解淀粉芽孢杆菌HZ-6-3的筛选鉴定及其防治番茄灰霉病效果的评价

采用平板对峙法,从银杏组织分离的内生细菌菌株中筛选对灰葡萄孢菌抑菌活性较好的菌株,其中菌株HZ-6-3的抑制作用最强,抑制率为79.06%。通过菌落形态观察、生理生化特征、16S rRNA基因序列和gyrA基因分析将菌株HZ-6-3鉴定为解淀粉芽孢杆菌。抑菌谱测定结果显示,该菌株对其他8种植物病原真菌均具有不同程度的拮抗作用。该菌株可产生蛋白酶、果胶酶、β-1,3-葡聚糖酶和淀粉酶;能够显著抑制病原菌的菌丝生长,使菌丝生长扭曲,细胞膨大、形成串状泡囊结构等畸变。利用盆栽试验测定了该菌株对番茄灰霉病的防控效果,结果显示1×10⁸ CFU·mL^-1的预防效果和治疗效果最高,可达81.12%和70.45%。上述结果显示菌株HZ-6-3具有作为生物制剂的潜能。     

烟管菌M-1菌株对油菜核盘菌的生防作用研究

以自主分离的烟管菌(Bjerkandera adusta)M-1为拮抗菌株,首次探究其对油菜核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)的抑制作用,优化其液体培养条件以提升代谢液抑菌效果,为油菜菌核病的生物防治提供新思路。通过菌饼对峙抑菌试验和液体培养液抑菌试验测定菌株M-1抑菌效果,并在显微镜下观察其对核盘菌的重寄生作用;以不同温度水浴处理该菌株代谢液探究其热稳定性。采用单因素试验和响应曲面法确定其最适液体培养条件。在此基础上,通过温室盆栽试验调查菌株M-1对油菜菌核病的防病效果。结果表明,菌饼对峙抑菌试验中菌株M-1对油菜核盘菌的抑菌率达到67.9%,显著高于多菌灵(22.7%)和甲基托布津(31.4%),而液体培养液抑菌试验中其无菌代谢液对油菜核盘菌的抑菌率为51.8%,分别是多菌灵处理和甲基托布津处理的1.3和2.2倍。显微观察发现该菌株对油菜核盘菌具有明显的拮抗作用,在拮抗区两者菌丝形态均发生变化,扫描电镜下则清晰地观察到菌株M-1菌丝直接穿插、刺透油菜核盘菌菌丝,使后者菌丝膨大、变形甚至裂解,表现出强烈的重寄生作用。经过80 ℃甚至100 ℃水浴后,菌株M-1代谢液抑菌率仍在35%以上,显示出一定的热稳定性。对该菌株液体培养条件优化后确定了最佳条件组合:C/N为7.5,pH为4.7,装瓶量为33%,时间为22 d,转速为180 r·min^-1,温度为32 ℃,优化后其代谢液抑菌率能够提升到80.9%。温室盆栽试验调查发现其对油菜菌核病的防病效果达到71.4%,高于多菌灵处理(53.2%)。烟管菌M-1作为生防真菌对油菜核盘菌具有很好的抑制作用,条件优化后进一步提升了生防效果,在油菜菌核病的生物防治中具有广阔应用前景。     

3株生防菌对猕猴桃软腐病的作用

为探究生防菌对猕猴桃软腐病的作用,选用前期获得的3株生防菌进行室内抑菌试验、猕猴桃软腐病接种和自然发病防治以及相关表达机制试验。试验结果表明,菌株P2-1,PL7,NL4对猕猴桃软腐病菌丝生长的抑制率分别为83.49%、74.82%和49.33%,菌株P2-1的抑制效果最好,PL7次之,NL4最差;接种试验中菌株P2-1,PL7,NL4对猕猴桃软腐病均具有抑制作用,但以菌株P2-1的抑制效果最好,PL7次之,NL4最差;3株生防菌均能显著降低猕猴桃软腐病自然发病率,其中以菌株P2-1处理的发病率最低,且这3株生防菌处理均对猕猴桃品质无影响;3株生防菌处理猕猴桃果实,其基因PR1、PR5和SOD的表达显著上调。研究结果为菌株P2-1,PL7,NL4开发成防治猕猴桃软腐病的生物制剂提供理论依据。     

卤水中耐酸耐盐产细菌素乳酸菌的筛选

为筛选出适合作为微生物饲料添加剂且有抑菌活性的乳酸菌，以贵州省黔东南苗族侗族自治州农家生产卤水为试验对象，筛选耐酸、耐盐且有抑菌活性的乳酸菌。采用琼脂扩散法，对其生长曲线、产酸能力、耐酸能力和耐盐能力进行研究，经过观察其生长特性、生理生化鉴定、16S r DNA测序分析对菌种进行鉴定，并通过排酸试验、排过氧化氢试验和蛋白酶敏感试验对其抑菌物质种类进行初步分析。结果显示：从卤水中初步分离出的155株菌，筛选得到1株MMB-09，对金黄色葡萄球菌、腐败希瓦氏菌、大肠杆菌以及蜡样芽孢杆菌有良好的抑菌效果，其中对腐败希瓦氏菌的抑菌效果最显著，抑菌圈直径达（14.3±0.42）mm；该菌株在8 h时OD600达到2.0以上，在12 h进入生长稳定期；有较好的产酸能力，8 h时其pH就已经降至4.2；具有较好的耐酸性和耐盐性，在pH为3和盐含量80 g/L时仍生长良好。对菌株进行形态学特征、生理生化鉴定和16S r DNA测序分析鉴定其为植物乳杆菌。该菌株在pH为6时还保留50.15%的抑菌活性，对过氧化氢酶不敏感以及蛋白酶处理后抑菌效果下降明显（P <0.05），表明其抑菌成分中包含蛋白类...     

牛瘤胃乳酸菌的分离与鉴定

为分离筛选用于牛活菌制剂的乳酸菌菌株,本试验采用API 50CHL对从牛瘤胃中分离的60株乳酸菌进行生化鉴定,对鉴定出的菌株进行耐酸、耐碱、耐氧、生长温度、耐药和抑菌性测定。结果显示,经生化鉴定出的3株乳酸菌分别为嗜酸乳杆菌(L.acidophilus)、发酵乳杆菌(L.fermentum)和乳明串珠菌(L.holzapfelii),分别命名为L1、L2和L3。其中,L1耐酸性最强,L2耐碱性最强,L1在37~40℃均生长良好且兼性厌氧;L1、L2、L3耐药率分别为80%、67%、53%;3株乳酸菌对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有不同程度的抑制作用;L1抑菌效果最好,抑菌直径为18.3mm和16.4mm。结果表明,L1、L2可作为抗性乳酸菌活菌制剂的候选菌株。     

稗草生防菌BC-1的分离及生物学特性研究

为了能够获得低毒且高效的生物除草剂,本研究以苹果园感病稗草为材料,从中分离得到菌株BC-1,形态学观察和16S rDNA序列比对分析后,确认该菌株为露湿漆斑菌(Myrothecium roridum)。菌株BC-1最适生长培养基为PDA和PSA培养基,最适生长温度为25~28 ℃。最适生长pH值为6~7;光照强度对菌丝生长有一定抑制作用;菌丝生长最佳碳源为麦芽糖,最佳氮源为硝酸铵。室内生防试验表明,该菌株分生孢子悬浮液对稗草生防效果最佳,接菌21 d后稗草发病率为100%,鲜重防效达93.7%;对马唐、狗尾草、播娘蒿和反枝苋的生防效果相对较差,鲜重抑制率仅为33.7%,28.3%,-3.2%,16.8%。作物安全性试验表明,该菌株的分生孢子液对玉米、小麦、水稻等作物安全。综上所述,菌株BC-1有开发成商品化生物除草剂的潜力。     

生防芽孢杆菌对芒果镰刀菌的抑菌效果评价

为探索芒果镰刀菌病害生物防治的有效途径,开展了4株生防芽孢杆菌对芒果上镰刀菌的平板对峙和分生孢子萌发等室内生物测定实验。结果表明,供试生防菌发酵液对芒果镰刀菌菌丝生长及分生孢子萌发有明显的抑制作用,其中菌株FCK抑菌活性最强,最高达66.10%,抑菌带达0.85 cM,菌株5a-9、6c-5次之,菌株6a-3抑菌率最弱;菌株FCK对分生孢子萌发的最高抑菌率达56.80%,菌株6a-3次之,菌株6c-5最低;生防菌的发酵灭菌液热稳定性差,高温灭菌后抑菌活性显著下降,对部分镰刀菌分生孢子萌发起到一定的促生作用;发酵灭菌液对分生孢子萌发的促生作用强于发酵滤液。本研究表明,供试芽孢杆菌可以作为芒果镰刀菌病害的生防材料,具有良好的应用前景。     

鸭茅内生木霉菌株TD-MM鉴定及其特性研究

本研究利用组织分离法和对峙培养法,从鸭茅(Dactylis glomerata L.)叶片中分离筛选到1株具有较强抑菌活性的内生菌株TD-MM。基于形态学特征和基因序列分析,将菌株TD-MM鉴定为哈茨木霉(Trichoderma harzianum),初步探究其抑菌机理和防治效果,并测定菌株TD-MM营养生长和产孢的条件。结果表明：鸭茅内生木霉菌株TD-MM对6株植物病原菌均具有较强的抑菌作用;该菌株推测为通过生长空间竞争和重寄生作用抑制植物病原真菌,其对姜花、蚕豆和辣椒根腐病的防治效果较好,且对植株的生长有显著的促进作用;适宜该菌株生长和产孢的培养基为虎红琼脂培养基和马铃薯葡萄糖琼脂培养基,最适温度为30℃,最适pH值为5,在12 h光暗交替条件下菌丝生长最快且有利于产孢;孢子致死温度为60℃,10 min。本研究结果可为植物根腐病害生物菌剂的研制和开发提供菌株资源和数据参考。     

罗汉松内生真菌的抑菌活性研究

为了研究药用植物内生真菌的次生代谢产物是否具有抑菌活性,以96株罗汉松内生真菌为研究材料,将菌丝及其培养液经氯仿-甲醇抽提后,采用杯碟法测定了全部菌株的抑菌活性。罗汉松内生真菌中49%的菌株具有抑菌作用,其中菌株LHS18、LHS42、LHS67、LHS92和LHS93抽提物经100倍稀释后对金黄色葡萄球菌仍有强的抑菌作用,菌株LHS30抽提物的100倍稀释溶液对大肠杆菌的生长有强烈的抑制作用。对抑菌活性较强的6株菌根据其ITS序列相似性进行了分子鉴定。菌株LHS18和LHS42鉴定为烟曲霉（Aspergillus fumigatus）,LHS92为四孢脉孢菌（Neurospora tetrasperma）,LHS30为丝枝霉（Aphanocladium sp.）,LHS67为拟茎点霉（Phomopsis liquidambari）,LHS93未能鉴定出种属。研究结果提示,罗汉松内生真菌中49%菌株具有抑菌活性,其中6株菌对动物和人类的病原菌有强列的抑制作用,是挖掘高效抑菌物质的重要资源。     

马唐生防菌厚垣孢镰刀菌ZC201301的生物学特性研究

厚垣孢镰刀菌ZC201301对杂草马唐具有良好的生物防效,本研究通过单次单因子法对菌株ZC201301的基本生物学特性进行了进一步研究.结果表明,菌株ZC201301最适生长培养基为PDA和CAJ培养基,最适生长温度为25~30℃,最适生长pH值为6~8;菌株ZC201301在多种培养基上均能产孢,最适产孢培养基为马唐汁液培养基,日光灯照射对菌丝生长影响不显著,但是对产孢有一定抑制作用;菌丝生长最佳碳源为葡萄糖,最佳氮源为硝酸铵;菌落生长需要充足氧气,气/液小于1:1时菌丝生长受到抑制.湿度是影响ZC201301发挥生防效果的重要因子,环境湿度小于60%时生防效果下降显著.以上结果说明,该菌适宜培养,这对于其生防菌剂的制备及在田间条件下存活有重要意义.     

桑树内生拮抗细菌Lu10-1对家蚕白僵病的防治效果及抑菌作用

为了开发新型微生物农药用于家蚕病害防治,研究了桑树内生拮抗细菌洋葱伯克霍尔德氏菌(Burkholde-ria cepacia)Lu10-1菌株对家蚕白僵病的防治与抑菌效果。防治试验表明,Lu10-1菌株发酵上清液对家蚕白僵病的预防及治疗有效率分别达到55.88%、34.00%,且对家蚕生理及茧质无不良影响。体外抑菌试验表明,Lu10-1菌株的抗菌粗提物对白僵菌有较强的拮抗作用,抑菌圈直径为17.00 mm;抗菌粗提物还能够抑制白僵菌的生长及孢子萌发,当其作用于白僵菌孢子后,孢子出现聚集、内容物分布不均、变形、空腔及胞壁断裂等异常,作用于菌丝后,菌丝出现变粗、扭曲、皱褶、膨大、内容物流出、消融等现象;抑菌率随着抗菌粗提物浓度的增加而不断增大。初步认为Lu10-1菌株可以用于家蚕白僵病的防治。     

牛瘤胃乳酸菌的分离与鉴定

为分离筛选用于牛活菌制剂的乳酸菌菌株,试验采用API 50CHL对从牛瘤胃中分离的60株乳酸菌进行生化鉴定,对鉴定出的菌株进行耐酸耐碱、生长温度、耐氧、耐药和抑菌性测定。结果显示,经生化鉴定出的3株菌分别为嗜酸乳杆菌（L.acidophilus）、发酵乳杆菌（L.fermentum）和乳明串珠菌（L.holzapfelii）,分别命名为L1、L2和L3。其中,L1耐酸性最强,L2耐碱性最强,L1在37～40 ℃之间均生长良好且兼性厌氧;L1、L2、L3耐药率为60%～100%;3株乳酸菌对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有不同程度的抑制作用,其中L1抑菌效果最好,抑菌圈直径分别为18.30和16.40 mm。提示,L1、L2可作为抗性乳酸菌活菌制剂的候选菌株。     

菠萝心腐病拮抗菌的分离、筛选及鉴定

菠萝心腐病是危害菠萝生产的重要病害之一,近年来发生较严重,严重影响菠萝的产量和品质。本研究从海南乐东菠萝园、香蕉园等地的土壤中分离出224株细菌,其中分别属于枯草芽孢杆菌和链霉菌的HL2和HL3菌株对菠萝心腐病菌烟草疫霉(Phytophthora nicotianae)具有显著抑制效果。抑菌试验结果表明HL2和HL3对菠萝心腐病病菌菌丝生长的抑制率分别为71.6%、53.3%,对病菌产孢子囊的抑制率分别为83.3%、61.7%,拮抗菌培养过程中产生的挥发性抑菌物质能明显抑制病原菌菌丝的生长。     

醉鱼草内生细菌ZJ1的抑菌作用及其脂肽类抑菌代谢产物鉴定

为明确醉鱼草(Buddleja lindleyana Fortune)内生细菌ZJ1的抑菌作用及其抑菌代谢物质组成,本研究测定了Z J1菌株及其发酵液的抑菌作用,分离、纯化及鉴定了Z J1菌株的抗菌物质,还观察和测定了Z J1菌株代谢物处理后的Botrytis cinerea菌丝生长状态和细胞膜通透性.结果表明:ZJ1...     

藏鸡源食窦魏斯氏菌的抑菌特性研究

为了解藏鸡源益生菌的抑菌特性,选用10只体质健康的1月龄藏鸡作为益生菌的分离来源。以肠炎沙门菌(Salmonella enterica)为指示病原菌,通过琼脂扩散试验对分离菌株进行抑菌特性判定,共筛选到6株具有抑制肠炎沙门菌生长繁殖的菌株,抑菌圈直径均在8~28 mm之间,其中从小肠黏膜中分离到的食窦魏斯氏菌(Weissella cibaria)的抑菌圈直径高达276 mm,明显高于其他菌株和常用抗生素。将该菌株命名为WT1,并对WT1的抑菌特性和生物学活性进行深入研究。结果显示:WT1所产细菌素作用肠炎沙门菌8 h后,肠炎沙门菌大量死亡;基因序列分析显示,WT1益生基因entA;WT1具有良好的热稳定性和耐酸性。研究表明,藏鸡源食窦魏斯氏菌具有良好的抑菌特性和生物学活性,可以用于家禽肠炎沙门菌感染的治疗,在一定程度上缓解抗生素的负面影响。     

1株鲤鱼源植物乳杆菌的分离鉴定及其生物学特性分析

【目的】筛选具有优良益生特性的鲤源乳酸菌作为水产养殖用微生态制剂候选菌株。【方法】以鲤鱼肠道内容物及黏膜为菌株的分离来源，采用MRS培养基进行菌株分离纯化，经16S rRNA测序鉴定后，对分离菌株生长特性、产酸能力、耐酸、耐胆盐、抑菌特性、药物敏感性及安全性等生物学特性进行分析。【结果】试验成功分离到1株植物乳杆菌，将其命名为YY001，该分离株在MRS培养基上菌落形态为圆形、表面光滑、边缘整齐、呈乳白色，革兰氏染色为阳性、无芽孢、两端钝圆的短小杆菌；4 h后进入对数期生长，12 h后生长达到稳定期；具有较强的产酸能力，产酸曲线显示，0~12 h pH迅速下降，培养16 h的菌液pH达3.8；在pH 3.0和0.3%胆盐的条件下具有一定耐受性；该分离株对水产常见致病菌柱状黄杆菌、维气氏单胞菌和嗜水气单胞菌均具抑菌效果，且对柱状黄杆菌的抑菌效果最显著，抑菌圈直径达34.19 mm；药物敏感性试验结果显示，分离株对卡那霉素、链霉素和万古霉素耐药；每天一次连续1周灌胃10⁸CFU分离菌株对小鼠无毒害作用。【结论】本研究分离到的菌株YY001具有优良的生物学特性，可作为水产养殖用微生态制剂候选菌株，为后续制备鲤鱼用微生态制剂奠定基础。     

拮抗镰刀菌香蕉枯萎病木霉菌株PZ6的分离鉴定及生物学特性研究

PZ6 菌株是一株分离于香蕉根际土壤的具有生防潜力的木霉菌株,通过rDNA-ITS鉴定为棘孢木霉（Trichoderma asperellum）。采用室内菌丝生长、产孢测定方法研究了PZ6 菌株生物学特性,为进一步研究菌株的发酵培养及田间应用技术提供理论依据。结果表明: PZ6 菌株在PDA、PSA、OMA和Czapek上均能生长,但在PDA和OMA培养基上菌丝生长和产孢最佳,培养3 d菌落直径均达到76.67 mm,产孢量对数值达到7.63。温度对菌丝生长和孢子产生影响显著,在15～37 ℃之间均能生长,在25～30 ℃之间菌丝生长较好,以30 ℃时菌丝生长最快,培养3 d 后菌落直径达到89.00 mm,并且产孢量也显著高于其他培养温度;光照处理对菌丝生长影响明显,持续光照可显著促进产孢。葡萄糖、果糖、乳糖、麦芽糖和蔗糖都能够较好促进菌丝生长,葡萄糖和果糖是PZ6菌株产孢的最佳碳源;硫酸盐与硝酸盐是PZ6菌丝生长和产孢的最佳氮源;菌株在pH值2～12的范围均可以生长产孢,但最适宜的生长产孢条件为pH 值5～9。     

一株固态发酵豆粕的枯草芽孢杆菌的分离与应用

本研究筛选获得一株产纤维素酶的耐高温枯草芽孢杆菌FJAT-5561,分析其产酶和抑菌特性,应用于豆粕固体发酵。枯草芽孢杆菌FJAT-5561在45℃、pH为8时的酶活性达0.90 U/mL。抑菌试验结果显示：该菌对青霉具有抑制效果,电镜观察显示FJAT-5561菌株的发酵上清液使青霉菌丝变形和萎缩,抑制菌丝生长。豆粕发酵试验结果表明,添加枯草芽孢杆菌FJAT-5561可降低豆粕中难降解的粗纤维含量,提升豆粕中的粗蛋白质含量。发酵后的豆粕中未检出黄曲霉素、赭曲霉毒、玉米赤霉烯酮和脱氧雪腐镶刀菌烯醇等真菌毒素,也未检出黄曲霉。     

致半滑舌鳎烂尾病的创伤弧菌的分离鉴定及中草药对其抑菌效果研究

为检测秦皇岛市昌黎县某渔场养殖的致半滑舌鳎烂尾病的致病原,检测分离菌对抗生素的敏感性以及中草药对其的体外抑菌效果,本研究从患病鱼尾部肌肉分离纯化到一株细菌,采用TCBS鉴定培养基培养,结果可见绿色菌落,边缘整齐,表面光滑,轻微凸起;经革兰氏染色后镜检可见,分离菌为革兰氏阴性菌,两端钝圆,形状似月牙;经ATB全自动微生物鉴定仪判定,分离菌为创伤弧菌,符合率为99%;通过16S rDNA序列分析进一步鉴定分离菌为创伤弧菌,命名为CLVV-1。采用动物回归试验检测分离菌株的致病性,结果显示CLVV-1菌株可致半滑舌鳎出现烂尾病征;通过KB纸片法检测分离菌株对14种抗生素的药物敏感性,结果显示,CLVV-1菌株对氨苄西林等6种抗生素高度敏感,对阿米卡星等共4种抗生素中介,对土霉素等共4种抗生素耐药;经牛津杯法和二倍稀释法检测15味中草药水煎提取液对分离菌株的体外抑菌效果,结果显示,石榴皮等8味中草药液对CLVV-1菌株具有抑菌效果,而白头翁等7味中草药液对CLVV-1菌株无抑菌效果。本研究为创伤弧菌感染所致的半滑舌鳎烂尾病的防治提供参考,并首次为相关中草药制剂防治该菌的应用奠定基础。     

蓝狐源约氏乳杆菌菌株ZJBF004分离鉴定与体外益生潜能的评价

为获得犬科动物源乳酸菌并对其益生潜能进行评价,本研究通过测定生长曲线、产酸能力、对低pH和高胆盐环境的耐受性、在体外模拟胃肠道溶液中的存活能力、抑菌能力、抗生素抗性、对蓝狐小肠上皮原代细胞的黏附能力及抗氧化性评价了菌株ZJBF004的益生特性。结果表明:利用固体乳酸细菌培养基从蓝狐的肠道内容物中分离到1株优势乳酸菌,将其命名为菌株ZJBF004,经菌落菌体形态、生理生化特性和16S rRNA基因序列分析鉴定其为约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii)。菌株ZJBF004产酸能力较强且在37℃培养时能迅速进入对数生长期;在pH=5的培养基中耐受6 h时仍能保持较好的生长情况,在胆盐浓度为3 g/L的条件下至少可耐受6 h,且存活率高于70%,在人工模拟胃液和肠液中耐受3 h时存活率高于90%;对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌具有良好的抑菌效果;对蓝狐小肠上皮原代细胞的黏附能力为(18.67±3.12)个/细胞;1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除率为28.50%,表明菌株ZJBF004具有一定的抗氧化活性。由此可见,新分离的蓝狐源约氏乳杆菌菌株ZJBF004具有优良的体外益生性能,可作为潜在犬科动物用益生菌进一步研究。