多重PCR同时检测口蹄疫病毒、猪水疱病病毒和水疱性口炎病毒

根据基因库中的口蹄疫病毒（FM—DV）,猪水疱病病毒（SVDV）和水疱性口炎病毒（VSV）各基因序列,设计了与FMDV,SVDV和VSV互补的3对特异性引物,对样品中的cDNA模板进行了多重PCR扩增及反应条件的优化,结果同时得到与设计相符合的3条特异性条带,分别为189bp,125bp和300bp。用这3对引物对病毒样品cDNA模板进行多次扩增,均能稳定得到与设计相符合的3条特异性条带。本试验能特异、敏感、快速地鉴定FMDV,SVDV和VSV。     

浅谈猪口蹄疫、水疱病、水疱性口炎的鉴别

随着生猪的出售、购进、进入流通领域的比例逐渐增多,生猪的发病机率也随之增多,生猪的水疱性口炎病时有发生,该病在临床症状上与口蹄疫、猪水疱病相似,尤其是单纯性猪口蹄疫与猪水疱病的流行情况和症状也几乎完全相同,难以区别.     

口蹄疫病毒和水泡性口炎病毒二重RT-LAMP鉴别检测方法的建立

LAMP技术是一种快速新型的核酸检测技术,该技术利用4条引物在恒温下扩增目的 DNA,特异性好敏感性高。本试验旨在建立一种能同时鉴别诊断FMDV和VSV的二重RT-LAMP检测方法。根据口蹄疫病毒(FMDV)3D基因和水泡性口炎病毒(VSV)N基因的保守序列,设计了2套特异性引物,在每套引物的内引物中插入酶切位置EcoRⅠ,对反应条件进行了优化,建立了恒温快速的检测方法。结果显示:该方法特异性好,能检测到口蹄疫病毒的A,O,Asia1亚型和水泡性口炎的NJ和IND亚型,并与其他对照牛病原体不发生交叉反应;敏感性高,最低能够检测个100个FMDV病毒RNA和100个VSV病毒RNA;干扰性小,能同时检测两个模板的不同浓度组合。本试验建立的口蹄疫和水泡性口炎二重RT-LAMP方法具有简便、快速、特异、敏感等优点,可用于FMDV和VSV的临床检测和流行病学调查。     

应用RT-PCR方法快速检测水泡性口炎病毒

针对水泡性口炎病毒(VSV)的两种血清型设计了2对引物，建立RT-PCR方法，用于检测VSV。VSV接种细胞出现明显的细胞病变，经RT-PCR检测为阳性，而检测口蹄疫、猪水泡病均为阴性，说明引物具有较好的特异性。     

猪口蹄疫和水泡病病毒免疫鉴别诊断方法的比较研究

通过单克隆抗体斑点酶联免疫吸附试验（ＭｃＡｂＤｏｔＥＬＩＳＡ）和反向间接血凝试验（ＲＩＨＡ）分别对猪口蹄疫病毒（ＦＭＤＶ）和水泡病病毒（ＳＶＤＶ）检测比较。试验表明,ＭｃＡｂＤｏｔＥＬＩＳＡ特异性强,快速简便,比ＲＩＨＡ更为敏感、稳定、直观。本研究在猪口蹄疫和水泡病单抗联合诊断药盒的研制方面是一个有益的尝试。     

猪、牛类似水疱性口炎症状的疾病诊断

1猪体表有水疱、痘疹的猪病主要有猪水疱性口炎、口蹄疫、猪水疱疹、猪水疱病等,遇这种情况一定要慎重处理。     

应用IIF筛选抗口蹄疫和抗猪水泡病病毒单抗的研究

应用间接免疫荧光方法（ⅡＦ）进行筛选，获得３株稳定分泌特异性抗口蹄疫病毒（ＦＭＤＶ）单抗的杂交瘤细胞的２株稳定分泌特异性抗猪水泡病毒（ＳＶＤＶ）单抗的杂交瘤细胞。ＩＩＦ重复测试阳性和阴性杂交瘤细胞上清，结果完全相符。ＩＩＦ特异性试验表明，３株抗ＦＭＤＶ单抗只与ＦＭＤＶ反应，而不与相关的ＳＶＤＶ和ＰＤ１５细胞反应，反之２株抗ＳＶＤＶ单抗只与ＳＶＤＶ反应，而不与ＦＭＤＶ和ＰＤ１５细胞反应。实验证明，Ｉ     

印第安纳型水疱性口炎病毒一步法RT-PCR检测方法的建立

根据印第安纳型水疱性口炎病毒（VSV）L蛋白的序列，设计了一套特异性引物，建立了检测VSV核酸的一步法RT-PCR方法，并用该法检测了不同的组织样品。结果显示，人工感染VSV小鼠组织检测为阳性，而口蹄疫、猪水疱病、猪瘟、猪生殖与呼吸综合征等病料检测均为阴性，表明该方法具有较好的特异性。     

菌毒净对猪O型口蹄疫病毒和猪水泡病病毒的杀灭效果

用试管中和灭毒,实验动物验证的方法测定菌毒净消毒剂对猪Ｏ型口蹄病毒和猪水泡病病毒的杀灭效果。试验结果表明,１：１００００的菌毒净消毒剂可完全杀灭猪Ｏ型口蹄疫病毒,１：８０００的菌毒净可完全杀灭猪水泡病病毒。     

如何区分口蹄疫与水疱性口炎

1从病源来分 口蹄疫属于微核糖核酸病毒科口蹄疫病毒属，而水疱性口炎属于弹状病毒科水疱性病毒属。     

4种动物虫媒病病毒多重RT-PCR检测方法的建立

分别设计和合成4对特异性引物,通过对反应条件的优化,初步建立了鉴别蓝舌病病毒(BTV)、鹿流行性出血病病毒(EHDV)、水疱性口炎病毒(VSV)和赤羽病病毒(AKV)的多重RT-PCR检测方法,并对其特异性和敏感性进行了检测。结果表明,所设计的4对引物可对同一样品中的VSV、BTV、EHDV和AKV进行特异性扩增,所扩增的目的片段的长度分别为301、351、537、250bp。建立的四重RT-PCR检测方法能够检测出10-7稀释的细胞培养病毒液,4种病毒之间没有发生交叉反应,说明该检测方法特异性强,敏感性较高。所建立的多重RT-PCR方法可用于上述4种动物虫媒病病毒的快速鉴别诊断,在动物检疫、临床诊断和流行病学调查方面具有较好的应用前景。     

O型口蹄疫病毒不同基因型联合RT-PCR检测方法的建立

在比较国内外口蹄疫病毒(FMDV)流行毒株序列的基础上，设计了检测FMDV的PCR引物及O型FMDV不同基因型即中国型(Cathay)与乏亚株(PanAsia)的二联PCR引物。在确定单项RT-PCR反应条件的基础上，建立、优化了二联RT-PCR反应体系和条件，并进行了相关病毒检测试验。结果表明，建立的检测O型FMDV不同基因型中国型与泛亚株的二联RT-PCR，有效、特异且敏感，为FMD的诊断、流行病学调查及疫苗应用奠定了基础。     

多重RT-PCR检测猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒

为了检测、区分猪传染性胃肠炎(TGE)和猪流行性腹泻(PED)，建立了同时检测这2种疾病痛原体的多重PCR方法。参考GenBank登录的TGEV和PEDV纤突蛋白S基因序列，经DNAsis 2．0比较分析。分别筛选出TGEV、PEDVS基因相对保守区。以TGEV TH-98株(GenBank登陆号为AF494337)和PEDV CV777株(GenBank登陆号为NC003436)为参考模板，利用软件Primer3设计合成了2对寡核苷酸引物，以ST细胞培养的TGEV和PEDV毒株核酸为模板。利用所设计的2对引物进行多重RT-PCR扩增，结果同时得到与试验设计相符的499bp(TGEV)和199bp(PEDV)的扩增条带。而对其他3种猪病原的扩增结果均为阴性。敏感性试验结果表明。建立的多重RT-PCR方法可检测出10pgTGEV RNA和100pg PEDV RNA。     

马流感病毒多重RT-PCR检测方法的建立

根据马流感病毒的M基因和HA基因的保守序列,设计了两对引物,MF和MR为通用引物,可以检测出H3N8和H7N7亚型EIV,目的片段227bp,HF和HR为H3N8亚型特异性引物,目的片段595bp。利用这两对引物,通过对多重RT-PCR扩增条件的优化,建立了快速检测鉴别H3N8亚型EIV的多重RT-PCR技术。特异性和敏感性试验结果表明,该技术可以用于EIV的快速诊断和亚型鉴定。     

3种致猪腹泻病毒的多重RT-PCR检测

试验建立了用于检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)与猪轮状病毒(PRV)的三重RT-PCR方法,以调查猪群中腹泻病毒感染情况.通过该方法对采自广东省规模化猪场的95份临床疑似病毒性腹泻病料进行了检测,结果表明,猪流行性性腹泻病毒阳性率为33.7%,猪传染性胃肠炎病毒阳性率为4.2%,猪轮状病毒阳性率为20%;猪流行性性腹泻病毒和猪轮状病毒混合感染率为8.4%,猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒混合感染率为2.1%.     

禽流感病毒H5和H9亚型多重RT-PCR快速检测方法的建立

根据禽流感病毒（AIV）核蛋白（NP）和血凝素（HA）基因序列，设计1对用来鉴定A型AIV特异性引物（NP—F,NP—R）和2对用来鉴定AIV H5和H9不同亚型特异性引物（H5-F，H5-R；H9-F，H9-R），建立了多重RT—PCR快速检测方法。该方法能同时从一种病毒扩增出2条核酸带。分别为型（NP：330bp）和亚型（H5A：550bp，或H9A：490bp）。通过对105份样品进行检测。并与病毒分离及琼脂扩散（AGP）血清学方法作平行对比，两者之间符合率达100％；试验灵敏度为10^2ELD50。结果表明，建立的多重RT—PCR为检测H5、H9亚型AIV提供了一种快速、经济、易行的技术。     

猪水疱病自杀性DNA疫苗的初步研究

利用RT—PCR技术，用保真酶扩增获得猪水疱病病毒外壳蛋白1BCD基因，克隆于DNA复制子载体pSCAl中，获得重组质粒pSCA／1BCD。将重组质粒转染BHK-21细胞，RT-PCR法和间接免疫荧光法检测显示，猪水疱病病毒外壳蛋白基因在转染细胞中表达。豚鼠免疫试验表明，自杀性DNA疫苗pSCA／1BCD可诱导SVDV特异性抗体和T淋巴细胞增殖。     

牛副流感病毒3型3种基因型多重RT-PCR检测方法的建立

为建立检测牛副流感病毒3型（bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3）3种基因型的多重RT-PCR方法,根据GenBank上发表的BPIV3 3种基因型病毒株的HN基因序列设计特异性引物,优化反应体系建立多重RT-PCR方法。结果显示,方法可同时扩增出BPIV3 A型150 bp、B型253 bp和C型342 bp的特异性片段,与牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）、牛呼吸道合胞体病毒（BRSV）、牛病毒性腹泻病毒（BVDV）、小反刍兽疫病毒（PPRV）、牛支原体、牛布鲁氏菌、羊布鲁氏菌、牛源多杀性巴氏杆菌A型和B型均无交叉反应,A、B、C基因型BPIV3最低阳性质粒检测量分别为0.89×10⁴、0.92×10⁴和1.53×10⁴拷贝/μL。本试验建立的多重RT-PCR检测方法操作方便、特异性强,应用于临床样本的检测,可快速检测BPIV3 3种基因型。