不同培养条件下小鼠体外胚泡着床模型的研究

用对比的方法观察不同培养条件对小鼠体外胚泡着床的影响,从而建立在体外研究着床机制的简易着床模型。在无血清单独培养系统、子宫内膜上皮细胞(EEC) 无血清共培养系统、EEC 3%胎牛血清(FCS)系统和EEC 0.4%牛血清白蛋白(BSA)系统中分别移入胚泡,观察并统计脱带率、粘附率和扩展率。结果显示后面两组的脱带率、粘附率、扩展率明显高于前面两组,差异显著(P<0.05);而EEC 3?S共培养组的脱带率、粘附率、扩展率和EEC 0.4%BSA共培养组相比,差异不显著(P>0.05)。因此胚泡与子宫内膜上皮细胞用FCS共培养与用BSA共培养都是比较理想的着床模型,可以用来体外研究着床的影响因素。     

多胺处理对小鼠子宫内膜上皮细胞的影响

[目的]检测多胺处理对小鼠子宫内膜上皮的影响。[方法]低浓度的腐胺、亚精胺、精胺处理小鼠子宫内膜上皮细胞,利用实时定量PCR检测多胺处理后多胺代谢相关酶类mRNA水平的变化,利用细胞计数、MTT法、流式细胞分析检测细胞增殖能力。[结果]腐胺处理上皮细胞可造成SAMDC、SMO、SMS、ODC、PAO mRNA水平显著下降;亚精胺处理上皮细胞可造成SAMDC、SRM、ODC mRNA水平显著下降,SSAT mRNA水平显著上升;精胺处理上皮细胞可造成SAMDC、SRM、ODC mRNA水平显著下降,SMO、PAO、SSAT mRNA水平显著上升。腐胺和亚精胺可促进子宫内膜上皮细胞的生长和活力增加,但精胺可显著降低细胞生长和活力。[结论]多胺处理可引起子宫内膜上皮细胞内多胺相关酶类mRNA水平的变化,对细胞增殖能力有重要的调节作用。     

胚胎着床过程中MMPs对子宫内膜重塑的作用研究进展

胚胎着床是一种细胞侵袭和转移的正常生理过程,涉及细胞外基质的降解和重塑、胎盘绒毛血管的发生、子宫螺旋动脉的重建等,在基质金属蛋白酶、组织金属蛋白酶抑制剂以及其他许多因子的调控下,对子宫内膜细胞外基质进行有序地降解和重塑。对MMPs参与胚胎着床中子宫内膜重塑过程中的作用及其引起细胞外基质的变化情况进行了综述。     

水牛胚胎附植过程中瘦素及其受体在子宫内膜中的表达

[目的]探讨瘦素及其受体ob-Rb在水牛子宫内膜中的表达规律及其对水牛胚胎附植的影响。[方法]母水牛经孕马血清促性腺激素(PMSG)超排后与公牛交配,分别在交配后第0、5、7、9和15天各屠宰10头水牛,分别取胚胎附植部位的子宫组织,提取瘦素及其受体总RNA。利用RT-PCR方法检测不同时期瘦素mRNA及其受体表达情况。[结果]瘦素在胚胎附植过程中在水牛子宫内膜都有表达,各时期的表达水平差异不明显(P>0.05),Ob-Rb在胚胎附植过程中亦有表达,但是交配后第7、9和15天的表达水平与0和5天差异显著(P<0.05),并且在妊娠期0～7天内表达水平上升,7天达到峰值,然后下降。[结论]瘦素及其受体Ob-Rb可能不仅参与胚胎的附植,而且也可能参与附植后胚胎的生长发育。     

反刍动物的胚胎着床与妊娠识别过程的研究进展

反刍动物的胚胎着床与妊娠识别是个复杂的生理过程，这一过程受多种细胞因子和生殖激素调控。文中叙述了各种细胞因子和生殖激素对妊娠建立和维持的调控作用。     

水稻种子胚人工老化过程中蛋白质差异表达分析

采用2-DE蛋白质双向电泳技术,对不同老化程度水稻种子的胚蛋白质进行了比较研究,采用17 cm、pH 3～10 IPG胶务,上样量1 mg蛋白,检测到约320个蛋白质点,对其中11个重复性比较好且差异表达在2倍以上的蛋白质点进行胶内酶切后,采用基质辅助激光解析分离飞行时间质谱进行肤指纹图谱分析,然后进行数据库搜索.其中2个蛋白质点分别与含有VHS,ENTH和ANTH结构域蛋白及异戊烯转移酶蛋白相匹配.舍有VHS,ENTH和ANTH结构域蛋白能介导蛋白的内吞作用、增加膜的通透性且具有生长抑制活性功能.异戊烯转移酶蛋白的REF和SRPP共有保守域存在于部分与逆境相关的蛋白中,其中的SRPP广泛存在于动、植物中,与植物的抗逆境反应具有一定关系.结果表明:含有VHS,ENTH和ANTH结构域蛋白质的上调表达与异戊烯转移酶蛋白的下调表达可能与水稻种子的快速老化有关,但它们在老化过程中所起的作用,尚需进一步研究.     

小鼠胚胎冷冻和重复冷冻的研究

研究了不同冷冻方法对小鼠胚胎的冷冻保护效果及能否进行重复冷冻、重复冷冻后胚胎的继续发育率情况.采用乙二醇(1.8 mol/L、2.7 mol/L、3.6 mol/L、4.5 mol/L)和EFS玻璃化液(EFS20、EFS30、EFS40)对小鼠的桑椹胚和囊胚进行程序化冷冻和细管法玻璃化冷冻并再进行重复冷冻.结果表明以1.8 mol/L EG和EFS30对小鼠的胚胎冷冻效果最好,一次冷冻解冻后的发育率桑椹胚分别为92.5%和91.5%,囊胚分别为82.8%和81.3%,两种冷冻方法差异不显著(P>0.05).经1.8 mol/L EG首次冷冻再经EFS30重复冷冻的效果最好,桑椹胚和囊胚的发育率分别为53.8%和33.9%.     

小鼠胚胎卵巢体外培养中卵细胞的生长及其数量的调节

利用胚胎卵巢体外长期培养技术研究了小鼠卵巢中卵细胞的生长发育状况。材料取自B6D2雌小鼠F1代胚胎，服龄为11．5日和13．5日。用Orcein染色法鉴别雌雄。分离出的卵巢培养12～14d。5d后换一次培养液，以后每2d换1次。培养8d后，13．5日龄胚胎卵巢中卵细胞已形成与体内相似的有规则的分布。在卵巢皮质部有大量的卵母细胞和少量体细胞，而在髓质部只有少量的卵母细胞和大量的体细胞。大量的未生长的小卵母细胞（直径＜25μm）紧密地分布在皮质的外侧，而生长印母细胞则主要分布在皮质的内侧和髓质。11．5日龄胚胎卵巢经过10～12d培养，没有形成上述分布规律，所有观察到的卵细胞都是生长中的卵母细胞。卵细胞数量也显著低于13．5日龄胚胎的卵巢（34．4±6．53比566．7±49．5）。用IGF－I和FSH处理11．5日龄胚胎卵巢可显著增加其卵细胞的数量（分别为88对55，P＜0．01和140对20，P＜0．005）。较老龄的胚胎卵巢组织对于11．5日龄胚胎卵巢卵细胞数量均有促进作用，其中以16．5日龄胚胎卵巢的作用较强（165对65，P＜0.005）。实验结果表明小鼠胚胎发育到达11．5～13．5日龄时期对于卵巢来说是获得形成卵巢内卵细胞分布规律能力的重要时期。11．0日龄胚胎卵巢缺乏某些因子的作用，因而不能在体外正常发育。     

选择素及其配体在哺乳动物胚胎着床过程中的作用

选择素是一种非免疫来源的多价糖类结合蛋白,为细胞粘附分子(celladhesionmolecules,cAMs)超家族的一员,选择素家族有3个结构类似的成员:E-选择素、L-选择素、P-选择素,它们在炎症发生时可介导白细胞与血管内皮细胞之间、白细胞与白细胞及白细胞与血小板之间的粘附。近年来研究发现,选择素及其配体还在精卵识别、滋养层细胞和子宫内膜的相互识别、滋养层细胞侵入、胎盘形成等过程中发挥重要作用。在此,主要对E-选择素、L-选择素及它们的配体在哺乳动物胚胎着床过程中发挥的作用及其表达调节作一综述。     

猪子宫内膜基质细胞和腺上皮细胞的分离培养

为了获得高纯度的猪子宫内膜基质细胞和腺上皮细胞,对猪子宫内膜进行胶原酶消化,分离基质细胞和腺上皮细胞进行体外培养,研究其生长特性.结果表明:猪子宫内膜组织在37℃、通过1 g/L胶原酶Ⅰ消化90 min可以获得游离的腺体,对腺体进行培养时上皮细胞比例可达70％以上.培养过程中采用差速消化和差速贴壁可以成功分离腺上皮细胞和基质细胞.基质细胞最适贴壁时间为25 min,腺上皮为3h.纯化的基质细胞生长迅速,可传5代以上,上皮细胞生长缓慢,并且成片脱落.     

肉苁蓉及淫羊藿对小鼠早期胚胎体外发育的影响

研究肉苁蓉及淫羊藿对小鼠早期胚胎体外发育的影响.试验选取6～8周龄昆明小鼠早期胚胎,以不添加中药培养液组为空白对照,分以下试验组:Ⅰ组:早期胚胎在纯培养液M16+5％FBS( M1)与M16+5％FBS+EDTA+牛磺酸(M2)中的体外发育情况;Ⅱ组:早期胚胎添加至中药体积浓度为0.1％的M1与M2培养液中.Ⅲ组:早期...     

应用巢式及复合PCR对小鼠早期胚胎进行性别鉴定

根据小鼠SRY基因，设计并合成内外两对巢式PCR引物；同时。根据ZFY—ZFX基因的同源性，设计合成其共同的巢式PCR引物，对昆白小鼠组织DNA样品进行了性别鉴定。雄性样品可扩增262bp的SRY基因和137bp的ZFY—ZFX基因片断，而雌性样品只能扩增137bp的ZFY-ZFX基因片断，其鉴定结果与已知性别一致。将2-细胞、4-细胞、8-细胞和16细胞胚胎视为微量细胞样品进行PCR扩增，通过常规PCR与巢式PCR、复合PCR的比较。确立了巢式及复合PCR的扩增体系。结合核型分析和PCR法共鉴定21枚胚胎，其中雄性12枚，雌性8枚，鉴定准确率为95．2％。     

FCS和BSA对小鼠早期胚胎体外培养的影响

本实验是在CZB和Whitten’s Medium 2种培养液中添加胎牛血清(FCS)和牛血清白蛋白(BSA),比较它们对小白鼠早期胚胎体外发育的影响。结果如下:在培养注射HCG后37～39h的小鼠胚胎时,添加FCS的CZB培养液中通过发育阻断期的胚胎和发育到囊胚的胚胎均明显高于添加BSA的CZB培养液(80.9%、64.3%和41.7%、29.6%),差异显著(P0.05);当用上述液培养注射HCG后44h的小鼠胚胎时,不管是进口培养皿还是国产培养皿,胚胎发育率的差异均不显著(P0.05);在用CZB和Whitten’s培养液分别添加FCS和BSA后,培养注射HCG后44h2-细胞小鼠胚胎时,不论添加FCS还是BSA,在CZB培养液中胚胎发育率均高于Whitten’s培养液(P0.05),但添加FCS和BSA之间的差异不显著(P0.05)。     

小鼠超数排卵与早期胚胎体外培养效果研究

为探讨冲胚方法对小鼠超数排卵效果的影响,分别采用子宫切碎法与子宫冲胚法对超排小鼠进行了冲胚。结果表明:子宫冲胚法的平均采卵数和平均获胚数极显著高于子宫切碎法(P0.01),而平均可用胚数显著高于子宫切碎法(P0.05),两种方法的平均未受精卵数则差异不显著(P0.05),说明冲胚方法对小鼠超数排卵效果的影响显著,且子宫冲胚法明显优于子宫切碎法。小鼠早期胚胎发育观察结果表明:超排处理后,在公母鼠合笼后76~79.5 h采胚,胚胎大多处于桑椹胚期,而在公母鼠合笼后88~91.5 h采胚,胚胎大多处于致密桑椹胚期与囊胚期;采用TCM199+15%胎牛血清培养液对小鼠胚胎进行体外培养是可行的。     

C-erbB2蛋白在小鼠围着床期子宫中的表达和定位

为研究C-erbB2蛋白在小鼠围着床期子宫中的蛋白定位,通过免疫组化方法检测C-erbB2蛋白在围者床期小鼠子宫中定位情况.研究结果表明:在未孕子宫和空白对照组子宫中未见C-erbB2蛋白的表达,第1～3 d子宫中C-erbB2蛋白主要分布在子宫内膜腔上皮和腺上皮细胞胞膜上,子宫内膜基质细胞中未见表达,第4～5 d子宫中C-erbB2蛋白除了表达在子宫内膜腔上皮和腺上皮细胞胞膜上,上皮下基质细胞膜上可见弱阳性表达,第6～8 d的子宫中C-erbB2蛋白主要分布在子宫内膜腔上皮和腺上皮细胞以及围绕着床位点的蜕膜细胞胞膜上,各组肌层均未见阳性表达,C-erbB2蛋白在围着床期小鼠子宫组织中的表达呈规律性变化.     

牛磺酸对昆明小鼠早期胚胎体外发育和着床的影响

本研究主要探讨了牛磺酸对昆明(KM)小鼠体外胚胎发育及对胚胎着床的作用。在mKSOM(modified potassium simplex optimized medium)胚胎体外培养液中分别添加不同浓度牛磺酸,培养24、72 h后分别统计4-细胞率、囊胚率、囊胚总细胞数;采用子宫角注射的方法,研究牛磺酸转运抑制剂β-丙氨酸对孕D9胚胎着床数的影响。结果表明,添加10 mmol/L牛磺酸培养液组的胚胎4-细胞率高于对照组(P<0.05),囊胚率与囊胚总细胞数明显高于对照组(P<0.01)。子宫角注射β-丙氨酸(20 μg/mL)显著降低D9着床的胚胎数。本研究初步明确了牛磺酸对小鼠体外胚胎发育及对胚胎着床的影响,为进一步研究胚胎发育和着床提供参考。     

小鼠睾丸间质细胞的分离培养

寻求一种简单有效的方法分离纯化睾丸间质细胞并寻求较适宜的培养条件。采用机械撕碎、密度梯度离心等分离、纯化细胞,设对照组寻求较适宜的培养条件。刚分离的细胞经苔盼蓝染色,存活率〉90%;体外培养的细胞形态完整、增殖速度快、贴壁生长状态良好。用17-α羟化酶和用雄激素结合蛋白RT-PCR扩增进行纯度鉴定,前者出现特异片段,后者未出现。该方法简单、经济、快速、有效,适合睾丸间质体外分离培养。     

兔脂肪间充质干细胞分离培养及鉴定

为了建立一种体外培养兔脂肪间充质干细胞(ADSCs)的方法,在无菌条件下取家兔双侧腹股沟脂肪垫,Ⅰ型胶原酶消化后,用含10%胎牛血清的DMEM 培养液培养.细胞连续传代后,MTT法检测第3、5、10代细胞的增殖情况.采用油红染色法和Von Kossa染色法观察第3代ADSCs向成脂和成骨方向分化情况,并采用流式细胞仪分析细胞表面标志.结果显示,第3、5、10代的ADSCs生长曲线并无显著差异,细胞增殖较快;ADSCs成脂诱导后油红染色阳性,成骨诱导后Von kossa染色形成典型的黑色钙化结节.ADSCs 表面标志检测结果为:CD29 和CD90阳性,CD45和CD80阴性.成功分离和培养了兔的ADSCs,其具有成脂和成骨潜能,可作为组织工程的种子细胞.     

维生素E对附植前小鼠胚胎发育与一氧化氮生成的影响

为了探讨维生素E对一氧化氮(NO)的产生及其对早期胚胎发育的影响，用Griess试剂法检测了附植前小鼠胚胎中一氧化氮的生成情况。结果表明，附植前胚胎中有NO的产生，且从第1天到第3天有逐渐上升的趋势，第4天有所下降，用抗氧化剂维生素E处理后，NO的生成量下降，表明在附植前小鼠胚胎发育中维生素E对NO的产生可能起到一定的抑制作用。     

脂肪酸结合蛋白4在小鼠子宫蜕膜中的表达

[目的]检测脂肪酸结合蛋白4(FABP4)在小鼠子宫蜕膜细胞中的表达。[方法]获取正常的小鼠子宫蜕膜组织和人工诱导蜕膜化组织,同时利用酶消化分离小鼠子宫内膜基质细胞,进行体外诱导蜕膜化,利用实时定量PCR检测脂肪酸结合蛋白4在子宫蜕膜组织细胞中的表达。[结果]FABP 4在小鼠正常子宫蜕膜组织、人工诱导蜕膜化组织及子宫内膜蜕膜化基质细胞中的表达水平均显著高于对照组。[结论]FABP4可能参与了小鼠子宫内膜蜕膜化过程,为研究蜕膜化机理奠定了基础。