山羊瘤胃中单宁降解菌的分离、筛选和鉴定

本试验旨在从山羊瘤胃中分离、筛选和鉴定单宁降解菌。从隆林山羊瘤胃采集内容物,采用单宁浓度耐受培养基进行初筛,再采用单宁酶活力鉴定培养基分离、筛选单宁降解菌,筛选出的细菌通过16S r DNA基因序列测定初步鉴定,将菌株在单宁浓度为0.5%、1%、1.5%的单宁酶诱导培养基中培养,测定酶活力。结果表明:共分离、筛选到4株降解单宁的细菌,根据16S r DNA基因序列分析结果,分别为产碱普罗威登斯菌(Providencia alcalifaciens)、克斯特菌(Kerstersia)、普罗威登斯菌(Providencia vermicola)和铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)。经单宁酶诱导培养基培养后,Kerstersia的胞内单宁酶活力高于其他3株菌,而其他3株菌的酶活力较为接近;Kerstersia、Providencia vermicola和Pseudomonas aeruginosa经1%单宁浓度诱导的单宁酶活力均高于经0.5%和1.5%单宁浓度诱导(P0.05)。本试验成功从山羊瘤胃中筛选、分离、鉴定出4株单宁降解菌,且它们均表现出较高的单宁酶活力。     

泡盛曲霉FCYN206对EM菌青贮香蕉茎叶中单宁的影响

为了高效降解青贮香蕉茎叶中的单宁,本试验研究添加产单宁酶菌株——泡盛曲霉FCYN206对香蕉茎叶青贮品质的影响。试验设计对照组、泡盛曲霉FCYN206菌组、EM菌组和EM菌+泡盛曲霉FCYN206菌组,青贮20 d,开封测定青贮品质。结果表明:与对照组比,菌株泡盛曲霉FCYN206可减少干物质损失,显著降低单宁含量(P0.05),但对饲料粗蛋白质含量无明显作用;EM菌能提高饲料粗蛋白质含量,但对单宁降解无效果;EM菌+泡盛曲霉FCYN206组p H为3.91,达到青贮标准,感官评价最好,且与对照组相比,单宁含量显著降低4.49%(P0.05)。添加泡盛曲霉FCYN206对EM菌青贮香蕉茎叶中的单宁有明显降解作用,能改善青贮香蕉茎叶饲料的感官品质和风味。     

青贮用乳酸菌的分离鉴定及生物学特性评价

本研究旨在从构树青贮、玉米青贮及饲喂构树青贮的羔羊粪便中分离鉴定可饲用乳酸菌,为开发构树青贮用乳酸菌提供试验材料。以构树青贮、玉米青贮以及饲喂构树青贮的羔羊粪便为菌株分离来源,使用含有1%碳酸钙的MRS琼脂培养基分离纯化乳酸菌,获得菌株经16S rRNA测序鉴定后对其中可饲用菌株进行生长、产酸性能的筛选,评估在pH 3.0、3.5、4.0条件下存活率和对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌的抑制能力,并对筛选菌株进行菌株之间拮抗性测定。结果表明：获得可饲用乳酸菌共37株,包括植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、布氏乳杆菌(Lactobacillus buchneri)、副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)4种,不同的菌株在生长和产酸性能上表现出差异,在不同pH中存活率和抑菌性能也具有菌株特异性。综合比较不同菌株之间的生物学特性,植物乳杆菌GQ-3-2、GQ-3-29及GQ-5-4具有良好的生长、产酸及抑菌性能;粪肠球菌Y-3-15在发酵2 h进入对数生长期,能够为植物乳杆菌的大量繁...     

高活性蛋白酶菌株的选育及发酵培养基的初步优化

试验旨在筛选产高蛋白酶酶活的菌种,用于动物蛋白的酶解。试验从屠宰场的土壤、污泥等地采集样品,采用酪蛋白平板初筛和酶活复筛的方法进行筛选,选取活性较高的菌进行紫外诱变并鉴定,从碳源、氮源、碳氮比和初始pH等方面优化其培养基。结果表明,该菌经紫外诱变后活性提高30%左右,葡萄糖和大豆蛋白胨为其最佳碳氮源,碳氮比为2:1,在初始pH中性条件下产酶较好。反复测定表明该菌遗传稳定性较好,经形态鉴定、16SrDNA和gyrB序列分析鉴定为地衣芽孢杆菌,安全无毒,可进行生产转化。     

构树发酵和青贮的营养价值及其在养殖生产上的应用

构树是优质的饲料原料,粗蛋白、氨基酸、粗脂肪、微量元素等含量丰富,且富含黄酮类、葡萄糖苷、生物碱类等多种生物活性成分,具有提高动物生产性能、增强机体抗氧化能力、改善畜产品品质等功效。发酵和青贮能将结构复杂的构树蛋白质分解成易于消化吸收的短肽和氨基酸,降低粗纤维、木质素、单宁等抗营养因子含量,改善构树饲用价值。该文就构树饲料中的营养和生物活性成分、主要抗营养因子、发酵和青贮对构树饲料营养组成和含量的影响及其在动物养殖生产上的应用进行了综述。     

鸡源产蛋白酶乳酸菌的筛选与鉴定

为了筛选获得动物源产蛋白酶乳酸菌,开发新型微生态制剂以提高饲料利用率,试验选取新鲜健康鸡粪为样品,利用溴甲酚紫平板法筛选产酸菌,再通过酪蛋白平板法筛选产蛋白酶乳酸菌,对该菌进行形态学和16S rDNA分子生物学鉴定并分析其生长产酶规律和所产蛋白酶的酶学特性。结果表明,成功筛选到11株产蛋白酶乳酸菌,其中JF3-11所产蛋白酶活力最高,经形态学和分子生物学鉴定该菌为唾液乳杆菌,其所产蛋白酶的最适反应条件为60℃,pH值7.0,在中性条件下稳定性较好且具有一定热稳定性,Mg~(2+)、Mn~(2+)能够促进酶活,Zn~(2+)、Cu~(2+)对酶活具有抑制作用;在30℃、200 r/min条件下,培养至30 h其上清液中所产蛋白酶相对酶活可达到最高值100%(82 U/mL)。本试验成功从健康鸡粪中筛选获得一株产蛋白酶乳酸菌,对其所产蛋白酶特性的分析为其在饲料工业中的应用提供了理论基础。     

复合菌固体发酵构树生产蛋白饲料的试验研究

采用含枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌和酿酒酵母的复合菌固体发酵构树饲料,以粗蛋白含量为考察指标,通过L9(34)正交试验确定构树饲料发酵最佳工艺参数为接种量9%、培养基初始含水量57%、温度34℃、培养基装料量400 g、发酵时间48 h。构树饲料经发酵粗蛋白和酸溶蛋白的含量分别提高35.23%和70.88%,酸溶蛋白占粗蛋白的比例由40.27%提高到50.89%;粗脂肪含量变化不明显;中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维、酸性洗涤木质素、单宁的含量分别降低25.00%、34.59%、18.53%、85.95%。     

真鲷胃肠道产蛋白酶菌株的分离与筛选

利用酪蛋白培养基和脱脂乳培养基,从健康真鲷肠道中筛选产蛋白酶菌株,并利用福林-酚试剂法测定其酶活力.通过形态学和生理生化手段对产酶能力较强的菌株进行初步鉴定.从健康真鲷肠道中共筛选出20株产蛋白酶菌株,占真鲷肠道茵群的17.4%;其中H1-16、D1-7、X1-5和X2-3产酶活力特别强,所测酶活力分别为45.45、54.55、63.65和59.1 U/mL.为今后制成益生茵制品应用于水产养殖,提高养殖动物的存活率和生长速度提供了理论基础.     

不同菌种对全株构树青贮饲料质量影响的探究

为探究外源添加不同菌种对于全株构树青贮饲料质量的影响,采用新鲜全株构树(70%)并搭配辅料(玉米粉5%、糖蜜10%、稻糠5%、麸皮10%)进行青贮试验。共设4个处理组:试验组Ⅰ(产朊假丝酵母CU-1+植物乳杆菌L-1混合青贮)、试验组Ⅱ(枯草芽孢杆菌BU-4+植物乳杆菌L-1混合青贮)、试验组Ⅲ(植物乳杆菌L-1单独青贮)、对照组(未加菌)。室温发酵30 d。结果表明:试验组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ乳酸含量显著高于对照组(P<0.05),pH值与NH3-N/TN均显著低于对照组(P<0.05)。试验组Ⅰ粗蛋白含量显著高于对照组及试验组Ⅱ、Ⅲ(P<0.05),酸溶蛋白含量显著高于对照组(P<0.05)。试验表明,产朊假丝酵母CU-1和植物乳杆菌L-1混合青贮对于提高全株构树青贮饲料质量和蛋白品质效果较佳。     

产纤维素酶芽孢杆菌的筛选及鉴定

研究旨在通过定向筛选获得能够产纤维素酶的芽孢杆菌。试验从生境中筛选到产纤维素酶较高的一株芽孢杆菌,通过菌株形态学和分子生物学对菌株进行了鉴定,并对这株菌的耐模拟肠液性、产酶特性和抑菌能力进行评定。结果显示,所筛选的芽孢杆菌B13为解淀粉芽孢杆菌,产纤维素内切葡聚糖酶酶活为7.31 U/ml,纤维素外切葡聚糖酶酶活为5.26 U/ml,木聚糖酶酶活为32.46 U/ml,能够产淀粉酶和蛋白酶,耐模拟胃液能力较强,而耐模拟肠液能力较弱,不能产生抗金黄色葡萄球菌的物质。结果提示,本试验筛选到的解淀粉芽孢杆菌B13能够产生纤维素酶并具有良好生物学特性,为降低粮食加工副产物中纤维素含量、提高其利用率提供了参考。     

产蛋白酶芽孢杆菌的筛选鉴定及酶学特性分析

为了分离筛选产蛋白酶芽孢杆菌,以开发新型饲料添加剂,本研究选取小鼠肠道内容物为样品,通过对样品进行预处理以及酪蛋白平板检测法分离筛选获得产蛋白酶芽孢杆菌,对该菌进行形态学和分子生物学鉴定并分析其生长规律、产酶规律以及所产蛋白酶的酶学特性。结果表明,经形态学和分子生物学鉴定该菌为特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis),其所产蛋白酶的最适反应条件为50℃,pH=8.0,具有一定的高温耐受性,在弱酸、中性和弱碱性条件下表现出一定的稳定性,Ca²⁺和Mn²⁺能够显著提高酶活(P<0.05),Zn²⁺、Mg²⁺、Cu²⁺和EDTA、尿素溶液对蛋白酶活力具有显著抑制作用(P<0.05),培养至16 h菌体量达到最大值,发酵22 h上清液中的蛋白酶活力达到最高值(57.77 U/mL)。该芽孢杆菌的成功筛选分离以及其所产蛋白酶的分析研究,为新型饲料添加剂的开发利用提供了物质基础。     

不同源性腐败梭菌产毒特性的试验

用自制的6种腐败梭菌培养基(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ),对分离到的3株不同源性的腐败梭菌LF2010、LF9601、YF9801进行培养基和产毒能力的筛选试验。结果,此3株菌在Ⅱ号培养基上的产毒能力分别达到3 000,1 000和500MLD/mL,这为今后研制腐败梭菌疫苗的研制提供了一定的技术依据。     

微山湖河蟹养殖区与非河蟹养殖区细菌胞外酶的比较研究

为了研究微山湖河蟹养殖区与非河蟹养殖区水体和底泥中异养细菌胞外产酶（蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、脲酶）的差别．对这2处环境中的微生物进行了初步筛选和分离,得到25株菌,分别在含有蛋白质、脂肪、淀粉、脲的固体培养基上培养观察。并测量记录菌落和菌圈大小。结果表明,河蟹养殖区产蛋白水解酶和脂肪水解酶的细菌明显多于非河蟹养殖区,而产淀粉水解酶和脲酶的细菌数量两者相差不大。     

原料乳中耐冷菌群及其产酶特点

耐冷菌及其分泌的耐热酶是原料乳中常见污染物,会导致乳制品腐败。通过16S rRNA基因测序分析了分离自上海地区原料乳的耐冷菌群,以及通过平板法研究不同耐冷菌的蛋白酶和脂肪酶活力。结果表明:所有的分离株属于9个菌纲,含33个菌属,其中数量占主要的菌属是假单胞菌(Pseudomonas)(55％)、不动杆菌(Acinetobacter)(10％)和黄杆菌(Flavobacterium)(5％),其余30个菌属占所有菌株数的30％。耐冷菌产酶能力平板法实验显示,大部分的耐冷菌都有产蛋白酶或脂肪酶的能力,不同菌属之间产酶特点存在差异。假单胞菌和黄杆菌主要表现为产蛋白酶活性,克雷伯氏菌(Klebsiella)主要表现为产脂肪酶活性,而大多数的不动杆菌没有产蛋白酶或脂肪酶活性。     

以柑橘皮为原料用宇佐美曲霉生产饲用复合酶的研究

以实验室筛选的一株可同时产纤维素酶、木聚糖酶和酸性蛋白酶的宇佐美曲霉A.us-amii-CF1为生产菌株,以柑橘皮为原料,对固体发酵培养基的水分含量、起始pH值、碳源、无机盐及柑橘皮粉与豆粕比例对产酶率的影响进行了研究,研究发现,当培养基配方为橘皮粉53%、豆粕23%、麸皮19%、尿素1%、Na2HPO42%、MnSO42%;最佳培养基水分为55%～60%时,菌种产酶活力达到CMC酶41.6U/g、β-葡萄糖苷酶102.2U/g、木聚糖酶2079.6U/g、酸性蛋白酶7884.6U/g。经干燥后的复合酶储存性能稳定。     

砂仁精油对构树青贮品质的影响

试验旨在研究砂仁精油对构树（Broussonetia papyrifera L.）青贮品质的影响。全株构树原料切碎并设3组，阴性对照组添加5 mL/kg鲜重（FW）蒸馏水，阳性对照组添加复合乳酸菌2×107 CFU/g鲜重（FW），砂仁精油组添加5 mL/kg FW砂仁精油。常温条件下厌氧密封青贮60 d后开袋取样，进行营养品质、发酵品质和微生物群落分析。结果表明：阳性对照组和砂仁精油组青贮饲料的干物质、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维和可溶性碳水化合物含量高于对照组（P<0.05）；与对照组和阳性对照组相比，砂仁精油组pH和氨态氮含量最低，乳酸含量最高（P<0.05）；与对照组相比，砂仁精油增加了构树青贮饲料中有益菌（如Lactococcus、Levilactobacillus和Lentilactobacillus）的丰度，降低了有害菌（如Acinetobacter和Stenotrophomonas）的丰度。由此可知，砂仁精油可通过增加有益菌丰度和降低有害菌丰度来改善构树的青贮品质。     

不同地区取样点土壤中木质素降解优势菌株的筛选及生长特性比较

本试验旨在研究基于不同地区取样点土壤成分条件下,木质素降解菌的生长特性,并为筛选出降解农作物秸秆中木质素的优势菌奠定基础.通过对扬州、南京、临沂、潍坊和连云港地区5个取样点的土壤成分测定,并利用选择培养基和马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)-RB亮蓝与PDA-Bavendamm平板显色反应鉴定不同土壤中木质素降解菌生长量及其木质素降解酶特性,依据各取样点菌株的生长特性最终选择优势菌株.结果表明,扬州取样点土壤中木质素降解菌密度[(5.67±0.58) 105g-1]极显著高于另外4个取样点(P＜0.01),所获得的木质素降解菌的产酶特性亦优于其他取样点.可知,5个取样点土壤中木质素降解菌密度存在明显差异,并与土壤中总有机碳含量呈强正相关(r=0.84,P＜0.01).     

培养条件对混菌发酵产酶的影响

本试验通过单因子试验研究pH值对混菌发酵产CMC酶、蛋白酶的影响,得出发酵基质的最佳pH值为5.0;通过单因子试验研究混菌比例对混菌发酵产酶的影响,得出混菌发酵产CMC酶的最佳混菌比例为4：2：2,产蛋白酶的最佳混菌比例为2：4：2;研究单菌发酵产CMC酶、蛋白酶的情况,测得单菌发酵产CMC酶的最高酶活力为3424.96U/g,产蛋白酶的最高酶活力为92.16U/g;而混菌发酵产CMC酶的最高酶活力为4892.80U/g,产蛋白酶的最高酶活力为437.76U/g。通过正交试验研究温度、pH值、转速这3个因素对混菌发酵产CMC酶、蛋白酶的影响,测得混菌发酵产CMC酶的最佳条件是：pH5.0、温度38℃、转速150r/min;产蛋白酶的最佳条件是：pH6.0、温度38℃、转速140r/min。     

不同地区取样点土壤中木质素降解优势菌株的筛选及生长特性比较

本试验旨在研究基于不同地区取样点土壤成分条件下,木质素降解菌的生长特性,并为筛选出降解农作物秸秆中木质素的优势菌奠定基础。通过对扬州、南京、临沂、潍坊和连云港地区5个取样点的土壤成分测定,并利用选择培养基和马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)-RB亮蓝与PDA-Bavendamm平板显色反应鉴定不同土壤中木质素降解菌生长量及其木质素降解酶特性,依据各取样点菌株的生长特性最终选择优势菌株。结果表明,扬州取样点土壤中木质素降解菌密度[(5.67±0.58)105g-1]极显著高于另外4个取样点(P<0.01),所获得的木质素降解菌的产酶特性亦优于其他取样点。可知,5个取样点土壤中木质素降解菌密度存在明显差异,并与土壤中总有机碳含量呈强正相关(r=0.84,P<0.01)。     

复合乳酸菌对杂交构树和饲料桑青贮发酵品质的影响

本研究中针对杂交构树和饲料桑含可发酵物质较少,自然青贮品质较差这个问题,通过在青贮杂交构树和饲料桑中接种不同活菌数量的复合乳酸菌(植物乳杆菌:布氏乳杆菌=1:1)的方法来改善杂交构树和饲料桑的青贮发酵品质,根据测量接种后青贮杂交构树、饲料桑的感官(色泽、气味和质地)、发酵品质和营养成分的变化,证明复合乳酸菌接种量为1×...