桑黄粗多糖和蛹虫草粗多糖协同增效诱导肺癌细胞A549 S期阻滞及凋亡的研究

通过细胞抑制试验研究桑黄子实体粗多糖与蛹虫草子实体粗多糖混合后的粗多糖对肺癌细胞A549的抑制作用,为利用药用真菌开发抗肿瘤药物提供试验依据。采用MTT法检测0.8 mg/m L的桑黄粗多糖和蛹虫草粗多糖对肺癌细胞A549增殖均有一定的抑制作用,作用48 h后的抑制率分别为32.95%、41.93%;将0.8 mg/m L桑黄粗多糖和0.8 mg/m L蛹虫草粗多糖按1∶1体积比混合的粗多糖则表现出协同增效抑制A549细胞增殖作用,抑制率可达54.71%。用流式细胞计数法测试分析的结果是:0.8 mg/m L蛹虫草粗多糖可影响A549细胞周期各时相的分布,而0.8 mg/m L桑黄粗多糖则对细胞周期无明显作用,但0.8 mg/m L混合粗多糖对A549细胞周期各时相分布的影响显著增强,G0/G1期细胞比率从75.39%±2.49%降低至64.43%±2.12%(P0.01),S期细胞比率从16.61%±0.87%升高至27.97%±2.82%(P0.01);混合粗多糖作用48 h后,A549细胞的晚期凋亡率从正常组的1.92%±0.55%提高至20.75%±0.24%,坏死细胞率由正常组的1.88%±0.43%提高至9.64%±0.42%,表现出明显的协同增效诱导A549细胞凋亡的作用。荧光定量PCR检测结果表明,A549细胞分别用0.8mg/m L的桑黄粗多糖和蛹虫草粗多糖及其混合粗多糖处理后,细胞内周期调控相关蛋白基因Cyclin A、CDK4的mRNA转录水平均显著下调,Cyclin D1、CDK2的mRNA转录水平显著上调,凋亡相关基因Bid、Bak、Cyt-C、Caspase3的mRNA转录水平也显著上调。研究结果提示桑黄粗多糖和蛹虫草粗多糖混合使用,具有协同增效抑制肺癌细胞A549增殖的作用,推测其通过调控细胞周期和细胞凋亡相关基因的表达,导致Cyt-C释放及启动caspase级联反应,从而诱导细胞凋亡。     

野生与人工栽培桑黄子实体中的粗多糖和粗酚含量及药用活性比较

为了明确人工栽培桑黄(Phellinus spp.)的药用价值,以野生桑黄和人工栽培桑黄的子实体为材料,检测分析其水溶性活性物质粗多糖和粗酚的含量,以及其抗肿瘤、抗感染活性。采用乙醇浸提及甲醇萃取的方法提取栽培桑黄子实体粗酚的得率显著高于野生桑黄子实体,经超高效液相色谱-飞行时间质谱(UPLC-MS)技术分析2种桑黄子实体中的桑黄酚主要由丁香酸、原儿茶酸、原儿茶醛、咖啡酸4种单体酚组成。采用MTT法检测2种桑黄子实体来源粗多糖、粗酚以及4种单体酚物质对体外培养HCT116、HT-29、HepG 2肿瘤细胞的增殖均有较强抑制作用,2种来源的活性成分样品在相同剂量下的抑制作用差异不显著,其中原儿茶醛抑制肿瘤细胞增殖的活性较强。用流式细胞术体外检测桑黄粗酚中的单体酚物质对结肠炎患者外周血CD4+T细胞凋亡具有诱导活性,且咖啡酸、原儿茶酸抑制细胞增殖并诱导其凋亡的活性较强。研究结果表明,人工栽培桑黄子实体有良好的药用价值,其中多糖和原儿茶醛成分是抑制结肠癌、肝癌细胞增殖的主要活性物质,丁香酸、原儿茶酸通过诱导CD4+T细胞凋亡发挥抗感染作用。     

不同来源和采收时期桑黄子实体的主要活性成分含量比较

桑黄是一类具有重要药用价值的大型真菌,桑黄药材质量的好坏,取决于其活性成分含量的多少,而活性成分含量与桑黄来源和桑黄采收时期密切相关。通过测定不同来源桑黄子实体中多糖、麦角甾醇、多酚、黄酮、三萜类化合物和糖蛋白的含量以及测定不同生长期子实体中活性成分含量及单包产量,分析其变化规律。结果表明:人工栽培桑黄子实体中的多糖、麦角甾醇、三萜、多酚含量显著高于野生多年生桑黄子实体,其中桑枝木屑袋料栽培湖南SHG号桑黄子实体中的多糖含量最高,质量比达80.86 mg/g,比含量最低的西藏野生多年生桑黄子实体中多糖含量高213.29%;湖南SHH1号桑黄子实体中三萜、麦角甾醇含量最高,质量比分别达到26.29 mg/g、3.213 mg/g;浙江号桑黄子实体中多酚含量最高,达33.18 mg/g,湖南SHH2桑黄子实体的多酚含量最低,为6.79 mg/g;野生多年生桑黄子实体中的黄酮含量极显著高于人工袋料栽培桑黄子实体,其中秦岭号桑黄子实体中的黄酮质量比高达25.59 mg/g;所有桑黄子实体已检测的活性成分中糖蛋白的含量变幅最小。桑黄子实体中多糖、麦角、三萜3种活性成分的含量以及单包桑黄子实体产量...     

桑黄水提物诱导黑色素瘤细胞系B16-F10 G0/G1期阻滞的研究

通过噻唑蓝(MTT)比色法、流式细胞分析、转录组测序和蛋白印迹等手段,探究桑黄水提物(SH)对黑色素瘤细胞系B16-F10的抑制作用及分子作用机制。MTT实验结果显示,SH能够抑制B16-F10细胞系增殖,且呈剂量依赖性。流式细胞分析发现,SH能够诱导细胞G₀/G₁期阻滞,但对细胞凋亡无明显影响。RNA-seq、qRT-PCR和Western blot分析发现,SH主要通过上调p53信号通路中p21的表达,进而抑制细胞周期通路中CyclinD3、CDK2和CDK6的表达来影响细胞周期阻滞。研究结果证明SH对黑色素瘤细胞增殖具有显著的抑制作用,p21-CyclinD3-CDKs信号通路介导的G₀/G₁期阻滞是其作用机制之一。     

桑枝屑不同添加量对桑黄的生物转化率和质量的影响

桑枝的纤维素、粗蛋白、矿物质等含量丰富,可以用作培养基生产桑黄。本研究根据培养基中桑枝屑不同添加量分别设A、B、C、D四个配方组及不含桑枝屑的对照组来培养桑黄。试验结果表明,A配方组、B配方组的桑黄子实体平均产量、子实体最高产量、平均生物学转化率均高于对照配方组,而C配方组、D配方组的桑黄子实体平均产量、子实体最高产量、平均生物学转化率均低于对照配方组。桑枝屑添加量为80%时,其生物学转化率和产量最高,因此可以得出最佳配方组为A配方组,桑枝屑代料栽培的桑黄的多糖含量均高于对照配方组,桑枝屑的添加量控制在80%内为宜。     

冬虫夏草菌丝粗多糖对SP2/0细胞凋亡和p53表达的影响

观察冬虫夏草菌丝粗多糖对SP2／0细胞凋亡诱导和p53基因表达的影响。在体外用粗多糖处理SP2／0细胞,MTT法检测其对肿瘤细胞增殖抑制作用,Hochest33342荧光染色观察细胞凋亡的形态学变化,DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞的周期,实时荧光定量PCR检测p53基因的表达情况。结果发现,与对照组相比,冬虫夏草粗多糖可抑制SP2／0细胞增殖,诱导出现典型凋亡形态变化,电泳出现特有梯形条带,引起细胞周期阻滞,使p53基因的表达明显改变。这提示冬虫夏草粗多糖对SP2／0细胞生长的抑制,可能与诱导凋亡和声53基因表达的改变有关。     

杀虫剂丁烯氟虫腈对家蚕卵巢培养细胞(BmN)的毒性试验

丁烯氟虫腈是在农业害虫防治中应用广泛的苯基吡唑类杀虫剂,以家蚕卵巢培养细胞(BmN)为材料,研究丁烯氟虫腈对家蚕的毒性及其作用机制。用MTT法检测丁烯氟虫腈对BmN细胞的增殖有较强抑制作用,且在药液质量浓度12.5~800μg/mL范围内,其抑制作用呈现出浓度依赖性,200、400μg/mL时抑制率分别高达41.34%±7.30%、56.40%±6.70%。用400μg/mL丁烯氟虫腈药液处理BmN细胞48 h后,用流式细胞仪检测发现可导致DNA合成期(S期)细胞比率显著提高(由33.51%±5.12%增加至44.33%±3.98%),DNA合成前期(G0/G1)、DNA合成后期(G2/M)细胞比率降低(分别由37.31%±5.71%、29.18%±7.65%降至31.65%±2.33%、24.02%±3.66%),细胞早期凋亡率和晚期凋亡率分别由4.74%±1.29%、4.95%±1.46%增加至9.86%±2.51%、25.37%±3.38%;用qRT-PCR法检测细胞中4种半胱氨酸蛋白酶(Caspase-1、Caspase-3、Caspase-4、Caspase-5A)基因mRNA转录水平显著上调。研究结果提示,丁烯氟虫腈可能通过上调BmN细胞的半胱氨酸蛋白酶基因表达水平,诱导BmN细胞S期阻滞和凋亡,从而抑制BmN细胞增殖。     

乌龙茶多糖和多酚对肝癌细胞HepG2的协同抑制作用

为了探讨乌龙茶多糖、多酚对肝癌细胞HepG2细胞增殖及细胞周期的影响,以及两者联合使用对肝癌细胞HepG2协同杀伤抑制作用,通过四氮甲唑蓝(MTT)试验检测细胞的增殖抑制率,以观察乌龙茶多糖、多酚对肝癌细胞HepG2的增殖抑制作用;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果表明,乌龙茶多糖、多酚可以抑制肝癌细胞HepG2的生长、增殖;二者联合应用对肝癌细胞HepG2的杀伤作用显著强于2种药物单独使用,且经药物联合应用处理后的肝癌细胞HepG2的凋亡率要高于2种药物单独使用。说明乌龙茶多糖、多酚对肝癌细胞HepG2具有杀伤作用,乌龙茶多糖与多酚联合使用具有协同抗肿瘤的作用。     

猪RegⅢγ蛋白的重组表达及功能研究

【目的】探究重组猪RegⅢγ蛋白的生物功能及相应分子机理,为该蛋白的开发应用提供参考。【方法】利用PCR扩增RegⅢγ基因片段,并连接至pDCP载体,以构建RegⅢγ蛋白重组表达系统。加入IPTG低温诱导促使重组蛋白高效表达,利用镍柱亲和层析纯化蛋白并进行透析后研究其对不同细菌的抑制作用,以及对猪小肠上皮细胞(IPEC-J2细胞)的促增殖与损伤修复及抗氧化与凋亡的功能,进一步探究其分子机理。【结果】纯化后重组蛋白Western blotting鉴定结果显示,17 ku处存在特征条带,确定重组猪RegⅢγ蛋白成功表达。重组猪RegⅢγ蛋白对金黄色葡萄球菌和化脓性链球菌2种革兰阳性菌有明显的抑菌效果,MIC₉₀均为39.1μg/mL,对大肠杆菌和肠炎沙门氏菌2种革兰阴性菌未产生抑菌圈;可促进IPEC-J2细胞的增殖及损伤修复,且浓度为10μg/mL时增殖与修复效果最佳。与对照组相比,表皮生长因子受体(EGFR)、细胞外调节蛋白激酶1(ERK1)、ERK2、细胞周期蛋白依赖激酶2(CDK2)、CDK4、细胞周期蛋白E(Cyclin E)和Cyclin D基因mRNA表达...     

CRISPR/Cas9系统敲除山羊CDK2基因载体构建及转染效率检测

细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-2(CDK2)是细胞通过和进入S期所必须的细胞周期调节激酶,与许多癌细胞的生长有关。然而,目前在山羊上关于CDK2基因敲除及相关功能的研究尚未见报道。研究采用CRISPR/cas9系统,首先设计CDK2基因的sgRNA片段,在合成CDK2 sgRNA核苷酸序列后,构建能够同时表达sgRNA和Cas9 D10A的质粒PYSY-CDK2 sgRNA,连接并转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,对转化子进行验证,最后转染HEK293T细胞,检测细胞荧光和细胞增殖。酶切和测序结果证明,CDK2基因敲除载体构建正确;荧光显微镜检测显示,细胞转染效率在75%以上;细胞增殖检测表明,山羊CDK2敲除质粒不会对人源细胞增殖产生影响。说明采用CRISPR/Cas9构建的载体,可为后续获得山羊CDK2基因缺失型细胞系,研究支原体肺炎感染引发的细胞凋亡分子机制提供理论依据。     

癸氧喹酯干混悬剂含量测定的改进

采用高效液相色谱法测定癸氧喹酯干混悬剂的含量,在2-250μg/mL范围内,峰面积的常用对数与进样量浓度的常用对数呈良好的线性关系,R^2=1(n=5),平均回收率为99.24%~99.51%,RSD在0.05%~0.28%。此方法分析时间短,样品前处理简便、定量结果准确,重现性好,结果满意,为其质量控制提供了依据。     

商会自治的基石——商会自治规范研究

在现代法律秩序中,商会自治规范是制定法的基础和必要的补充,甚至在某些方面替代了制定法;商会自治规范主要包括商会组织规范、行为规范、惩罚规范以及争端解决规范等;其效力仅及于其内部成员;商会自治规范和制定法之间存在冲突,但也存在整合的基础。     

猪毛色遗传的研究进展

本文概述了猪的毛色类型、猪的毛色遗传模式,着重综述了猪毛色基因分子基础的研究进展,指出存在问题并就未来发展方向做了思考。     

Comparison of 2 methods of centesis of the bursa of the biceps brachii tendon of horses

REASONS FOR PERFORMING STUDY: Centesis of the bicipital bursa using an 8.9 cm long spinal needle has been reported but the alternative of employing a 3.8 cm long hypodermic needle requires validation. OBJECTIVE: To compare the efficacy of 2 different methods of centesis of the bicipital bursa and to evaluate the usefulness of ultrasonographic imaging to determine the location of solution administered when centesis of the bursa is attempted. METHODS: For Trial 1, 6 clinicians, who had no previous experience of centesis of the bicipital bursa, attempted to inject a solution composed of an aqueous radiopaque contrast medium and physiological saline solution (PSS) into the bicipital bursae of 2/12 horses using the previously described distal approach to inject one bursa and a proximal approach to inject the contralateral bursa. The bicipital tendon and bursa were examined ultrasonographically before and after injection; and both shoulders were examined radiographically to identify the location of the medium. In Trial 2, another 6 clinicians, also with no previous experience of centesis, repeated Trial 1, using 6 horses, but the radiopaque contrast medium was mixed with air instead of PSS. RESULTS: Accuracy of centesis using the proximal approach was 39% and that of the distal approach 28%. Ultrasonographic examination of the shoulder allowed the location of solution and air to be accurately predicted in all 12 shoulders examined. CONCLUSIONS: Clinicians who have had no previous experience performing centesis of the bicipital bursa are unlikely to be successful in centesis using either approach. Radiographic examination after injecting a radiopaque contrast medium may be necessary to assess the success of centesis especially if bursal fluid is not obtained during centesis. Injecting air along with the radiopaque contrast medium provides more accurate ultrasonographic confirmation of centesis and better radiographic definition than does injection without air.     

不同样本商品蜂蜜中硒含量的测定

用硝酸和高氯酸消化蜂蜜,使硒游离出来,在微酸性环境下,硒和2,3-二氨基萘(DAN)生成有较强荧光的物质,用环己烷萃取,在激发波长378nm,荧光波长518nm处测定其荧光强度。蜂蜜中硒含量范围:0.10～0.82μg/g。表明:蜂蜜应视为天然富硒营养品。     

乳酸杆菌益生作用机制的研究进展

乳酸杆菌作为益生菌广泛用于人和动物。本文综述了乳酸杆菌改善宿主健康的机制。乳酸杆菌可通过产生抗菌物质如乳酸、过氧化氢、细菌素,或者通过竞争营养或肠道黏附位点来抑制致病菌;通过诱导黏附素的分泌或阻止细胞凋亡而增强肠道的屏障功能,从而保护肠道。文章重点讨论了乳酸杆菌表面成分（表面蛋白、脂磷壁酸和肽聚糖）与肠道受体（Ｃ型凝集素受体、Ｔｏｌｌ样受体和 Ｎｏｄ样受体）,阐述了他们结合后启动免疫调节信号,调控肠道免疫功能以发挥改善健康作用的机制。     

Effects of size of ingestively masticated fragments of plant tissues on kinetics of digestion of NDF

Ingestively masticated fragments were collected and sized via sieving. Different sizes of esophageal masticate and ruminal digesta fragments, and ground fragments of larger masticated pieces were incubated in vitro, and undigested NDF remaining at intervals of up to 168 h of incubation was determined. The ruminal age-dependent time delay (tau) for onset of digestion of NDF was positively correlated (P < 0.004) with the mean sieve aperture estimated to retain 50% of the fragments between successive sieve apertures (MRA). Degradation rate of potentially degradable NDF (PDF) and level of indigestible NDF were not related (P > 0.10) to MRA of masticated and ground fragments. Estimates of tau were positively related to MRA, with slopes of bermudagrass < corn silage < ruminal fragments of corn silage. It was concluded that fragment size-, and consequently, ruminal age-dependent onset of PDF degradation of a mixture of different fragment sizes results in an age-dependent rate of degradation of the more rapidly degrading of two subentities of PDF. Models are proposed that assume a tau before onset of simultaneous degradation of PDF from two pools characterized as having gamma-modeled age-dependency and age-constant rates. The ruminal age-dependent pool seems to be associated with the faster-degrading pool, and its rate parameter increases with range in MRA in the population of fragments. Conceptually, the ruminal age-dependent rate parameter for PDF degradation seems to represent a composite of several effects: 1) effects of the size-dependent tau; 2) range in MRA of the population of ingestively masticated fragments; and 3) subentities of PDF that degrade via more rapid age-dependent rates compared with subentities of PDF that degrade via age-constant rates. The estimated fractional rates of ruminative comminution of ingestively masticated fragments (0.060 to 0.075/h) were of a magnitude similar to the mean fractional rates of PDF digestion (0.030 to 0.085/h), which implies that ruminative comminution may be first-limiting to fractional rate of PDF digestion. The in vivo roles of ingestive and ruminative mastication of fragments on PDF degradation must be considered in any kinetic system for estimating PDF digestion in the rumen. These results and others in the literature suggest that the rate of surface area exposure rather than intrinsic chemical attributes of PDF may be first-limiting to degradation rate of PDF in vivo.     

Mechanism of Action of Probiotic Function of Lactobacilli

乳酸杆菌作为益生菌广泛用于人和动物.本文综述了乳酸杆菌改善宿主健康的机制.乳酸杆菌可通过产生抗菌物质如乳酸、过氧化氢、细菌素,或者通过竞争营养或肠道黏附位点来抑制致病菌;通过诱导黏附素的分泌或阻止细胞凋亡而增强肠道的屏障功能,从而保护肠道.文章重点讨论了乳酸杆菌表面成分(表面蛋白、脂磷壁酸和肽聚糖)与肠道受体(C型凝集素受体、Toll样受体和Nod样受体),阐述了他们结合后启动免疫调节信号,调控肠道免疫功能以发挥改善健康作用的机制.     

中华人民共和国农业部公告 第267号

为贯彻落实《兽药生产质量管理规范》(简称《兽药GMP》),进一步推动兽药GMP实施进程,我部制定了《兽药生产质量管理规范检查验收办法》,现予公告。本公告自2003年6月1日起施行。附件:兽药生产质量管理规范检查验收办法二○○三年四月十日第一章 总则 第一条 为推动《兽药生产质量管理规范》(以下简称兽药GMP)的实施,规范兽药GMP检查验收工作,制定本办法。 第二条 农业部负责全国兽药GMP管理和检查验收工作;负责制修订兽药GMP检查验收管理规定;负责兽药GMP检查员队伍建设和监督管理工作,负责国际兽药贸易中GMP互认工作。 …