405；群体内的遗传距离 0.00386～0.00532,群体间的遗传距离 0.00383～0.00482,群体间的分化指数为-0.01935～0.00759,各种分组的AMOVA分析均显示群体内变异比例超过100%；Fu"s Fs检验值为显著负值(-25.53678,p<0.01),核苷酸错配分布图呈单峰,吻合度检验数值较小且不显著,这些结果均提示长鳍篮子鱼可能经历过种群扩张事件,推测扩张时间约在4.74万年～1.18万年前。综上,南海北部沿岸及东海南部9个长鳍篮子鱼群体间不存在显著的地理结构和谱系结构,可划归一个管理单元进行种质资源保护。     

西施舌精子发生过程的超微结构观察

利用透射电镜研究西施舌精子的发生和结构 ,揭示了从精原细胞逐渐发育为精子过程中细胞形态结构的变化和细胞器的演变规律。精细胞的分化分为 6期 ,主要包括 :核形态由扁圆到圆再到椭圆形 ;核染色质以颗粒状形式凝集 ;高尔基体分泌的前顶体颗粒聚合发育为前顶体囊 ,参与顶体的形成 ;线粒体逐渐融合与发达 ;中心体的移动及鞭毛的形成 ;胞质的逐步减少。成熟精子为原生型 ,由头部、中段和尾部组成。顶体圆锥状 ,高密度的顶体物质集中分布于基部四周 ,呈灯罩状 ;亚顶体腔呈尖锥状 ,内含密度较低的均匀物。细胞核近椭圆形。中段由 4个椭圆形的线粒体和 2个相互垂直的中心粒组成。尾部鞭毛为典型的“9+2”型结构。     

贵州省3个地理种群大鲵的遗传多样性及遗传结构

测定了贵州省贵定县、松桃县和江口县共36尾大鲵的mtDNA D-loop区部分序列,探究贵州省内不同地理种群大鲵的遗传多样性及遗传结构。结果显示,36个序列的碱基平均组成为T(33.8%)、C(22.2%)、A(30.0%)、G(14.0%),其中T的含量最高,C的含量最低;A+T含量(63.8%)显著高于G+C含量(36.2%)。江口种群核苷酸多样性指数为0.00551,贵定种群及松桃种群的核苷酸多样性指数均为0。3个地理种群相比,江口种群大鲵遗传多样性水平较高。3个种群的平均遗传距离为0.00436,其中贵定种群与江口种群达到了种群的分化水平(P0.01)。遗传结构分析结果表明,贵定种群先与松桃种群聚为一支,再与江口种群聚为一支。3个种群大鲵的整体遗传多样性水平低,遗传分化程度也低。     

达里湖高原鳅不同地理群体遗传多样性与遗传分化研究

为了解达里湖高原鳅不同群体遗传变异现状,本研究选择线粒体Cyt b基因作为分子标记,分析了红碱淖、大黑河、辉腾河及漳河4个群体的遗传多样性、遗传分化及种群历史动态。结果表明,67尾个体中共检测到16个变异位点和12个单倍型;不同群体的单倍型多样性范围为0.233~0.744,核苷酸多样性范围为0.00020~0.00860。其中,查干诺尔湖流域的辉腾河群体遗传多样性水平最高;黄河流域的红碱淖与大黑河群体单倍型多样性水平较高,核苷酸多样性水平较低;海河流域的漳河群体单倍型多样性与核苷酸多样性均较低。单倍型系统发育树和进化网络图显示,12个单倍型未聚类形成明显的谱系结构,多数单倍型为单一群体独有;除漳河群体外,其群体的单倍型混杂连接,未遵循各自的地理分布格局。遗传分化分析结果显示,群体间遗传分化指数范围为0.233~0.904,多为高度分化;分子方差分析表明遗传变异主要来源于群体间（66.31%）。种群历史动态分析未检测到达里湖高原鳅各地理群体及总体在近期经历过种群扩张。鉴于达里湖高原鳅已成为雅鲁藏布江外来鱼类,建议将达里湖高原鳅自然分布区内的各群体划定为不同保护单元并跟踪监测栖息地质量,同时加强对物种交易和放生活动的管控。     

大鳞副泥鳅７个群体遗传变异的微卫星分析

利用泥鳅的微卫星引物跨种扩增大鳞副泥鳅,通过家系扩增、PCR产物测序筛选出6个座位,用于大鳞副泥鳅7个野生群体的遗传结构分析。结果显示,群体的平均等位基因数在3.167与4.833之间,平均观测杂合度（Ho）在0.248与0.417之间,平均期望杂合度（He）在0.379与0.505之间,多个座位存在零等位基因、杂合子缺失现象,显示大鳞副泥鳅种群遗传多样性较低。采用 UPGMA 法对7个群体基于 DA 遗传距离进行聚类,可分为4类,位于长江中下游的沙市、澧县、武汉、鄱阳湖群体先聚为一类,后与石首群体聚类,最后与珠江水系的广州群体聚类,而位于长江上游的泸州群体则单独聚为一类。群体的 F-统计量（Fst）为0.2987,表明群体间存在显著的遗传分化,主要由泸州群体与其它地区群体间的遗传分化引起。     

铜在西施舌鳃和消化腺蓄积及对SOD和CAT活性影响

为了研究重金属铜(Cu2+)在西施舌鳃、消化腺组织中的蓄积规律及其对超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性的影响,本文采用急性毒性实验的方法,将西施舌置于不同浓度Cu2+溶液进行实验。结果显示,鳃组织中的Cu2+在第4天时达最大蓄积量,为79.7μg/g,消化腺组织则在第8天蓄积量达最大,为139.2μg/g,Cu2+的最大蓄积均出现在0.16 mg/L胁迫组,消化腺Cu2+浓度蓄积均随胁迫浓度的增加而升高;鳃、消化腺组织CAT活性均呈先升高后降低趋势,且后者CAT活性显著高于前者;鳃组织SOD活性呈先升高后降低趋势,且受到显著诱导(P0.05),消化腺组织的SOD活性则呈下降趋势,在0.16 mg/L胁迫组,鳃和消化腺组织的SOD活性均分别在第3~4天受到极显著抑制(P0.01),表明CAT和SOD活性可作为指示西施舌受Cu2+污染程度的重要指标。     

红唇薄鳅2个野生群体的遗传多样性研究

采用9个微卫星DNA标记对长江支流岷江下游厥溪和长江上游干流朱杨溪红唇薄鳅的2个野生群体遗传多样性及遗传分化情况进行了研究。共检测出73条等位基因,其中厥溪群体中有55条等位基因,朱杨溪群体中有69条等位基因,两群体共有等位基因数为51条。厥溪群体和朱杨溪群体的平均等位基因数分别为6.111和7.667,平均观测杂合度分别为0.665和0.668;平均期望杂合度分别0.684和0.712,平均多态性信息指数分别为0.621和0.656,从各参数结果来看,朱杨溪群体的遗传多样性水平高于厥溪。AMOVA结果显示,大多数遗传变异存在于红唇薄鳅群体内(98.68%),群体间的遗传变异为1.32%,固定系数不显著。基因流为9.42,表明两群体间基因交流频繁。UPGMA聚类显示,厥溪和朱杨溪群体中的个体相互混杂。这些结果表明长江上游厥溪和朱杨溪群体未出现遗传分化。