肠外致病性大肠杆菌的研究进展

肠外致病性大肠杆菌(Extraintestinal pathogenic Escherichia coli, ExPEC)是一类特定定植于宿主肠道外其它组织,并严重致病的一类新的大肠杆菌菌群。本文对肠外致病性大肠杆菌的流行、危害及防治进行了综述。     

肠外致病性大肠杆菌感染对PAVECs细胞死亡相关因子表达的影响

本试验旨在研究猪源肠外致病性大肠杆菌（ExPEC）对猪血管内皮细胞（PAVECs）的损伤机制。采用ExPEC PPECC042野生株（WT）感染PAVECs 4 h,观察细胞形态变化,随后检测炎症、程序性坏死和焦亡信号通路相关基因的mRNA表达情况。结果表明：ExPEC PPECC042感染PAVECs导致细胞发生皱缩,甚至死亡;ExPEC PPECC042感染PAVECs后,炎症相关基因（IL-8、IL-6、IL-1β）的mRNA表达量均上调（P<0.01或P<0.05）;程序性坏死信号通路相关基因（RIP1、MLKL）的mRNA表达量上调（P<0.05）;焦亡信号通路相关基因（IL-18、GSDMD、NLRP3）的mRNA表达量均上调（P<0.01或P<0.05）。上述结果表明,ExPEC PPECC042可能通过激活炎症、程序性坏死和焦亡信号通路导致PAVECs发生损伤。     

肠致病性大肠杆菌DPO-PCR快速检测方法的建立

为建立肠致病性大肠杆菌(EPEC)的快速检测方法,本研究以EPEC bfp A基因为靶基因设计了一对双启动寡核苷酸引物(DPO),建立了EPEC的DPO-PCR快速检测方法。结果显示,退火温度在45℃~65℃范围内均能够高效地扩增出目的基因,表明DPO引物对退火温度不敏感。该方法对其他菌株的扩增结果均为阴性,特异性强;其灵敏度为97 cfu/m L。利用该方法和国标法分别对采集的230份临床样品进行检测,均共计检出5份EPEC阳性样品,两者符合率为100%。本研究建立的DPO-PCR方法设计简单、特异性强、灵敏度高,具有良好的实用性,为快速准确检测EPEC提供新的检测手段。     

阿如拉-7味散对感染致病性E.coli O_1大鼠肠黏膜屏障的影响

作者旨在研究阿如拉-7味散对感染致病性E.coli O1大鼠肠黏膜机械屏障、免疫屏障和化学屏障的影响。选用60只6～8周龄SD大鼠进行试验,分为空白对照组、未治疗组、环丙沙星组和阿如拉-7味散高(1.08g·kg^-1)、中(0.54g·kg^-1)、低(0.27g·kg^-1)剂量组,共6组,每组10只。试验结束时,计算其保护率,并采集小肠各段进行HE染色,测定小肠黏膜形态指标;同时采集血清和回肠组织,ELISA试剂盒法检测血清中的D-乳酸和二胺氧化酶(DAO)含量以及回肠黏膜中的分泌型免疫球蛋白(sIgA)和肠三叶因子(ITF)含量。结果表明:(1)阿如拉-7味散中剂量对感染致病性E.coli O_1大鼠的保护率最好,为50%;且对小肠黏膜形态有一定的改善和修复作用,其效果与环丙沙星相当;(2)环丙沙星组与空白对照组相比D-乳酸含量无显著差异(P>0.05);阿如拉-7味散高、中剂量组DAO含量与空白对照组相比无显著差异(P>0.05);(3)除阿如拉-7味散低剂量组外,其余各组与未治疗组相比回肠黏膜sIgA含量显著提高(P<0.05);未治疗组大鼠回肠黏膜ITF含量与其余各组相比显著降低(P<0.05)。结果提示,阿如拉-7味散对感染致病性E.coli O_1大鼠引起的肠黏膜损伤有一定的修复作用,其中中剂量(0.54g·kg^-1)效果最佳,与抗生素环丙沙星的修复效果相当。     

肠致病性大肠杆菌和魏氏梭菌PCR诊断方法的建立

本研究建立了一种同时检测大肠杆菌和魏氏梭菌的二重PCR方法,根据兔肠致病性大肠杆菌（REPEC）的eae毒力基因和魏氏梭菌的α—toxin毒力基因的基因文库,设计了两对分别与eae基因和α—toxin基因互补的引物,用这两对引物对同一样品中的REPEC和魏氏梭菌模板进行二重PCR扩增。结果均得到了两条特异性大小与试验设计相符的833bp（REPEC）和324bp（魏氏梭菌）的扩增条带,而对其它3种病原菌的PCR扩增结果均为阴性;敏感性试验结果表明,该二重PCR技术能检出10cfu的REPEC,10cfu的魏氏梭菌。     

肠致病性大肠杆菌和魏氏梭菌PCR诊断方法的建立

本研究建立了一种同时检测大肠杆菌和魏氏梭菌的二重PCR方法,根据兔肠致病性大肠杆菌(REPEC)的eae毒力基因和魏氏梭菌的α-toxin毒力基因的基因文库,设计了两对分别与eae基因和α-toxin基因互补的引物,用这两对引物对同一样品中的REPEC和魏氏梭菌模板进行二重PCR扩增。结果均得到了两条特异性大小与试验设计相符的833bp(REPEC)和324bp(魏氏梭菌)的扩增条带,而对其它3种病原菌的PCR扩增结果均为阴性;敏感性试验结果表明,该二重PCR技术能检出10cfu的REPEC,10cfu的魏氏梭菌。     

兔肠致病性大肠杆菌lifA基因的免疫调节和黏附特性

兔肠致病性大肠杆菌(rEPEC)菌株RDEC-1的基因组中lifA基因与LEE(Locus for enterocyte effacement)致病岛相毗邻.本试验通过DNA序列分析、基因打靶技术、细胞因子检测以及动物试验,分析lifA基因完整核苷酸序列及其生物学功能.结果表明,RDEC-1的lifA基因的核苷酸序列与人肠致病性大肠杆菌的完全相同;ifA基因具有降低家兔外周血单核细胞IL-2表达的作用.与野生型菌株RDEC-1相比,被定点敲除lifA基因的RDEC-1突变株(RDEC-1△lifA)口服接种家兔后,排菌量明显降低.利用野生型RDEC-1和RDEC-1△lifA基因缺失菌株同时口服接种家兔,从粪便中分离细菌,结果显示野生型RDEC-1是优势菌,而RDEC-1△lifA基因缺失菌数量极少.RDEC-1△lifA基因缺失菌株和野生型RDEC-1都能引起特征性家兔肠道上皮的黏附与细胞脱落病变(A/Elesion).表明rEPEC的lifA基因在免疫调节和细菌的肠道定居中起重要作用,这为研究lifA基因的生物学功能提供了直接证据.     

大肠杆菌对仔兔小肠黏膜免疫相关细胞的影响

试验旨在研究大肠杆菌对仔兔小肠黏膜免疫相关细胞的影响,并从肠道黏膜免疫角度比较对该病的治疗效果。将40只仔兔随机平均分为4组,经腹腔注射菌液后不同时期定量观察兔黏膜免疫相关细胞。结果表明,腹腔注射菌液后可引起肠道相关免疫细胞增多,激发黏膜免疫;从黏膜免疫看注射菌液后第5天庆大霉素和乳酸菌素组均与正常对照组差异不显著(P>0.05),说明均取得了好的治疗效果,且两者之间差异不显著(P>0.05)。     

猪源肠外致病性大肠杆菌致脑膜炎机制的研究进展

细菌脑膜炎是由肠外致病性大肠杆菌引起的神经炎症所导致,在全世界范围有较高的发病率和死亡率.随着细菌耐药性增强,以抗生素为主的治疗手段逐渐面临挑战.以临床分离猪源肠外致病性大肠杆菌PCN033菌株感染为切入点,深入探讨了该病的致病机制,从病原、宿主及致病机制等方面寻找已经发现的毒力因子和靶标蛋白,积极探索非抗生素疗法,寻...     

山西省犊牛腹泻致病性大肠杆菌毒力因子筛查

旨在对山西省肉牛场的致病性大肠杆菌进行毒力因子筛查,随机采集山西省33个肉牛场205头腹泻新生犊牛直肠拭子,使用PCR检测大肠杆菌的毒力基因(F5、F17、STa、LTII、eae、Stx1、Stx2、CNF1和CNF2);将牛场按照大肠杆菌毒力谱的种类与频率进行聚类分析,并将聚类结果进行空间描述.结果 显示,各牛场新...     

河北省犊牛腹泻大肠杆菌致病性及耐药性分析

为确定河北省犊牛腹泻大肠杆菌的致病性与耐药性,本研究对2018年1月至2019年6月期间从河北省石家庄、保定、承德、唐山、廊坊的部分肉牛场腹泻犊牛样品中分离到的50株大肠杆菌进行了致病性试验、药物敏感性试验、毒力基因和耐药基因检测。结果显示:50株分离菌均对小鼠具有致病性,致病菌占比100%(50/50)。毒力基因fyuA、irp2、eaeA、ler检出率分别为68.0%、66.0%、34.0%、34.0%。50株分离菌均对15种抗生素中的2种及以上表现为耐药,对10种及以上抗生素耐药的菌株占比达34%(17/50);分离菌对土霉素、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、替米考星4种药物表现为高度耐药,耐药率分别为90%、90%、94%、100%。除四环素类tetD基因检出率为0外,其它耐药基因均有检出,其中四环素类tetC、氨基糖苷类aadA1、喹诺酮类gyrA、gyrB基因检测率高达100%。试验的50株大肠杆菌均具有较强的毒力和多重耐药性。本研究为河北省大肠杆菌所致犊牛腹泻病的防治提供了实验依据。     

利用多重PCR检测兔肠致病性大肠杆菌和魏氏梭菌的毒力基因

我们建立了一种同时检测兔肠致病性大肠杆菌和魏氏梭菌毒力基因的二重PCR方法。在一次PCR反应中同时扩增兔肠致病性大肠杆菌（REPEC）的eae毒力基因和魏氏梭菌的α-toxin毒力基因，扩增产物经电泳，出现与阳性对照细菌条带大小一致的条带即判断为该标本阳性，本试验还对79份腹泻兔粪便或肠内容物样品进行了检测，结果35.4％（28／79）检出eae＋的REPEC，而魏氏梭茵的检出率为。6．3％。敏感性试验结果表明，该二重PCR能检出10 CFU的REPEC，10 CFU的魏氏梭菌，具有简便、快速、特异、经济等特点，宜于临床应用。     

大肠杆菌对鸡的致病性探讨

大肠杆菌病对养鸡业的危害较大,可发生于任何日龄的鸡,给养鸡业带来较大的经济损失。主要介绍了几种鸡大肠杆菌致病因子的致病作用及感染机理,并提出了几点有效防治鸡大肠杆菌病的建议,以期为有效防治鸡大肠杆菌病提供参考。     

犊牛大肠杆菌病的诊治

1发病特点犊牛大肠杆菌病又称犊牛下痢或犊牛白痢,由多种血清型的病源性大肠杆菌所引起的犊牛胃肠黏膜表层乃至深层的炎症,临床上主要以腹泻为主要特征。各个品种的犊牛均易感染,主要发生于1周龄至1月龄之内的犊牛,也有的在出生后没有吃到初乳就开始发病。     

丁酸钠对断奶仔猪肠黏膜屏障功能的影响

断奶会引起仔猪肠黏膜屏障受损,丁酸钠的主要有效成分——丁酸具有短链挥发性脂肪酸的功能,能作为肠细胞的能源物质促进其增殖和成熟;降低胃肠道pH值,调节肠道微生物稳态,抑制病原菌的侵害;提高肠黏膜固有层中免疫细胞的数量,从而提高断奶仔猪的肠黏膜屏障功能。     

摄铁系统及自分泌毒素对猪源肠外致病性大肠杆菌毒力发挥的影响

为了探究猪源肠外致病性大肠杆菌(extraintestinal pathogenic Escherichia coli, ExPEC)的致病机制,本研究通过小鼠感染模型筛选强毒菌株,以PU-1为强毒代表株进行全基因组测序(染色体登录号CP042246,质粒登录号CP042245)及分析,以铁摄取系统及自分泌毒素为关注点探究上述毒力因子在PU-1株中的编码情况,并构建单基因或多基因缺失株,探究摄铁系统及自分泌毒素在猪源ExPEC致病过程中的作用。结果显示：摄铁系统及自分泌毒素基因在血液定殖的细菌中不同程度上调,最高上调可达11倍;铁摄取系统相关基因缺失株fyuA-ybtQFX、ΔiroBCDEN、Δfur及ΔsitABCD^Both对感染小鼠的致病力与野生株相比显著减弱,在感染动物血液载菌量不同程度下降,最高下降至野生株的1/15左右;自分泌毒素相关基因缺失株Δvat及ΔcdtABC对感染小鼠的致病力与野株相比显著减弱,在感染动物血液载菌量下降至野生株的1/2左右。上述结果表明,摄铁系统FyuA-YbtQFX、IroBCDEN、SitABCD及SitABCD-Plas...     

肠致病性大肠杆菌的分离鉴定和耐药性分析

为了给临床合理用药提供正确的指导,对江苏南京、扬州、镇江、泰州、盐城及安徽天长等地区送检的病死猪、羊、鸡、鹅等动物进行细菌分离和鉴定,调查肠致病性大肠杆菌对常用抗菌药物的耐药情况。结果分离出78株大肠杆菌,经过血清型鉴定,其中17株为肠致病性大肠杆菌,共属于8种血清型。通过对这17株肠致病性大肠杆菌进行耐药性分析,发现分离的肠致病性大肠杆菌对15种药物存在不同程度的耐药性。对多西环素、诺氟沙星、洛美沙星高度耐药,耐药率分别为100%、94.12%、94.12%,对头孢曲松钠、阿米卡星敏感性较高,敏感率分别为52.94%、41.18%。研究结果显示肠致病性大肠杆菌在动物感染的大肠杆菌病例中占有一定的比例,同时分离菌株的耐药性较为严重,给治疗增添了难度,因此应重视对肠致病性大肠杆菌的监测,根据药敏结果选用合适的药物进行治疗。     

致病性大肠杆菌所致犊牛腹泻的病原分析及治疗

采集36头腹泻犊牛的新鲜粪样,进行细菌的分离培养、生化和PCR鉴定,并进行致病性试验、血清型鉴定、药敏试验、耐药基因检测和治疗试验。结果显示,初步分离到25株疑似大肠杆菌菌株,经16S rDNA鉴定全部为大肠杆菌。致病性试验显示,分离株有较强的致病性,取死亡小鼠实质器官进行病原鉴定,均分离到大肠杆菌。25株分离株共覆盖6种血清型,其中O157和O152为优势血清型。25株分离菌对强力霉素、复方新诺明耐药率最高,达88%;对氨苄西林、链霉素、环丙沙星的耐药率分别为76%,72%,56%。所有分离株均携带大环内酯类ermB基因和四环素类tetB基因,大部分携带blaTEM(72%)、aaC2(64%)、aaC4(68%)和qnrB(60%)基因。治疗试验表明,新霉素与白头翁散结合治疗大肠杆菌所致犊牛腹泻的效果最佳。结果表明,犊牛源腹泻大肠杆菌菌株对临床常见抗生素产生了不同程度的耐药,并携带多种耐药基因,建议采用中西药结合治疗该病。本研究为大肠杆菌所致犊牛腹泻的合理用药和有效防治提供了依据。     

饲料中致病性大肠杆菌的分离与鉴定

大肠杆菌可分为致病性大肠杆菌和非致病性大肠杆菌两类,二者在菌落形态、染色反应、培养特性和生化反应等方面无明显差异,但抗原构造不同.迄今已知大肠杆菌有菌体抗原(O)171种,表面抗原(K)103种,鞭毛抗原(H)60种,表现为许多血清型.在引起畜禽肠道疾病的血清型中有肠致病性大肠杆菌(EPEC)、肠产毒性大肠杆菌(ETEC)、肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)和肠出血性大肠杆(EHEC)4种.致病性大肠杆菌主要通过畜禽的消化道感染,在畜禽中可引起多种综合征,包括羔羊和犊牛痢疾,马、绵羊流产,家禽败血症,慢性呼吸道疾病和输卵管炎,仔猪水肿病等.随着我国加入WTO和西部大开发计划的实施,我国的畜牧业生产进入了一个全新的发展阶段,各大、中、小饲料厂也相继不断发展和壮大,为了进一步了解青海省饲料中致病性大肠杆菌的分布情况,2004年3～4月,笔者等对西宁市某饲料厂的饲料随机抽样并进行了致病性大肠杆菌的分离与鉴定.现将结果报告如下.     

豪猪源肠侵袭型大肠杆菌的分离鉴定及致病性研究

【目的】 查明引起福建省龙岩市某豪猪养殖场致豪猪腹泻死亡的病原菌及其特征,为该病的科学防控及合理用药提供参考依据。【方法】 分离腹泻死亡豪猪的病原,并结合形态特征、生理生化试验、16S rRNA基因扩增、种系发育分群鉴定分离菌株;通过毒力基因检测、动物致病性试验及药敏试验对分离菌株的致病性和耐药性进行研究。【结果】 从发病死亡豪猪肝脏组织中分离到1株大肠杆菌,命名为Fj/Porcupine2018,该分离菌株与22株不同来源的参考菌株16S rRNA序列之间的相似度为97.4%~99.8%,其中与禽源分离株（登录号：MN022583）和人源分离株（登录号：MW881377）的序列相似度高达99.8%;种系发育分群证实该分离菌株属于B1群。毒力基因检测结果显示,该分离菌株除检出肠侵袭型大肠杆菌毒力基因EinV外,还检出papC、iroC、Afa、luxs、stx2f及ompA 6种毒力相关基因。动物致病性试验显示,该分离菌株对小鼠具有较强的致病性,小鼠在攻毒后31 h内全部死亡,且肝脏、脾脏、肺脏及肠道等器官组织均有明显的病理损伤;在对常见抗菌药物的药敏试验中,该分离菌株对大环内酯类、四环素类、喹诺酮类、磺胺类、头孢类、氨基糖苷类、青霉素类7类11种药物表现出不同程度的耐药,耐药率为25%~100%,仅对头孢曲松和头孢西叮2种药物表现敏感。【结论】 本研究分离获得了1株腹泻死亡豪猪的病原菌大肠杆菌,通过一系列生物学特性研究证实该分离菌为1株具有较强致病力且呈现多重耐药性的B1群肠侵袭型大肠杆菌,为豪猪等野生动物大肠杆菌病的防控提供了重要的参考依据。