大豆凝集素纯化及凝集活性测定的研究

通过建立快速大豆凝集素(SBA)粗提液制备方法,利用N-乙酰-D-半乳糖胺-epoxy-Sepharose 6B亲和层析制备体系制备大豆凝集素样品,采用聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)及红细胞凝集试验分别对本试验制备的大豆凝集素进行纯度及凝集活性的检测。结果表明,试验制备的大豆凝集素的产率为135 mg/100 g;所制得的大豆凝集素样品的纯度较高,与大豆凝集素标准品基本一致;其凝集活性为256。研究成果可为大豆凝集素的量化生产提供技术参考。     

大豆凝集素在模拟猪胃肠环境中的稳定性研究

为研究大豆凝集素在体外模拟猪胃肠环境中的稳定性,将纯品大豆凝集素设为1,2,3,4,5 mg/mL 5个浓度梯度,分别与等体积的模拟胃液或模拟肠液混合(37℃),按时间梯度15,30,60 s和2,4,8,15,30,60 min准确记时并终止反应,采用SDS-PAGE凝胶电泳和间接抑制ELISA方法定量检测反应体系中剩余的大豆凝集素.结果表明:大豆凝集素在胃蛋白酶反应体系中的剩余量随底物浓度和反应时间的不同都呈显著性变化(P<0.05).胃蛋白酶降解大豆凝集素主要发生在反应的初始阶段,随着反应时间的延长降解速率逐渐变慢,但反应一直在进行;随着大豆凝集素浓度的增加,降解速率增大,但彻底降解所需的时间延长,底物浓度从1 mg/mL增加到5 ng/mL,完全降解的时间为9.5～23 min.胰蛋白酶对完整的大豆凝集素不产生降解作用.大豆凝集素在猪消化道内有一定程度的降解,但与大豆凝集素的浓度和通过胃的时间密切相关.     

饲料中大豆凝集素的分离纯化与生物活性测定

采用不同纯化方法制备大豆凝集素,其产率略有不同,其中采用N-乙酰基-D-半乳糖胺-Epoxy-Sepharose6B法制备产率最高,且N-乙酰基-D-半乳糖胺对大豆凝集素的亲和力较高,所制备的大豆凝集素活性测定与标准品一致,试验结果表明,该法是目前制备大豆凝集素的最优方法。     

鸡小肠上皮细胞表面大豆凝集素受体的标记

以0日龄海蓝褐蛋鸡为材料,用胶原酶结合组织块培养的方法分离培养了鸡小肠上皮细胞,通过抗角蛋白单克隆抗体对分离的细胞进行纯度鉴定,并用荧光标记大豆凝集素对已鉴定的细胞大豆凝集素结合位点进行了标记.结果表明:试验获得了鸡小肠上皮细胞原代培养物纯度＞90%,可用于后续试验,荧光标记表明细胞表面存在大量的大豆凝集素受体.     

冰冻条件下两种外源植物凝集素对水曲柳幼叶叶绿体外膜的影响

水曲柳是我国东北林区重要的造林树种。在其幼叶展开期间经常受到霜浆的危害，如何提高其幼叶的低温抗性对于延长其生长期具有重要的实际意义。从水曲柳幼叶中分离完整叶绿体，然后使具有半乳糖专一性的花生凝集素和大豆凝集素结合至水曲柳叶绿体外膜，此后经－10℃冰冻处理3h，经测试，它们对外膜膜脂的流动性的影响不同。大豆凝集素的 疏水性小于花生北集素的疏水性。大豆凝集素降低了膜脂酰基链和甘油主链的流动性，而花生凝集素则增强了这两个部位的流动性，这与它们的疏水性大小相关。这表明花生凝集素能在冰冻条件下增加水风柳叶的叶绿体外被膜的流动性。     

大豆凝集素在猪消化道内活性残留规律的研究

用经N-乙酰基-D-半乳糖胺-epoxy-sepharose 6B亲和层析体系纯化的大豆凝集素制备兔抗大豆凝集素多克隆抗体,建立大豆凝集素间接抑制ELISA定量检测方法,检测下限低于10 ng/mL。以含质量分数为20%的生大豆和1%Cr2O3(外源指示剂)的日粮饲喂长白猪(70日龄)2周,检测其胃、十二指肠、空肠前、空肠中、空肠后、回肠、盲肠、结肠内食糜中大豆凝集素的活性残留率分别为(35.35±1.06)%(、23.90±1.13)%(、16.30±0.82)%、(12.80±0.90)%、(11.20±0.66)%(、9.98±0.74)%(、6.20±0.68)%和(4.30±0.51)%。其中由胃到十二指肠和由十二指肠到空肠前的残留率变化均达到了显著水平(P<0.05)。     

大豆凝集素(SBA)含量遗传分析与QTL定位

大豆凝集素(Soybean agglutinin,SBA)为大豆中含量较高、作用较强主要抗营养因子之一,影响大豆食品和饲料安全,降低或去除大豆籽粒和产品中凝集素成为大豆食品和饲料工业亟待解决问题。文章以合丰45号(高SBA含量)×太平川黑豆(低SBA含量)杂交组合及衍生201个稳定株系组成的F78重组自交系(RIL)群体为试验材料,在3年(2011~2013)1个样点(哈尔滨)种植环境下对大豆凝集素含量作遗传模型和QTL分析。结果表明,SBA含量符合2对主基因+多基因混合遗传模型;利用134对多态性SSR引物扩增RIL群体,构建遗传图谱,对SBA含量相关作QTL分析。共检测到4个与SBA含量相关QTL,每个QTL均重复检出2次,稳定性较好,其中SbaHTC1-1(Satt139~Satt578)和SbaHTD1b-1(Satt537~Satt189)2个QTL位点两年检测结果加性效应值均达显著水平,且遗传贡献率较高,为主效QTL。利用分子标记遗传图谱,定位与SBA含量相关QTL,为改良大豆凝集素含量提供理论依据和技术支持。     

抑制大豆Le1基因表达的RNAi载体构建

本研究采用RT-PCR克隆大豆子粒Le1基因核心保守序列515bp片段,以植物表达载体pCAMBIA1301为基本载体,构建了抑制大豆Le1基因表达的RNAi载体。通过酶切检测及测序,证明表达载体构建正确。本研究为通过RNAi技术降低大豆中凝集素含量,改良大豆品质奠定了基础。     

膨化大豆在仔猪日粮中的应用

由于大豆中含有胰蛋白酶抑制因子、血球凝集素、脲酶等抗营养因子,使大豆内的营养成分不能被仔猪充分吸收利用,膨化大豆破坏了其中的抗营养分子,大大提高仔猪对营养的吸收利用效率,在仔猪日粮喂养中有广阔的应用空间。     

大豆功能性成分研究及育种进展

对大豆异黄酮、皂苷、磷脂、膳食纤维、寡聚糖、蛋白酶抑制剂、凝集素、露那辛等功能成分的结构、功效以及育种进展进行了简要综述,为开展大豆功能成分育种提供理论依据及参考。     

浅谈饲料中有效能的测定技术

饲料中有效能是供动物生长发育的基础.不同动物所用的有效能体系不同,目前大多数动物采用消化能、代谢能体系,但随着研究的发展与深入,发现最能反映饲料有效能的是净能体系.无论哪种体系,采用合理的测定技术准确测定饲料中的有效能值显得尤其重要,通过对饲料有效能值的准确测定可以实现动物所需能量的精确供给,减少养殖成本,使经济效益最大化.文章综述了几种有效能评价体系的测定技术.     

8种新型杀菌剂对2种玉米致病菌的室内毒力测定

选用市售8种新型杀菌剂,采用生长速率法测定对玉米小斑菌和玉米新月弯孢霉的毒力,得到16条毒力回归曲线及相应EC50,并筛选了极强毒力杀菌剂的最佳配比。结果表明:烯唑醇对玉米小斑菌和玉米新月弯孢霉均有极强抑制作用,其毒力回归曲线的相关性系数及相应EC50分别为0.883、1.885 8 E+1和0.973、1.404 8 E+1。速克灵、百菌清对玉米小斑菌也属极强毒力,春雷霉素、腈菌净、新万生、甲基托布津属较强毒力,扑海因效果较差。扑海因对玉米新月弯孢霉属极强毒力,速克灵、新万生、腈菌净属较强毒力,春雷霉素、百菌清、甲基托布津抑制作用较弱。烯唑醇和扑海因55∶及91∶的混配比例对玉米弯孢霉为增效组合,且以55∶增效最显著。速克灵与烯唑醇对玉米小斑菌未发现增效组合,百菌清与烯唑醇64∶、速克灵与百菌清28∶的混配组合为玉米小斑菌的增效组合。     

镰刀菌基因组DNA的抽提及特异片段的扩增分析

实验运用改良的SDS碱裂解法对30株镰刀菌基因组DNA进行了抽提,并对rDNA ITS区域进行了特异性扩增。结果表明:被测菌株DNA片段大于20 kb,其OD260/OD280大都在1.6~2.0之间,可见用改进的方法抽提的基因组DNA比较完整,纯度较高。实验采用对镰刀菌属有特异性的寡聚核苷酸为引物,对镰刀菌基因组rDNA基因进行扩增,该引物可以扩增出18S、28S部分片段及ITS区域,电泳检测其片段大小在1 041~1 135 bp之间,且特异性良好,为进一步进行RFLP及核苷酸序列分析奠定了基础。     

三种镰刀菌引起的板栗内腐病病原菌鉴定

为明确板栗内腐病的病原,采用组织分离法分离纯化BL-5、BL-7和BL-9共3株病原菌,通过柯赫氏法则、形态学特征及分子生物学技术对病原菌进行鉴定。结果显示,BL-5在PDA培养基上初期菌丝白色,菌落中心部位有淡红色素,后期菌落逐渐变成深红色,菌落中心可见黄色菌丝;BL-7在PDA培养基上菌落呈白色、绒毛状,分生孢子长椭圆形或梨形、颜色透明、具隔膜;BL-9在PDA培养基上菌丝呈棉絮状,初期菌落呈粉红色,随着菌落的生长,后期菌落颜色逐渐变为浅黄色或褐色,分生孢子中间粗、两头较细长,似镰刀形,弯曲或直立,具有厚垣孢子。BL-5、BL-7、BL-9的ITS序列分别与Fusarium graminearum KJ847741、Fusarium proliferatum MW686898、Fusarium equiseti KU984711的序列同源性均达99%。因此,结合形态学特征和分子生物学特征,判断引起板栗内腐病的3种镰刀菌分别为禾谷镰刀菌（Fusarium graminearum）、层出镰孢菌（Fusarium proliferatum）、木贼镰刀菌（Fusarium equiseti）,为板栗内腐病的有效防治提供了依据。     

氰戊菊酯对鲤SOD活性和MDA含量以及肝肾细胞形态的影响

通过不同质量浓度的氰戊菊酯对鲤进行21d半静置染毒,测定不同时间血清、肝脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量的变化,观察染毒后氰戊菊酯对鲤肝、肾组织结构的影响。结果表明:暴露于氰戊菊酯中的鲤,肝脏及血清中SOD活性均呈现先上升后降低的变化规律,且血清中SOD活性变化先于肝脏中的变化,暴露21d后活性极显著低于空白对照组;而MDA含量均随着暴露时间的延长显著增加,上升时间主要集中在暴露后的第3～14天。苏木精-伊红染色显示,鲤肝血窦扩张充血,肝细胞空泡变性及溶解并形成局部坏死病灶等,0.8μg/L染毒第21天、4.05μg/L和20.25μg/L染毒3d后上述损伤明显;鲤肾间质细胞增多,炎性细胞浸润,部分肾小管与基底膜分离,管壁细胞水样变性,高剂量组染毒21d还兼有肾小球萎缩,大量含铁血黄素沉着等。超显微观察发现,高剂量染毒21d肝细胞核萎缩,核内异形染色体边集化、粗面内质网水肿、松散甚至断裂,胞质中出现空泡,脂滴大量增多等。以上损伤不仅具有剂量相关性,还具有时间积累效应。     

洪灾社会经济易损性评估与区划——以渭河下游洪泛区为例

基于渭河下游洪泛区洪灾损失评估和抗洪减灾规划制定的需要,选取人口密度、GDP密度和单位面积年粮食产量作为经济易损性的评价指标,通过影响度赋值和权重叠加,经堤防减灾效益校正后,进行洪灾易损度评估与区划。结果表明,西安市市区南部由于经济相对发达、人口密度较大,且境内南山支流堤防较弱,因而属于洪灾易损度高风险区;西安市市区中部和北部地区、咸阳市市区北部以及临潼区中部地区,由于区域经济发达,且临近的渭河干流部分堤防设防标准较低,因而属于较高风险区;咸阳市市区中部和南部、高陵县、临潼县北部和南部、渭南市市区以及华县西部均属于中等风险区;大荔县东部、华县东部和潼关县由于经济相对欠发达、人口密度相对较低,虽然堤防减洪效益一般,但仍属于低风险区。最后,提出在目前水沙条件没有得到有效控制之前,加强堤防建设、提高堤防减洪效益是降低洪灾社会经济易损度、减少灾害损失的较为有效的途径。     

溴氰菊酯分析法研究进展

由于高效低毒、对光稳定等优点,溴氰菊酯广泛应用于各类害虫、寄生虫防治中。在溴氰菊酯的研究、生产、混配及使用过程中,必须对其异构体、含量、残留量进行分析。笔者综述了近年来溴氰菊酯的前处理及分析方法,并对新的分析方法进行评价及展望。     

三种沙拐枣种子休眠原因研究初报

对三种沙拐枣种子的休眠原因进行了分析。它们的种子休眠率均高于９５％,休眠程度很深。种子活力高达９３％左右,它不是种子发芽率低的原因。种子（或果实）在室温下清水浸泡２４ｈ后均能吸水膨胀,其形态构造有利于吸水和气体（Ｏ２）交换,本身不存在环境休眠。通过生物鉴定发现,引起种子休眠的重要原因是果皮和种子内含有水溶性萌发抑制物。     

灭菌对糖化酶生产工艺的影响研究

[目的]了解灭菌对糖化酶生产的影响。[方法]针对糖化酶的生产工艺确定灭菌方法及操作要点。[结果]空消压力0.10～0.12MPa、时间1 h;实消压力0.10～0.12 MPa、温度121～123℃、时间45 min;空气加热至约50℃,相对湿度≤60%,再进入总过滤器。[结论]通过空消、实消、空气除菌后,控制通风量和压力从而控制泡沫,可保障糖化酶正常生产。     

酶联免疫吸附法在饲料安全检测中的应用

酶联免疫吸附法(Enzyme-linkend immunsorbent assay,ELISA)是指固相吸附技术和免疫酶技术相结合的一种方法,是一项先进的免疫化学测定技术。因其具有特异性高、敏感性强、结果易于检测等特点,常用于对饲料中某些违禁药品、添加剂及有害微生物的筛检和毒素的检测,是饲料安全检测中的一项新技术。